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系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素，并初步建立了水牛体细胞核移植的一整套程序。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞去核后，将经血清饥饿(0.5％FBs)培养2～9d、0．1mg／L Aphidicolin(APD)培养 0．5％FBs培养2～9d或一般培养法(10％FBS)培养的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞，直接注射到去核的卵母细胞质中，或注射到卵周隙中再经电融合(100V／mm，15μs，电脉冲3次)构建重构胚。重构胚经化学激活后(5pmol／L离子霉素5min，2mmol／L6-DMAP3h)培养7～8d，评定其胚胎发育能力。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg／L APD 0．5％FBs培养处理后的重组胚卵裂率，均极显著高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P＜0.01)，但囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0.1mg／L APD 0.5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异(63．06％比58．70％，P＞0．05)。以水牛颗粒细胞为核供体时，电融舍法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P＜0.05)，囊胚发育率无显著差异(P＞0.05)。培养3代和6代的水牛颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞，其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P＞0.05)；以这2种细胞不同培养代数作供体进行核移植时，各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异P＞0.05)。这些结果表明：(1)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；(2)0.1mg／L APD预培养处理供体细胞能提高水牛体细胞核移植的效果，但血清饥饿培养则无作用；(3)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞均可作供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法，但两者的总体效率相似。 相似文献
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本研究主要探讨氨基酸对水牛孤雌激活(PA)胚胎体外发育的影响.在SOF液中添加1.5%的MEM非必需氨基酸(NEAA)显著提高PA(79.8%vs 67.7%)胚胎的分裂率(P＜0.05),囊胚发育率和囊胚孵化率无显著差异;添加1.0%的EAA显著提高PA胚胎的囊胚孵化率(77.3%vs 43.3%,P＜0.05),但各组间的分裂率和囊胚发育率无显著差异;在改良SOF基础液中联合添加1.0%NEAA和2.0?A可显著提高孤雌激活胚胎的分裂率(84.4%vs 68.8%,P＜0.05),但囊胚发育率和孵化率均无显著差异. 相似文献
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牛卵母细胞的体外成熟 总被引：5，自引：1，他引：4
在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10、30、50μg/L表皮生长因子（EGF）,24 h检查成熟率。结果表明,添加10、30μg/L EGF组牛卵母细胞成熟率为79.8%、71.5%与对照组（未添加EGF）成熟率（70.4%）无明显差异（P〉0.05）,但EGF添加至50μg/L时牛卵母细胞第一极体（PB1）排出率显著提高,达85.4%（P〈0.01）;在此基础上,比较了成熟液中添加尿促性素（HMG）对牛卵母细胞体外成熟的影响,结果发现在含FSH和EGF的成熟液中添加HMG未能显著提高牛卵母细胞体外成熟效果（P〉0.05）;最后,比较了HMG对牛卵母细胞体外成熟的效果,结果发现单独添加HMG成熟效果显著高于FSH（P〈0.05）,表明成熟液中如不含其他生长因子,则单独添加HMG较FSH对牛卵母细胞体外成熟的效果好。 相似文献
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GMP玻璃化冷冻水牛GV期和MⅡ期卵母细胞 总被引：1，自引：0，他引：1
采用玻璃微细管法(Glass micropipette vitrification,GMP)冷冻了水牛GV期和MⅡ期卵母细胞。结果显示,GV期冻后卵母细胞的形态正常率,孤雌激活后的发育潜力均明显低于未冷冻组(P<0.05)。在进一步探讨不同发育阶段的水牛卵母细胞冷冻保存效果中发现,GV期卵母细胞的形态正常率,体外成熟后的孤雌激活分裂率和8-细胞率显著低于MⅡ期(P<0.05)。结果表明,水牛GV期卵母细胞冷冻的效果比MⅡ期差。 相似文献
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简要概括哺乳动物细胞核移植技术的应用前景，详细综述其目前存在的问题，认为对待细胞核移植技术的发展，应该理性分析。 相似文献
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供体细胞培养处理方法对水牛核移植效果的影响 总被引：4，自引：1，他引：4
以经常规培养法 (DMEM 10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM 0 .5 % FCS培养 5～ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM 0 .5 % FCS培养 1～ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ,分别采取带下注核法和胞质内注核法进行核移植。同一供核细胞各处理组间的核移植胚融合率 (以颗粒细胞作供核 )以及重组胚的囊胚发育率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但经 APD 0 .5 % FCS培养处理供体细胞核移植后的分裂率显著高于其他组 (P<0 .0 5 )。用 7%乙醇处理的成体耳部成纤维细胞进行核移植 ,其重组胚的分裂率和囊胚发育率与对照组 (不含乙醇 )均无明显差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 ,(1)血清饥饿处理水牛供体细胞对其核移植效果没有影响 ;(2 ) DNA合成抑制剂 APD结合血清饥饿培养处理水牛颗粒细胞和成体耳部成纤维细胞 ,可提高其核移植效果 ;(3)乙醇预激活处理水牛成体耳部成纤维细胞 ,对其核移植效果没有影响 相似文献
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EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子（EGF）,24h检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明：添加10ng/ml、30ng/ml EGF组牛卵母细胞成熟率较对照组（未添加EGF）无显著差异（79.8% vs 71.5% vs 70.4%,p>0.05）,但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%（P<0.01）;在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml 、50ng/ml EGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率（P>0.05）,但可显著提高其囊胚孵化率（P<0.01）。 相似文献
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澳洲荷斯坦奶牛MOET技术研究 总被引：5，自引：2，他引：3
为了快速扩繁良种澳洲荷斯坦奶牛的核心群,对澳洲荷斯坦奶牛MOET技术进行研究。结果表明,在不同月份超数排卵处理澳洲荷斯坦奶牛获得的总胚胎数和可用胚胎数,均无显著性差异（P〉0.05）;超数排卵处理不同生理阶段的澳洲荷斯坦奶牛,获得的总胚胎数差异不显著（P〉0.05）,但经产母牛获得的可用胚胎数明显多于青年母牛（P〈0.05）;而胚龄与受体母牛发情时间的同期性研究发现,桑椹胚和早期囊胚移植到发情后第7 d的受体母牛、囊胚移植到发情后第8 d的受体母牛、扩展囊胚移植到发情后第9 d的受体母牛,均可获得较高的胚胎移植受胎率和产犊率。 相似文献
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水牛卵母细胞成熟时间对核移植效果的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
主要探讨水牛卵母细胞的成熟时间对其体细胞核移植效果的影响,结果表明,在体外成熟(IVM16～24h)期间,不同的去核时间对水牛卵母细胞核移植后的融合率、分裂率和囊胚发育率都没有显著影响(P>0.05),但卵母细胞去核后的注核存活率,IVM16～18h组与IVM22～24h组有极显著差别(P<0.01)。经6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)抑制成熟培养的卵母细胞,再成熟培养16～18h后,与直接在体外成熟培养16～18h的卵母细胞的融合率、分裂率和囊胚发育率相比,均无显著影响(P>0.05)。水牛卵母细胞的成熟时间对其核移植效果无明显影响,6-DMAP可用于调整水牛卵母细胞的去核操作时间。 相似文献