浙江省22株鸭疫里默氏杆菌的血清型鉴定及耐药性研究   总被引：19，自引：0，他引：19  

蔡秀磊  韦强  崔言顺  鲍国连  霍翠梅  季权安  张先福  李建亮 《浙江农业学报》2007,19(1):46-49

从浙江省养鸭场出现典型病变的病死鸭中分离到22株鸭疫里默氏杆菌,对其进行培养特性、形态特性、生化试验和血清型鉴定,其中4株为Ⅰ型、14株为Ⅱ型,1株X型,3株XI型。药敏试验结果表明,这些菌株对氨苄青霉素、四环素、红霉素和氯霉素比较敏感,对卡那霉素、丁胺卡那、青霉素、新霉素不敏感。  相似文献   

OuEChERS-联免疫吸附法检测动物源性产舳中阿维菌素残留     

周洪娟  崔言顺  魏可鹏  张立东 《山东畜牧兽医》2013,(11):6-7

本研究采用QuEChERS净化法,样品用乙腈提取,ODs吸附剂粉分散固相萃取净化,检测动物源性食品中的阿维菌素。该方法的最低检测限1．Oag／kg,回收率在68．30／0-85．6％之间。通过3种不同种类动物源性产品中阿维菌素残留量的检测表明,该方法稳定、可靠,能满足动物源性食品中阿维菌素类药物残留检测需要。  相似文献   

新型鸭肝炎病毒分离株JFX08全基因组测定与分析     

赵立娜  马秀丽  李玉峰  黄兵  宋敏训  李建亮  崔言顺 《中国兽医学报》2010,30(2)

对我国鸭病毒性肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)分离株JFX08的全基因组进行了序列测定与分析。结果表明,JFX08毒株的基因组全长为7793nt,包括652nt的5’UTR,6753nt的ORF,366nt的3’UTR以及19nt的poly(A)尾巴。JFX08毒株的ORF编码2251个氨基酸,各基因均与韩国新型毒株的氨基酸序列相似性最高,与1型DHV和台湾新型DHV的序列相似性均较低。其中VP1较1型DHV存在2个氨基酸的插入和较多氨基酸位点的突变,高变区主要集中在180～194位和213～219位。JFX08毒株的非编码区核苷酸序列之间存在大量碱基突变和插入/缺失。多聚蛋白、VP0、VP3、VP1、2C和3D基因进化分析结果均表明,JFX08分离株与韩国新型DHV的遗传距离最近,属基因C型。  相似文献   

基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备(   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵立娜  崔言顺  任建亭  李建亮  黄兵  李玉峰  马秀丽 《浙江农业学报》2011,23(2):0

采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHV VP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性     

陈海鹏  云涛  张存  余斌  倪征  华炯钢  崔言顺 《浙江农业学报》2014,26(6):1448

新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT\|PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到pET\|28a（+）原核表达载体,获得重组质粒pET\|28a（+）\|σC。将重组阳性质粒转化至BL21（DE3）感受态细胞,诱导表达后经SDS\|PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 kDa。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。  相似文献   

鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒三重PCR诊断方法的建立及应用     

郝明飞  张秀美  胡北侠  张琳  许传田  杨少华  李建亮  陈正涛  崔言顺 《兽医大学学报》2012,(8):1126-1129,1135

根据GenBank中已登录的鸭病毒性肝炎病毒（DHV）、禽流感病毒（AIV）和新城疫病毒（NDV）的基因序列,设计了3对特异性引物,建立了DHV、AIV和NDV的多重PCR鉴别诊断技术,并对体系进行了优化和特异性、敏感性试验。结果表明,该体系所扩增的3种病毒基因片段大小分别为174bp（DHV）、264bp（AIV）和362bp（NDV）,且特异性、敏感性良好,能够分别检出1pg AIV、10pg DHV和10pg NDV的病毒RNA。对鸭临床样品的检测结果表明,该方法与病毒分离鉴定符合率90%以上,可用于临床样品的快速检测。  相似文献   

共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

邓晓辉  陈柳  叶伟成  李军星  崔尚金  余斌  云涛  崔言顺  孙元  仇华吉  张帅  张存 《中国预防兽医学报》2012,(4):251-256

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

利用噬菌体随机肽库筛选新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶模拟表位     

姜宁朋  胡北侠  张秀美  李建亮  黄艳艳  徐栋  崔言顺 《农业生物技术学报》2008,16(6)

噬菌体随机肽库技术被广泛应用于病毒抗原表位的研究(Ramanujam et al.,2002),利用该技术既可以筛选出线性表位,又可以筛选出与原始序列不同但功能相似的构象表位(Scott and Smith,1990)。本实验室已研制了针对LaSota株新  相似文献   

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制   总被引：2，自引：0，他引：2  

李希友  田夫林  张秀娥  李建亮  崔言顺 《畜牧兽医学报》2006,37(12):1373-1377

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。  相似文献   

仔猪腹泻性大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

逄媛  沈志强  崔言顺  聂小想  王金良  郭广君 《上海畜牧兽医通讯》2007,(5):2-3

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,简称ETEC)引起的新生仔猪腹泻一直是困扰养猪业发展的重要疾病之一。该病的发病率、死亡率均较高,是影响规模化猪场哺乳仔猪成活率的主要病因,给养猪业造成了极大的经济损失。对于由ETEC引起的腹泻,国内外长期采取药物治疗方法,但药物治疗费用昂贵,更因抗药菌株日趋增多,导致药物疗效不佳甚至无效,而免疫预防是控制这类疾病的最佳选择。粘附素和肠毒素是大肠杆菌的两个重要毒力因子,是导致腹泻的主要原因。目前国内外对粘附素和肠毒素基因工程疫苗进行了广泛的研究,取得了很好的成…  相似文献