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为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)美洲经典株国家核酸标准物质,将美洲经典株代表PRRSV VR2332接种Marc145细胞,出现细胞病变后,反复冻融并收集病毒液,并灭活分装。制备后进行均匀性评估、稳定性评估、数字PCR法定值和临床试用。结果表明制备的标准物质的定值为(2. 06±0. 31)×104copies/μL;样品均匀;-20℃稳定保存12个月以上、4℃稳定2个月以上。经全国标准物质管理委员会评审,该制备物达到了国家二级标准物质的要求,可以作为核酸扩增检测的PRRSV美洲经典株核酸标准物质。 相似文献
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为建立一种简便、快速、特异的猪伪狂犬病毒(PRV)gB抗原检测方法,利用单克隆抗体技术和侧向层析(LFA)技术,采用柠檬酸三钠还原法,制备颗粒大小为31.5 nm胶体金,再用胶体金标记纯化的抗PRV gB单克隆抗体10D4,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处,分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体6E9,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。经测试,该试纸条最低能检测出1:640倍稀释的,TCID_(50)为1×10~(8.6)/0.1 mL的灭活PRV抗原,并与古典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)均无交叉反应,特异性良好;室温干燥密闭的条件下,该试纸条至少可保存10个月。结果表明,本研究建立的试纸条方法操作简单、快速、敏感、特异,易于判定,适合基层PRV的大面积普查和现场检测。 相似文献
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近年来,随着养猪规模化程度的提高及一些免疫抑制病的影响,猪病感染多呈混合感染,其流行症状和病变多呈非典型的趋势,流行势态日趋复杂和多样化,因此单凭临床诊断已经非常困难。鉴于以上原因,河南省动物疫病预防控制中心在进行猪病诊断时除进行常规的流行病学调查、临床症状、病理剖检诊断外,还着重加强了猪病的病原学PCR快速诊断。猪病病原学PCR诊断数据对于复杂猪病的快速确诊、流行规律与趋势、疫苗防疫效果分析等起到了重要作用。现根据本中心2006年全年猪病病原学和血清学检测及临床常规诊断结果对2006年猪病的发病特点、病因及防控… 相似文献
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为了构建珍珠鸡MHCⅠ轻链β2m成熟肽基因的原核表达载体并在大肠杆菌中实现可溶性的表达,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从鸡脾脏中提取总RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)15-3’为反转录引物,采用T aK aR a AM V反转录酶合成F irst-strand cDNA(fcDNA)。根据G enB ank中登录的鸡的β2m基因序列,设计了分别含E coRⅠ和H indⅢ酶切位点的一对引物,分别扩增鸡β2m的成熟肽基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含L acZ基因的原核克隆载体pGEM-T E asy中,转化至大肠杆菌JM 109感受态细胞,经E coRⅠ和H indⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片断亚克隆到表达载体pM AL-p2X,构建重组表达质粒p2Xβ-2m。将重组表达质粒转化入大肠杆菌E.coli TB 1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了鸡β2m成熟肽基因序列,全长约297bp,编码约98个氨基酸,并可溶性表达了鸡β2m成熟肽蛋白质分子。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了W estern b lot鉴定。本研究为进一步利用BF 2的胞外区在体外共同构建MHCⅠ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。 相似文献
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禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究 总被引：2，自引：2，他引：2
应用禽流感病毒二价（H5、H9）油乳剂灭活疫苗免疫160日龄非免疫蛋鸡，免疫接种后分别于第0、7、14、21、28、35 d采集相应的鸡蛋和血清，采用血凝抑制(HI)试验监测血清及卵黄中H5、H9抗体的消长规律，结果表明：H5、H9血清抗体于免疫后7 d时开始产生，14 d时到中等水平，21 d时达到最高值，一直维持到35 d之后；而H5、H9卵黄抗体与血清抗体水平相比相对滞后7 d左右；卵黄抗体与血清抗体在28 d时均达到高峰值并一直维持到35 d之后，28 d后血清和卵黄抗体达到相同水平。本研究为临床上以禽流感卵黄抗体检测替代血清抗体检测及以后禽流感高免卵黄抗体的研究提供了依据和数据。 相似文献
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为建立一种快速、敏感、特异的猪弓形虫检测方法,根据弓形虫保守基因序列,设计一套特异性引物和FAM荧光素标记的MGB探针;通过对PCR反应体系和反应条件进行优化筛选,建立了猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法,并对此PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对60份疑似弓形虫感染的临床样品进行了检测。结果显示:建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法在101～107拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对弓形虫重组阳性质粒出现阳性扩增信号,但对阴性对照的水和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自60份疑似猪弓形虫感染样品中检出32份阳性,并且和克隆测序结果一致。结果表明,本研究建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法可用于猪弓形虫的快速检测,从而为猪弓形虫病的诊断提供了特异、敏感、高通量的方法。 相似文献
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为有效防范风险,扎实做好河南省小反刍兽疫监测工作,全面掌握小反刍兽疫感染状况和流行趋势,落实国家小反刍兽疫消灭计划,按照《河南省2019年动物疫病监测与流行病学调查计划》要求,对全省种羊场和部分商品羊场开展了小反刍兽疫专项监测,分别用竞争ELISA、荧光RT-PCR试验方法,检测小反刍兽疫免疫抗体与病毒核酸。结果显示:河南省小反刍兽疫平均免疫抗体合格率为80.58%,其中种畜场(82.48%)高于商品场(79.74%);3种不同企业生产疫苗的免疫合格率均在73%以上,不同地区的免疫抗体合格率在55.47%～100%之间,免疫2次及以上的免疫抗体合格率(86.36%)高于只免疫1次的(76.50%);未检出小反刍兽疫病毒核酸阳性样品。结果表明,河南省小反刍兽疫整体防控效果较好,未发现病毒感染,免疫抗体水平均在国家规定的最低标准(70%)以上,说明近期省内发生小反刍兽疫的风险较低,但部分地区免疫效果较差,存在一定的发生风险。因此,河南省仍需继续做好小反刍兽疫的强制免疫、监测和流行病学调查工作,科学评估免疫效果和疫情风险,同时加强羊只的引种检疫和流通监管,提高基层兽医工作者和养殖户的防控意识,从而最终达到消灭小反刍兽疫的目标。 相似文献