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马立克病病毒囊膜糖蛋白E基因的克隆及序列分析 总被引：3，自引：1，他引：3
用聚合酶链式反应（PCR）技术，从中国广西分离的马立克氏病病毒（MDV）N株和G2株基因组DNA中，扩增出MDV糖蛋白E（gE）抗原基因片段的1500bp编码序列，将PCR扩增产物在KpnⅠ和HindⅢ位点克隆进pUC18质粒载体中，以Dig标记的gE PCR产物作为探针做斑点杂交及酶切分析选到含MDV gE基因的目的重组质粒pMNE、pMG2E。通过酶切位点分析显示，两毒株的gE基因内部酶切位点与MDV－GA国际标准强毒株的酶切位点基本一致。对重组pMNE、pMG2E质粒进行部分序列测定，并用DNA Star软件分析，结果表明：插入序列与发表的GA株gE基因序列具有高度同源性，gE基因为高度保守基因。 相似文献
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鹧鸪鸡伤寒沙门氏菌感染的诊断与防治 总被引：1，自引：0，他引：1
某鹧鸪养殖场饲养10 000只鹧鸪,240日龄发病,临床症状表现为病鹧鸪采食量突然下降,精神不振、羽毛蓬松杂乱、粪便呈稀白色,病程持续近一个月,死亡鹧鸪约200只.共送检30只,剖检病理变化主要为肝肿大、质地极脆易破裂,其中60%肝呈土黄色,20%血液稀薄,80%盲肠内有硬泥块样物质,20%眼周皮下水肿,30%肾肿大、有出血,30%泄殖腔有白色粪便.根据病史调查、症状观察、病理剖检、细菌分离以及染色镜检、生化试验、血清型鉴定一系列试验,诊断为由鸡伤寒沙门氏菌感染所引起的细菌性疾病.同时根据药敏试验结果对发病群进行治疗,使病情得到迅速控制,为该病的防治积累了一定的经验. 相似文献
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以马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648株基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)方法扩增出gE基因。将其插入到表达性质粒pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,转化大肠杆菌,经筛选、鉴定获得重组质粒,测序结果证明重组质粒的阅读框架不变,将其命名为pG648E。经SDS-PAGE电泳及Westernblotting分析,在82ku有GST-gE的蛋白带,重组质粒在大肠杆菌BL21中以融合蛋白的形式表达。结果表明:MDVgE基因原核表达成功。 相似文献
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应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致。将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac中,构建了转移载体pFastBac-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ。重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL。表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5d达到高峰。 相似文献
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由大肠杆菌感染引起鹅发病的情况很多，大多病程较长，死亡率较低，但大肠杆菌和巴氏杆菌混合感染后情况则发生变化。2004年2月底，江苏某鹅场有4300多只鹅发生了以精神沉郁、拉稀、呈急性发病死亡为特征的病例，根据临床症状、解剖观察病变、采集病料进行实验室诊断，确诊为鹅巴氏杆菌和大肠杆菌混合感染，现将诊治情况报道如下。 相似文献
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从具有小鹅瘟典型症状、病变的病死雏鹅病料中分离到疑似小鹅瘟病毒常州株GPV／JSCZ／2004／01。通过磷钨酸负染经透射电镜观察可见细小病毒样病毒粒子，取死亡胚尿囊液浓缩后与GPV阳性多抗血清作用显示有阳性琼扩线出现，通过GPV特异性引物和相应的PCR试验，扩增出了特异性的DNA条带。研究结果表明分离到小鹅瘟病毒常州株。对常州株第3代毒进行番鸭胚半数致死量（ELD50）测定，为10^-3．1／0．2mL。将分离毒GPV／JSCZ／2004／01感染鹅胚成纤维细胞（GEF）并连续传代培养，结果显示该毒株在细胞培养传代到第9代时能用单抗介导的间接免疫荧光试验检测到病毒在GEF的感染，表明产生了细胞适应毒（CZ—ca）。取第14代细胞毒（CZ—ca14）10倍比稀释测定TCID50，同时进行雏鹅致病性试验，结果显示细胞毒的TCID50为10^-9.4／0．2mL，对雏鹅的发病率和死亡率为0，但原始分离株的发病率和死亡率为100％。研究结果进一步证明小鹅瘟强毒株通过连续细胞传代培养可以达到致弱效果，为小鹅瘟病毒致弱研究提供了参考。 相似文献
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在构建鹅源腺病毒Y81G4株Hind文库的基础上,通过特定的引物采用PCR方法从腺病毒文库的A片段中扩增并序列分析鉴定了腺病毒的E3区.E3区二端分别是保守性较强的pⅧ基因和纤维蛋白基因.和人腺病毒E3区相比,鹅源腺病毒E3区具有以下二个显著特征:(1)长度较短,全长仅为238个核苷酸;(2)E3区不具有明显的编码框.本研究也进一步证实了此鹅源腺病毒应归类于Ⅲ型禽腺病毒. 相似文献
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鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的PCR扩增和克隆 总被引：2，自引：0，他引：2
通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增鸡贫血病毒（ＣＡＶ）衣壳蛋白基因（１，４ｋｂ），并将此基因克隆进ＰＵＣ－１８载体中。通过原位杂交、酶切分析、Ｓdisplay statusdisplay status 相似文献