PCR和核酸探针技术诊断MD和RE的比较研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

王桂军  韦平  李康然  左天荣  刘岳龙  金文杰  秦爱建 《中国预防兽医学报》2003,25(6):479-482

分别应用聚合酶链反应(PCR)技术和核酸探针的点杂交技术，对临床鸡肿瘤／可疑肿瘤病料分别进行马立克氏病(MD)和禽网状内皮增生症(RE)的检测。结果MD和RE的PCR检测阳性率分别为81．9％和53．3％，探针点杂交检测的阳性率则分别为77．1％和27．1％。研究的结果表明，两种检测技术都有很高的特异性，相比而言PCR技术检测的敏感性更高，而且更快速、操作更简便、成本更低。  相似文献   

抗禽流感病毒H5和H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制及应用   总被引：23，自引：0，他引：23  

秦爱建  邵红霞  钱琨  刘岳龙  金文杰 《中国预防兽医学报》2003,25(3):161-163

以禽流感题H5和H9亚型病毒分别免疫Balh／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0的骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI）检测细胞培养上清，结果获得了6株特异性单克隆抗体，其中抗禽流感题亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株3株，分别命名为4B6、4A3、3H1；抗H9亚型病毒血凝素单克隆抗体细胞株3株，命名为6E6、6B6和5B4。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为2^13-15，细胞培养上清抗体HI效价为2^7-8。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与试验的相应题或ID亚型病毒株发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综禽征病毒(EDS76)等反应。实验室检测结果证明，应用这些单克隆抗体能在24h内迅速检测出相应的禽流感病毒。所有这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作中发挥重要作用。  相似文献   

鸡贫血病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及其特性   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘岳龙  秦爱建  金文杰  叶建强  吉荣  崔治中  段玉友 《中国兽医学报》2003,23(1):30-32

将鸡贫血病病毒（chicken anaemia virus,CAV)VP2基因克隆入表达性载体PGEX-5X-3，在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠，制备抗CAV VP2的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞作间接免疫荧光试验（IFA）检测，结果为阳性，这表明表达产物保留了CAV相关的抗原特性，本研究为进一步探索CAV VP2的生物学特性奠定了基础。  相似文献   

雏鹅暴发鸭瘟病毒病     

贝怀国  冯连虎  张万红  刘岳龙 《养禽与禽病防治》2005,(12)

2004年6月,某养殖户的鹅群发生了以高热、流泪、排绿色粪便、两腿麻痹为特征的疾病,后经调查、诊治、病毒分离鉴定,确诊为雏鹅感染鸭瘟病毒。现将病例情况报道如下。1发病情况2004年6月某养殖户在饲养了1000只35日龄高邮鸭的同时,又购进隆昌鹅雏鹅700只,全群注射了抗小鹅瘟血清0.5m l/只。先是鸭群开始发病,鸭群发病后的第8天,鹅群(19日龄)也开始发病,并迅速波及到全群,先后用抗生素、磺胺类药物、抗小鹅瘟血清等治疗无效。发病至第6日送诊,已死亡506只,发病率80%,死亡率72.3%。2临床症状病程急,发病死亡快。主要表现为高热、食欲大减至不食…  相似文献   

鸡传染性腔上囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

李迎晓秦爱建  刘红梅邵红霞金文杰  刘岳龙 《中国兽医科技》2005,35(12):933-936

为了深入研究鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）VP2基因的结构和功能,利用Bac-to-Bac系统研制出含有VP2基因的重组杆状病毒rBac-VP2,将rBac-VP2感染Sf9细胞,并用抗IBDV VP2特异性单克隆抗体经间接免疫荧光试验检测,证实感染重组病毒Sf9细胞能高效表达IBDV VP2基因产物;Western-blotting分析结果表明,VP2基因表达产物的分子质量约为40 ku.  相似文献   

雏鸡脑炎型鸡白痢沙门氏菌感染的诊断与防治     

尹丽萍  刘岳龙  庄新娟  金文杰  于恩琪  夏良  杨铜  梁有志 《养禽与禽病防治》2015,(2):5-8

某黄鸡养殖农户4条大棚雏鸡总存栏量40 000只左右,在12日龄免疫后发病。临床症状表现为出现有神经症状的"扭头鸡",采食量下降,病鸡在跑动后有后蹲的姿势。第一条棚雏鸡先发病,随后3条棚雏鸡相继发病,病症相似。病程持续近10天,总死亡量约1 000只。根据发病背景、症状观察、病理变化、细菌分离及PCR试验、生化试验和血清型鉴定等一系列工作,诊断为由鸡白痢沙门氏菌引起的细菌性疾病。同时进行了病原菌的动物回归试验,在雏鸡体内成功复制出该临床疾病。根据药敏试验结果对发病鸡群进行治疗,使病情得到迅速的控制。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用     

刘红梅  秦爱建  许小琴  李迎晓  陈鸿军  叶建强  金文杰  刘岳龙  邵红霞 《中国预防兽医学报》2006,28(4):461-465

应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。  相似文献   

徐州地区鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验   总被引：16，自引：0，他引：16  

许金俊  范海峰  金文杰  刘岳龙  秦爱建 《中国预防兽医学报》2006,28(5):503-506

从徐州地区临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中分离到细菌21株，通过细菌形态、培养特怔、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌菌株，对不同地区分离到的21株菌进行了24种常用抗菌药物的药敏试验，结果该24个菌株对头孢类药物、红霉素、链霉素、妥布霉素、新霉素、氯霉素、泰乐菌素、痢特灵等几种药物敏感性较高，对喹诺酮类、强力霉素、丁安卡那霉素、林肯霉素、庆大霉素、氟苯尼考、利福平、复方新诺明等均不同程度地产生了耐药性。不同地区分离到的鸭疫里默氏杆菌对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性，研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据.  相似文献   

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

叶建强  秦爱建  邵红霞  金文杰  刘岳龙 《中国兽医学报》2006,26(3):235-237

利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。  相似文献   

牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达     

许金俊  秦爱建  金文杰  刘岳龙 《中国兽医学报》2006,26(6):626-630

应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致.将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Ⅰ中,构建了转移载体pFastBac 1-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10 Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ.重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL.表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5 d达到高峰.  相似文献