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目的:建立一种快速检测牛结核抗体的新方法,用以诊断牛结核病。方法:利用胶体金免疫层析技术原理,用大肠杆菌表达的牛分枝杆菌重组抗原MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果:粒径为40nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高;胶体金最佳标记pH值为6.0;MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg;MPB70抗原的最适包被浓度为3.0mg/mL;抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5mg/mL;交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较实验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分枝杆茵分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。结论:快速检测牛结核抗体的胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核根除计划中具有良好的应用前景。 相似文献
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用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5).其细胞培养上清ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水ELISA效价分别为1:512 000和1:128 000.亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgGl和IgG2a.ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好.2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L.这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础. 相似文献
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为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株.其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1 024 000和1∶2 048 000;McAb 1A5和8H6 的相对亲和力分别为0.9 mg/L和0.7 mg/L.间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好.这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础. 相似文献
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为验证不同除草剂对土壤微生物分泌蛋白酶活性的影响,以高有机质土壤中分离出的3种产蛋白酶细菌为材料,采用干酪素平板透明圈法研究二甲戊灵、异丙甲草胺和精喹禾灵3种除草剂对3种细菌蛋白酶活性的影响。结果表明,从土壤中分离的3种产蛋白酶活性高的细菌均为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌,其中以蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的蛋白酶活性最高;二甲戊灵浓度低于0.198 mg/m L时不能抑制蜡样芽孢杆菌和NX-3菌株的蛋白酶活性,但能抑制短小芽孢杆菌(B.pumilus)的蛋白酶活性;异丙甲草胺浓度低于0.36 mg/m L时不能抑制蜡样芽孢杆菌的蛋白酶活性;低浓度的精喹禾灵对3种芽孢杆菌的蛋白酶活性都有很强的抑制作用。综上,二甲戊灵、异丙甲草胺和精喹禾灵3种除草剂对这3种芽孢杆菌的蛋白酶活性均有影响,且除草剂浓度越高,抑制作用越强。 相似文献
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对烟草种子纯度鉴定的常规鉴定方法、电泳鉴定方法、DNA分子标记鉴定法、及自动化技术在烟草种子纯度鉴定方面的研究及应用进行了介绍,并分别讨论了各种方法的优缺点及其研究进展。 相似文献
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