吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选   总被引：1，自引：1，他引：0  

李有全  罗建勋  高金亮  关贵全  马米玲  刘志杰  刘军龙  刘爱红  任巧云  党志胜  鲁炳义  刘光远  白启  殷宏 《中国农业科学》2009,42(1):331-339

 【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo（dT）引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库的滴度为8.2×108 PFU?ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。  相似文献   

莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫在我国的分离及形态学观察   总被引：6，自引：2，他引：4  

殷宏  刘天斌 《中国兽医科技》1997,27(10):7-9

在甘肃省庆阳地区的发展及病愈的小尾寒羊血液中分离出２种巴贝斯虫并进行了形态学观察，初步证实该地区“坏肠子”病的病原为巴贝斯虫。一种小型虫体鉴定为羊巴贝斯虫，另一种为大型虫体，鉴定为莫氏巴贝斯虫，含羊巴贝斯虫的血液注射给除脾羊后，第１４ｄ血涂片中红细胞的染虫率达最高点（为０．５％），之后逐渐下降，感染羊自然耐过，含有混合虫种的血液注射给易感除脾羊后，红细胞染虫率迅速上升到３０．０％，感染后第６ｄ羊因  相似文献   

青海血蜱cDNA表达文库的构建     

高金亮  关贵全  马米玲  刘志杰  党志胜  刘爱红  李文卉  任巧云  罗建勋  殷宏 《畜牧兽医学报》2005,36(11):1187-1191

在无RNA酶污染的环境下摘取半饱血青海血蜱唾液腺、马氏管和卵巢等器官,从中提取RNA,进而纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成青海血蜱的cDNA表达文库。经测定,所构建青海血蜱cDNA文库的库容量约为2×106PFU/mL,重组率为100%,扩增后文库的滴度为8×109PFU/mL。通过对该文库的免疫学筛选,获得一个编码青海血蜱肌球蛋白碱性轻链的全长cDNA序列。所有结果显示,青海血蜱cDNA表达文库已成功构建。  相似文献   

用溶血素从感染红细胞分离羊泰勒虫裂殖子   总被引：1，自引：0，他引：1  

李有全  罗建勋  关贵全  马米玲  高金亮  刘志杰  党志胜  刘爱红  刘军龙  任巧云  鲁炳义  白启  殷宏 《畜牧兽医学报》2007,38(10):1093-1097

用嗜水气单胞菌产生的细胞毒素—溶血素Ah-1,裂解羊泰勒虫感染的红细胞,通过Percoll密度梯度离心分离羊泰勒虫裂殖子,建立了一种自感染红细胞中分离泰勒虫裂殖子的快速方法。光学显微镜观察显示,所分离的羊泰勒虫裂殖子基本保留原有的正常形态,并从宿主细胞成分中游离。  相似文献   

木霉菌配合肥料施用对玉米产量及品质的影响     

吴旭东刘庆叶  孙菲菲陈莉莉 郭荣王克春  殷宏宝王东升 李伟明 《贵州农业科学》2014,48(10):15

为玉米生产中木霉菌的科学应用及肥料的合理施用提供理论依据,研究6个不同施肥处理（T1,不施肥料;T2,常规施肥;T3,减施40%复合肥;T4,减施40%复合肥+生物有机肥;T5,常规施肥+木霉菌;T6,减施40%复合肥+木霉菌）对玉米产量与品质的影响,分析适宜鲜食糯玉米的施肥配方。结果表明：施用木霉菌可有效增加鲜食糯玉米的茎粗、穗数、叶片叶绿素含量、产量及籽粒中可溶性蛋白、可溶性糖、维生素C的含量;经济效益最高的为T6处理,其在T1基础上的新增纯收益达598.09元/667m 2,新增纯收益是T2处理的1.55倍。鲜食糯玉米生产施肥建议采用减少40%复合肥与木霉菌配施的高产优质可持续的施肥配方。  相似文献   

羊泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆及真核表达载体的构建   总被引：1，自引：1，他引：0  

刘爱红  关贵全  刘军龙  李有全  马米玲  牛庆丽  任巧云  殷宏  罗建勋 《动物医学进展》2009,30(12):17-20

提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-T Easy 载体上,经PCR 和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析.随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-MPSP-P32,转化大肠埃希菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确.  相似文献   

采用PCR方法对我国蜱伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查     

牛庆丽  关贵全  杨吉飞  付钰广  马米玲  李有全  刘军龙  郝雪峰  罗建勋  殷宏 《中国预防兽医学报》2010,32(12)

通过调查我国已有的4种蜱伯氏疏螺旋体的感染情况,以进一步阐明莱姆病在中国的分布与流行状况。本研究通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)基因片段的通用引物,获得1对特异性引物,优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法,其扩增片段大小为307 bp。该方法可检测出10 pg的阿氏疏螺旋体(Ba)、1 pg的伽氏疏螺旋体(Bg)和0.01 pg的狭义伯氏疏螺旋体(Bb)的3种不同基因型的伯氏疏螺旋体的OspA基因组DNA,表明其敏感性较好,适用于蜱感染伯氏疏螺旋体状况的调查。本研究从我国7个省采集到的667只蜱,进行伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查,分类鉴定表明这些蜱分属革蜱属、血蜱属、牛蜱属和扇头蜱属。PCR检测所获数据表明它们的感染率分别为4%(10/264)、6%(11/137)、31.4%(59/185)和31%  相似文献   

小亚璃眼蜱和亚洲璃眼蜱对环形泰勒虫传播能力的研究     

罗建勋  殷宏等 《中国兽医科技》2003,33(2):22-23

将实验室培养的小亚璃眼蜱（Hyalomma anatolicum anatolicum)和亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum asiaticum)清洁幼虫和若虫饲喂于感染环形泰勒虫的牛体，收集饱血幼虫和若虫，用所孵化的若虫和成虫感染试验牛。结果显示，小亚璃眼蜱幼虫、若虫阶级感染，所发育之若虫、成虫均可传播环形泰勒虫；而亚洲璃眼蜱各阶级的传播试验结果均为阴性。  相似文献   

环形泰勒虫TRAP-A蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建与鉴定     

田占成  独军政  高闪电  杜晓悦  于瑞明  刘光远  罗建勋  殷宏 《中国动物传染病学报》2018,(1)

为了筛选出环形泰勒虫TRAP蛋白在虫体入侵媒介蜱唾液腺过程中相互作用蜱源蛋白,构建了能够用于酵母双杂交筛选系统的重组诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A。本研究以环形泰勒虫裂殖体为材料,根据环形泰勒虫TRAP-A结构域的基因序列设计引物,经过PCR扩增获得576 bp的基因片段,将其连接到线性化载体pGBKT7上。经双酶切鉴定和序列分析以及重组诱饵质粒在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性及其表达情况检测,结果显示,本研究成功构建了酵母双杂交重组诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A,构建的诱饵质粒对Y2HGold酵母菌无自激活活性和细胞毒性,且构建的诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A可以在Y2HGold酵母菌内正确表达。表明所构建的诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A可以用于筛选小亚璃眼蜱唾液腺酵母双杂交c DNA文库,获得可能与环形泰勒虫TRAP-A蛋白相互作用的蜱源蛋白。  相似文献   

非洲猪瘟病毒RNA聚合酶亚基D205R基因生物信息学分析及多克隆抗体制备     

王国超  赵亚茹  张忠辉  张玉龙  白鸽  耿抒贤  樊洁  杨吉飞  关贵全  殷宏  罗建勋  牛庆丽 《畜牧兽医学报》2023,(5):2042-2049

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录，属于ASFV RNA聚合酶，且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似，为深入了解pD205R结构，功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析，利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析，并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示：在不同基因型间D205R基因高度保守；利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C₁₀₈₈H₁₇₁₂N₂₇₈O₂₉₅S₈,属亲水性蛋白，稳定性差；二级结构及三级结构预测显示，α螺旋是其主要结构形式，占比为35.12%;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板，构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta (DE3)感受态细胞，经IPTG...  相似文献