共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

邓晓辉  陈柳  叶伟成  李军星  崔尚金  余斌  云涛  崔言顺  孙元  仇华吉  张帅  张存 《中国预防兽医学报》2012,(4):251-256

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

我国北部一淡水湖野生黑颈??死亡的原因调查     

贾皓  宝音达来  武拉俊  马立峰  戴晓光  申捷  萨茹拉  郝璐  云涛  郭文  苏胜杰  郭金贵  菊花  刘志伟  崔基贤  孙鹏飞  王大伟  赵心力 《中国动物检疫》2017,34(3):30-33

2015年5月14—15日,内蒙古自治区某淡水湖出现大量黑颈??死亡。5月21日,内蒙古自治区动物疫病预防控制中心组织相关专家赶赴现场,开展了紧急流行病学调查,分析黑颈??的死亡原因,评估该事件对当地家禽养殖的风险。调查结果显示:此次事件中的黑颈??死亡率约为46.2%,未发现有其他鸟类和家禽死亡;该淡水湖周围5 km范围内的其它地点未有禽类死亡,对该范围内的活野鸟和家禽进行抽样检测,未检出禽流感病原,但国家禽流感参考实验室从送检的死亡野鸟病料样品中均检出H5N1亚型高致病性禽流感病毒,并且检测发现该区域内家禽的H5亚型禽流感免疫抗体合格率较低;在野鸟向家禽传播疫病的7个风险因素中,家禽养殖方式、家禽免疫状况的风险程度较高。调查认为,本次黑颈??死亡事件是由其自身所携带的禽流感病毒暴发所引起的,该区域内家禽发生疫情的风险不高。  相似文献   

重组鸭瘟病毒载体中筛选高效表达鸭坦布苏病毒E蛋白启动子   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈柳  倪征  余斌  华炯钢  叶伟成  云涛  刘可姝  朱寅初  张存 《中国农业科学》2020,53(24):5125-5134

【背景】鸭瘟和鸭坦布苏病毒是鸭的两种重要传染病,鸭瘟属于疱疹病毒科,具有开发成病毒载体的优势。为了优化鸭坦布苏病毒E基因在重组鸭瘟病毒载体中的表达,之前探讨了不同形式鸭坦布苏病毒E蛋白在重组鸭瘟病毒载体中的表达,发现以鸭为宿主进行密码子优化的E基因C端截短形式（E451-dk,简称为Es）表达量最高。【目的】探讨不同启动子对Es 在重组鸭瘟病毒载体中表达的影响,为鸭瘟病毒—坦布苏病毒二联苗的研制奠定基础。【方法】将pCAG、 pSV40、pRSV、p1.8k(MDV)和pgB(MDV)启动子通过常规基因克隆的方法替换转移载体pEP-BGH-Es中的pCMV启动子,构建不同启动子调控Es表达的重组表达框pro-Es-BGH-pA。在鸭瘟病毒（DEV）疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,将5个重组表达框分别通过“Red E/T两步重组”克隆至pDEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带不同启动子调控的Es突变体克隆pDEV-pro-Es。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞（CEFs）拯救获得相应重组病毒rDEV-pro-Es,并对重组病毒感染细胞蚀斑大小和Es蛋白表达情况进行测定。【结果】将重组突变体克隆转染细胞拯救获得了5株重组病毒rDEV-pro-Es。Western blotting分析表明外源蛋白Es在 pRSV调控下表达量最高,其表达量较rDEV-Es提高了169.12%。【结论】完成了Es在重组鸭瘟病毒载体中高效表达启动子的筛选,获得了一种调控Es高效表达的启动子pRSV。同时也获得了一株高效表达鸭坦布苏病毒外源基因Es的重组鸭瘟病毒rDEV-pRSV-Es。  相似文献   

番鸭呼肠孤病毒通用RT-PCR检测方法的建立     

叶伟成  余斌  刘跃生  华炯钢  云涛  张存 《浙江农业学报》2014,(6)

根据经典和新型水禽呼肠孤病毒σA基因的保守序列设计一对PCR引物,通过优化病毒RNA提取方法和PCR条件,建立了番鸭呼肠孤病毒通用RT-PCR检测方法。该方法可自1株经典型或4株新型水禽呼肠孤病毒特异性扩增出436 bp条带,其最低病毒检出量为3.6 TCID50,而对鸭甲肝病毒、鸭瘟病毒、新城疫病毒、坦布苏病毒、番鸭细小病毒、产蛋下降综合征病毒和H9N2亚型禽流感病毒扩增均为阴性。对2011~2012采集的224份(番鸭74、鹅68、鸭82)疑似临床病料进行检测,结果 56份为阳性,番鸭、鸭和鹅阳性率分别为59.5%(44/74),11.0%(9/82)和4.4%(3/68),表明水禽呼肠孤病毒主要在番鸭中流行。  相似文献   

浙江省地方鸡种禽白血病毒抗原检测与部分分离株GP85基因序列分析     

倪征  陈柳  华炯钢  叶伟成  云涛  朱寅初  张存 《浙江农业学报》2020,32(8):1357

为了解浙江地区地方品种鸡中J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis vrius,ALV-J)的感染情况与流行毒株的分子特征,对浙江省部分地方品种鸡体内ALV的p27抗原进行了检测,从疑似感染鸡群中检测分离到5株 ALV-J,并对其GP85基因进行PCR分子克隆和序列分析。研究结果显示:在检测的19个地方鸡品系中,所有品系的鸡样本都呈现抗原阳性,其中101系的抗体阳性率最高,母鸡阳性率为40.48%,公鸡阳性率为16.54%;126系次之,母鸡阳性率为28.87%,公鸡阳性率为3.30%;171系抗体阳性率最低,其母鸡阳性率仅为4.08%,公鸡的感染率为0。为了解地方鸡群中ALV-J的遗传变异,对分离到的5株ALV-J的GP85基因进行了分子克隆和序列分析。结果表明,5个分离毒株的GP85基因大小均为924 bp,与预期一致;本研究样品序列之间的核苷酸同源性为90.8%~98.5%,与原型毒株HPRS103核苷酸相似性为90.3%~97.0%,与国内其他分离株的同源性为86.5%~99.0%。分离株与福建(FJ201308株)和广东(WF13株)分离株的同源性最高。结果表明:浙江省大部分地方品种鸡都不同程度感染ALV-J,而且分离毒株已经发生了不同程度的变异,提示我们应加强浙江省地方品种鸡ALV的净化工作。  相似文献   

禽类病毒免疫逃避的机制     

云涛  余斌  倪征  华炯钢  李双茂  陈柳 《黑龙江畜牧兽医》2011,(6):28-30

为了在宿主体内生存,病毒在进化过程中形成了一系列逃避机体免疫的能力,包括潜伏感染、抗原变异、干扰抗原加工和呈递、调节宿主细胞因子网络、调控细胞凋亡以及抑制补体抗体系统等.本文以禽病毒为例对病毒免疫逃避的机制进行了综述.  相似文献   

几种布鲁氏菌病检测方法的比较     

郝璐  戴晓光  申捷  萨茹拉  马晓雪  苏胜杰  云涛  双燕  马立峰 《中国奶牛》2014,(15):23-26

为研究虎红平板凝集试验(RBT)、全乳环状试验(MRT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)及胶体金检测试纸条对布病的检测效果,本研究采用以上方法分别对感染地区和净化地区的牛群血清、羊群血清、牛群奶样进行了检测效果的比对。结果显示,针对牛群血清,RBT结果阳性率最高,iELISA与胶体金结果阳性率相似,表明RBT的敏感性较好,iELISA与胶体金检测试纸条的特异性较RBT好;针对羊群血清,iELISA与胶体金检测试纸条的敏感性和特异性较RBT好;针对牛群奶样,MRT结果阳性率低于全乳iELISA和胶体金检测试纸条。全乳iELISA和胶体金检测试纸条在试验中显示出具有较高的敏感性和特异性。  相似文献   

口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭慧琛孙世琪  云涛张腾国  包慧芳陈应理马军武  刘湘涛刘在新 谢庆阁 《中国兽医科技》2004,34(3):12-17

将携带O型FMDV China99株P1-2A、部分2B及3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDV China99株3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖活性，以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化，并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明，FMDDNA疫苗与3D蛋白共同免疫豚鼠后，抗体水平没有明显提高，攻毒后的保护率为25％。  相似文献   

兔病毒性出血症病毒JX/97株衣壳蛋白基因的序列测定与分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘光清  倪征  张玉颖  云涛  梁华丽  华炯刚  李双茂 《农业生物技术学报》2006,14(2):191-196

对中国兔病毒性出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)JX/97株的衣壳蛋白基因进行了克隆和测序。结果表明,该蛋白的核苷酸序列长度为1739nt,推导的氨基酸序列为579aa。利用分子生物学软件分析了该病毒与国内外22!RHDV的基因序列,结果显示,RHDV不同分离株之间的序列同源性几乎都在90%以上。衣壳蛋白基因的系统发生树分析结果表明,所选的RHDV参考毒株按照一定的遗传距离,可以分为4个基因群,基因群之间的距离有加大的趋势,表明RHDV受环境的影响有向不同方向演变的趋向,即RHDV在长期适应特定环境的过程中,有可能逐渐演变成各具特色的RHDV。  相似文献   

禽脑脊髓炎研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

葛俊伟关云涛  杨增岐陈洪岩 《动物科学与动物医学》2003,20(10):62-64

禽脑脊髓炎是小核糖核酸(RNA)病毒科肠病毒属的禽脑脊髓炎病毒引起的一种以侵害幼鸡为主的急性、高度接触性传染病。本病呈世界性分布。对养禽业尤其是种禽饲养业造成极大危害。本文就禽脑脊髓炎病毒的基因结构、致病机理、免疫等问题作简要综述。  相似文献