高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅱ.不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响   总被引：2，自引：1，他引：2  

吴关庭  胡张华  陈笑芸  郎春秀  王伏林  金卫  陈锦清  夏英武 《浙江农业学报》2006,18(5):369-372

以从4个草坪型高羊茅品种成熟种子直接诱导获得的初始愈伤组织为起始材料，研究3种因素对胚性愈伤组织继代发生的影响。结果表明，继代培养基中添加BAP和硫酸铜以及提高蔗糖浓度均能促进胚性愈伤组织形成，提高胚性愈伤组织频率，其适宜浓度分别为：BAP0．1～0．2mg/L，硫酸铜2．5mg/L，蔗糖60g／L。这3种因素中，又以添加BAP的效果最好，添加硫酸铜次之。4个供试品种间胚性愈伤组织发生能力存在明显差异。  相似文献   

农杆菌介导高羊茅遗传转化体系的建立   总被引：3，自引：5，他引：3  

吴关庭  胡张华  郎春秀  陈笑芸  王伏林  金卫  陈锦清  夏英武 《核农学报》2005,19(5):340-346

为建立农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导高羊茅(Festuca arundinaceaSchreb.)遗传转化体系,以草坪型高羊茅品种凌志的胚性愈伤组织为受体材料,通过gus基因瞬时表达检测,研究了多种因素对农杆菌介导转化的影响。结果表明,农杆菌介导高羊茅胚性愈伤组织转化的适宜条件为:愈伤组织在含BAP和NAA各0.5mg/L的培养基上预培养3d;菌液浓度OD600值0.7,感染时间15min;农杆菌预培养基和悬浮培养基以及共培养基中添加100μmol/L的乙酰丁香酮;共培养温度23℃,共培养时间3d,共培养基pH值5.2。不同浓度潮霉素筛选效果试验表明,采用低浓度(50mg/L)潮霉素连续筛选,再生获得的转基因植株数最多,因此是最为可取的筛选方式。  相似文献   

转基因植物中CaMV35S和tNOS元件的4种定性PCR检测方法的比较   总被引：2，自引：0，他引：2  

徐俊锋  王鹏飞  李玥莹  汪小福  陈笑芸  彭城  缪青梅 《农业生物技术学报》2015,23(3):397-407

花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)和胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,tNOS)是转基因产品筛选检测中的首选参数,日常检测中发现,个别标准中用于筛选检测这两种元件的引物存在非特异性扩增和灵敏度差的问题。本研究收集了国内外标准中常用的扩增片段分别为195、165、147和123 bp的CaMV35S和扩增片段分别为180、172、165和118 bp的tNOS各4对引物,应用普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR方法,对8对引物的特异性、灵敏度及在加工品中的扩增性进行了测试和适用性评价。结果表明,CaMV35S 165和147 bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;195bp引物扩增性稍差,且经常出现非特异性扩增;123bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。tNOS 172和165bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;180bp引物扩增性较差,且易出现非特异扩增;118bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。本研究通过普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR对不同国标中出现的引物进行适用性评价,为转基因产品的检测监管提供可靠技术依据。  相似文献   

甘蓝型油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究分析     

汪小福  刘仁虎  陈笑芸  王伏林  关晶晶  陈锦清 《浙江农业学报》2010,22(3):0

为了解甘蓝型油菜(Brassica napus)中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的表达和分布情况,文章首先分析了油菜和拟南芥中PEPC基因之间的关系,同时参照拟南芥中4条PEPC基因扩增了针对甘蓝型油菜的探针,Southern blot结果表明,甘蓝型油菜中PEPC基因肯定多于4条,而RT-PCR分析了不同时期种子中的PEPC基因的表达情况,表明PEPC基因在种子成熟过程中油脂、储藏蛋白质等贮存物质的积累有一定作用。  相似文献   

基因组编辑技术及其检测鉴定方法研究进展     

丁霖  彭城  殷海军  陈笑芸  徐俊锋  李玥莹 《浙江农业科学》2019,60(2):274-280

基因编辑技术指能够对目标基因进行编辑,实现对特定DNA片段的敲除、加入等技术。目前,该技术主要包括锌指蛋白系统、转录激活因子样效应核酸酶系统和成簇的规律间隔短回文重复序列系统,基本原理都是通过序列特异性核酸酶特异切割DNA靶位点,产生DNA双链断裂,诱导DNA的损伤修复机制,从而实现对指定基因组的定向编辑。本文概述了3种基因编辑技术的原理,对它们的优缺点进行比较,并阐述了CRISPR基因编辑技术在动物和植物育种中的应用,以及基于CRISPR技术的DNA分子检测新方法的建立和应用。其次,阐述了对CRISPR等基因编辑产品筛选和检测鉴定的方法,比较了几种筛选方法的检测周期、灵敏性、人工成本等。最后,对基因编辑技术的发展前景进行了展望。  相似文献   

铁皮石斛鉴定方法与技术的研究进展     

陈文强  汪小福  陈笑芸  彭城  徐俊锋  蔡健 《浙江农业科学》2022,63(2):299-304

铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物,具有滋阴除热、 生津养胃等功效.目前铁皮石斛市场上存在严重的掺假造假现象,迫切需要进一步发展铁皮石斛的鉴定方法和技术.本文对铁皮石斛现有的组织形态、显微鉴定、 理化分析鉴定和DNA分子生物学鉴定等主要方法和技术进行阐述,介绍了各鉴定方法和技术的发展历程及最新进展,着重分析了基于理化性...  相似文献   

昆虫抗白僵菌免疫应答及其在害虫防治中的应用潜力     

杨蕾  汪小福  魏巍  陈笑芸  彭城  徐晓丽  徐俊锋 《浙江农业学报》2024,(4):825-836

昆虫病原真菌白僵菌能成功侵染多种昆虫寄主并致其死亡,是农业生产中有效的生物杀虫剂。相应地,昆虫依赖多种策略抵御真菌感染,其中先天免疫防御是对抗真菌感染的重要手段。昆虫表皮是抵御真菌入侵的第一道屏障,表皮和外分泌腺可分泌多种抑菌化合物降低真菌毒力,当真菌孢子进入血淋巴后,细胞免疫和体液免疫共同作用产生系统性免疫应答,表达的多种防御效应因子在细胞包囊、细胞凋亡、黑化反应中发挥功能。然而昆虫强烈的免疫反应影响田间施用白僵菌的效果,导致该真菌制剂应用的局限性。文章详细阐述昆虫感染白僵菌后的免疫应答机制,参与抗真菌免疫的基因与作用手段。该研究为了解昆虫抗真菌免疫机制提供了详实的基础,为合理改造白僵菌、有效提高白僵菌毒力水平提供坚实基础,为农业虫害治理提供新的策略。  相似文献   

转CBF1基因增强水稻的耐逆性   总被引：11，自引：1，他引：10  

吴关庭  郎春秀  胡张华  陈笑芸  王伏林  金卫  陈锦清 《核农学报》2006,20(3):169-173

为改良水稻(Oryza sativaL.)的耐逆性,以来源于成熟种子的胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法将拟南芥(Arabidopsis thaliana)耐逆相关CBF1基因导入粳稻品种秀水11基因组,经GUS组织化学染色、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得一批转基因植株。T1代检测结果显示,所转基因已遗传给后代,且大多数株系的分离比符合3∶1。试验表明,在高盐与高渗胁迫下,转基因株系较非转化对照具有显著或极显著生长优势,表现苗高负增长率较小,长出的根数较多,根长较长;经低温胁迫处理后,转基因株系的叶片相对电导率显著或极显著低于对照。这些结果证明水稻转基因株系的耐逆性得到了增强。  相似文献   

转基因大豆中外源基因g10evo-epsps的qPCR检测方法的建立和验证     

徐晓丽  纪艺  陈笑芸  王鹏飞  缪青梅  来勇敏  徐俊锋 《中国油料作物学报》2021,43(1):110-116

耐除草剂基因g10evo-epsps在我国转基因农作物研发中常常被用作目标性状基因或筛选标记基因,因此可作为转基因成分检测的重要筛查基因,但目前缺少相应的检测方法.本研究旨在建立g10evo-epsps基因特异性的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,从而为转基因大豆的监测提供一种稳定可靠的方法体系.本研究基于转基因...  相似文献   

高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅲ.多种因素对胚性愈伤组织分化的影响     

吴关庭  胡张华  陈笑芸  郎春秀  王伏林  金卫  陈锦清  夏英武 《浙江农业学报》2006,18(6):412-416

研究了多种因素对高羊茅胚性愈伤组织分化的影响。结果表明，BAP在高羊茅胚性愈伤组织分化中的作用要比KT大，但两者配合使用效果更佳，其适宜组合为2．0mg／L BAP＋0．5mg／LKT。在该细胞分裂素水平下，生长素NAA宜用0.5mg／L。胚性愈伤组织先在蔗糖浓度较高的分化培养基上预分化，以及经高渗预分化后的致密愈伤组织在琼脂浓度较高的分化培养基上分化，都能较好地促进愈伤组织植株再生，蔗糖和琼脂的适宜浓度分别为60和10g／L。分化培养基中添加脯氨酸导致总的愈伤组织再生率降低，但同时有减少白化苗再生的趋势。  相似文献