鸡组织中多西环素残留量测定的高效液相色谱法建立     

张青  李慧素  张钧杰  吴宁鹏  彭丽  吴志明 《中国兽药杂志》2020,54(10):1-9

为检测鸡组织中多西环素残留,保障禽产品的质量安全,建立了鸡肌肉、肝脏、肾脏和皮+脂4种组织中多西环素残留量的高效液相色谱法。肌肉、肝脏、肾脏样品经Na_2EDTA-Mcllvaine缓冲液提取,硫酸和钨酸钠沉淀蛋白;皮+脂样品经二氯甲烷溶解后,Na_2EDTA-Mcllvaine缓冲液萃取,HLB固相萃取柱净化,高效液相色谱法测定,以0.01 mol/L三氟乙酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长为350 nm。结果表明:多西环素在0.05～5μg/mL范围内呈良好的线性关系,R~2大于0.999。本方法在肌肉组织中的检测限为25μg/kg,定量限为50μg/kg;在肝脏、肾脏和皮+脂组织中的检测限为50μg/kg,定量限为100μg/kg。在各空白组织中添加50～1200μg/kg浓度范围内,多西环素的平均回收率在61.05%～90.90%之间,批内、批间相对标准偏差均在0.7%～14.1%范围之内。本方法适用于鸡组织中多西环素残留量的测定。  相似文献   

丹参种质资源遗传多样性的AFLP分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

温春秀  吴志明田伟 刘铭周巧梅  谢晓亮 《华北农学报》2007,22(B10):122-125

对55份不同来源的丹参材料，采用扩增片段长度多态性（AFLP）标记，对丹参种质资源在DNA水平上进行遗传多样性研究，利用NTSYSpe2．1软件采用非加权配对算术平均法（uPGMA）方法进行聚类分析和计算遗传距离，构建遗传系统进化树。筛选得到的6对引物的扩增片段具有丰富的多态性，丹参种质资源存在很大的遗传变异，它们之间的相似系数为0．23～0．76，聚类分析将丹参种质资源分为4个主要类群。丹参种质资源存在丰富的遗传多态性，AFLP聚类分析结果与表型特征不完全一致，可能是基因型和环境共同作用于表型的结果。  相似文献   

反向遗传学操作技术在禽流感研究中的应用     

靳冬  吴志明  张志凌  张健  李明义  赵雪丽 《中国动物检疫》2011,28(3):75-77

反向遗传操作技术的建立为负链RNA病毒的研究开创了新的途径,使负链RNA病毒的许多特性得以深入认识。禽流感近年在全球的广泛暴发,使得对流感病毒的深入研究更加迫切,反向遗传操作技术的应用,使禽流感病毒的基因结构、致病机理、与宿主细胞的相互关系等各方面的研究工作都取得了巨大进步。笔者就国内近几年反向遗传操作技术在禽流感研究中取得的进展做一综述,并对该技术的发展趋势做一分析,提出对策思考。  相似文献   

关于贯彻《动物防疫法》中有关问题的思考     

吴志明  霍平  李新生 《河南畜牧兽医(综合版)》2002,23(10):37-37

《动物防疫法》是我国加强动物防疫管理工作的基本法律，实施四年来，在预防、控制和扑灭动物疫病，促进养殖业发展，保护人体健康等方面发挥了很大作用，但在执行过程中，由于对有些问题的理解和认识不一致，造成机构设置和职能界定的混乱，影响了依法治疫工作的进程。笔者现就对某些问题的理解和认识供大家商榷。１动物防疫监督的法律关系属性动物防疫监督的法律关系属于行政管理法律关系，这里的“监督”二字是执法的一种手段。动物防疫监督机构是动物防疫行政管理的主体，其监督对象是饲养和经营动物及其产品的单位和个人，以及其它应履…  相似文献   

鸡蛋及牛奶中四环素类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定法     

张崇威  李华岑  陈蔷  彭丽  吴志明  张振宇 《中国兽药杂志》2022,56(3):35-45

建立了一种测定鸡蛋及牛奶中四环素类药物残留 液相色谱-串联质谱的方法。样品经Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取,经快速滤纸过滤,并经加脱脂棉的HLB固相萃取柱净化,洗脱液氮气吹至小于1 mL,加30%甲醇至1mL并混匀,液相色谱-串联质谱法检测,基质匹配标液外标法定量。结果表明,四环素类药物在5 μg/kg~100 μg/kg的浓度范围内呈现良好的线性关系。在鸡蛋及牛奶中四环素类药物的检测限均为2 μg/kg,定量限均为5 μg/kg。在LOQ~2MRL(多西环素为LOQ-10LOQ)添加浓度范围内,四环素类药物的回收率均在81.2~110.0%之间,批内批间变异系数均小于11.4%。该方法各项技术指标均能满足残留检测要求,且方法的重现性良好,满足国内外兽药残留检测的相关规定。  相似文献   

猪附红细胞体的体外培养研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴志明  闫若潜  刘光辉  赵雪丽  张志凌  张健 《河南农业大学学报》2008,42(1):77-81

用RPMI—1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞体（M．suis）的基础培养基,以无附红细胞体感染的兔红细胞泥作为培养寄生载体,置于体积分数为5％CO,的37℃生化恒温培养箱进行M．suis的体外培养研究．结果表明,培养时每24h换培养液1次,每36h传代1次,可连续传代40代次以上,并能保持最高感染率90％以上;感染M．suis的猪红细胞在4℃条件下可保持30d以上而不发生溶血;兔红细胞接种新鲜制备的自然感染M．suis的猪红细胞,36h后感染率可达91．6％,并一直维持到96h,96h后有少量细胞开始出现溶血;接种4℃条件下保存30d以内自然感染M．suis的猪红细胞与新鲜制备的自然感染M．suls诂的猪红细胞对兔红细胞的感染率影响差异不显著．  相似文献   

拮抗植物病原真菌Streptomyces corchorusii AUH-1 的分离与鉴定     

章帅文  杨勇  刘群  吴志明  李昆太 《广东农业科学》2018,45(2):103-108

为了获得对植物病原真菌具有抑制作用的拮抗菌株,以西瓜枯萎病菌为指示菌,采用平板对峙试验进行植物病原真菌拮抗菌的分离筛选。从南昌、赣州、鹰潭、萍乡、武夷山、石家庄等地采集的26个不同类型土样中,分离筛选到1株对西瓜枯萎病菌具有良好抑制作用的菌株AUH-1,其抑菌率达到36.15%。根据菌体形态学观察、生理生化特征以及16S r DNA序列分析,对拮抗菌进行菌种鉴定,结果表明该菌株为黄麻链霉菌(Streptomyces corchorusii),并命名为黄麻链霉菌AUH-1。  相似文献   

黄瓜中导入野生酸黄瓜外源DNA片段的分子验证     

史建磊  陈劲枫  娄群峰  隋益虎  吴志明  张淑霞 《中国农业科学》2010,43(22):4663-4670

【目的】对栽培黄瓜(Cucumis sativus L.,2n=14)与野生酸黄瓜(Cucumis hystrix Chakr.,2n=24)经远缘杂交和多代回交、自交而来的渐渗系进行分子标记分析和表型鉴定,旨在为黄瓜导入酸黄瓜外源DNA片段提供相应依据。【方法】从分子标记分析、DNA序列比对和农艺性状表现上对各渐渗系和双亲进行研究。【结果】渐渗系与栽培黄瓜存在13.2%的遗传多态性,包括供体特异带、缺失带和产生的新带。利用RAPD引物D-11和SSR引物06632在渐渗系中分别扩增出约310bp和150bp的酸黄瓜特异带,序列分析表明其与酸黄瓜相应DNA片段的相似性分别为92.93%和96.48%,碱基差异分别为41个和9个,包括碱基转换、颠换和缺失。表型鉴定发现其呈现出酸黄瓜的遗传特性。【结论】野生酸黄瓜DNA已渐渗进入栽培黄瓜基因组,同时发生了少量不同类型的变异。  相似文献   

鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用     

赵雪丽  闫若潜  吴志明  曹伟伟  王淑娟  谢彩华  马震原  周兵强  王东方 《中国畜牧兽医》2015,42(4):865-870

为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法,本研究根据猪伪狂犬病野毒具有gD表面抗原基因和gE毒力基因,而基因缺失疫苗只有gD基因无gE基因的特性,针对gD/gE基因的5'端核苷酸序列自行设计引物,建立鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测.结果表明,成功建立了鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,该方法灵敏度高,最低检出限为100拷贝/μL;重复性好;特异性强,可特异性地扩增出PRV细胞毒中的gD和gE基因及gE基因缺失疫苗毒中的gD基因,但对PK-15细胞和猪流行性腹泻病毒等其他8种病原扩增不出任何条带;自835份临床疑似PRV感染病料中共检测出PRV gD和gE基因双阳性样品即野毒感染阳性样品267份,PRV gD基因单阳性样品28份,选取该方法检测出的26份PRV野毒感染阳性样品用于病原分离培养,两种方法的符合率为96.1%.说明本试验建立的二重PCR鉴别诊断方法快速、灵敏、特异,对于临床上疫苗毒和野毒感染的快速鉴别诊断具有重要意义.  相似文献   

猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

马文涛  闫若潜  吴志明  刘光辉  盛敏  谢彩华 《中国畜牧兽医》2011,38(11):102-105

本研究采用RT-PCR方法自细菌脂多糖(LPS)刺激的猪脾脏细胞总RNA中扩增、克隆猪白介素-6(porcine interleukin-6,PoIL-6)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的重组融合猪白介素-6(rPoIL-6)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS透析等步骤进行复性、纯化,采用PoIL-6 ELISA试剂盒检测rPoIL-6蛋白与抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性;采用MTS法检测rPoIL-6蛋白促猪脾脏细胞的增殖活性。结果表明,成功克隆了全长555 bp的PoIL-6成熟肽基因;表达的rPoIL-6蛋白分子质量大小约20 ku;纯化后的rPoIL-6蛋白纯度在95%以上,可和抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应,并且具有显著促猪脾脏细胞增殖活性。  相似文献