猪生殖—呼吸道综合征免疫学研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

王柳  仇华吉 《预防兽医学进展》1999,1(1):5-8

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动物免疫失败原因分析与对策     

李娜  仇华吉 《中国动物保健》2003,(11):50-52

免疫接种是预防和控制疾病的有效途径。只有优质的疫苗、良好的运输、保存条件和正确的使用方法,才能产生良好的免疫预防效果。因种种原因造成的免疫失败时有发生,如何避免免疫失败是一个令人关注的话题。本文将对相关问题进行简要分析。宿主方面的因素个体差异机体的免疫应答主要受遗传因素的影响。在一个畜禽群体中,不同遗传背景的动物对同一抗原产生的免疫应答有明显差异。究其原因,是因为调控特异性免疫应答的基因即主要组织相容性复合物(MHC)不同,即不同宿主带有不同的MHC等位基因。MHC基因编码MHC分子,参与抗原递呈,MHC-I类分…  相似文献   

高效表达重组猪IL-10的基因工程菌株的构建   总被引：3，自引：0，他引：3  

仇华吉  金吉东  兰文升  郭海龙  周艳君  王云峰  童光志 《畜牧兽医学报》2003,34(4):385-388

白细胞介素—10(IL-10)是一种Th2细胞等产生的能抑制Th1细胞释放细胞因子的免疫调节因子。从经脂多糖(LPS)活化的猪外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA，用RT—PCR扩增了猪IL-10(poIL—10)编码基因，克隆并测序验证后，将其亚克隆到表达载体pPROEX^TM HTb中，转化DH5α后，用IPTG诱导培养，经免疫印迹和生物活性检测显示，重组菌株表达了具有活性的重组poIL—10，重组poIL-10表达水平达3mg／ml培养液，占菌体细胞总蛋白的30．2％，本研究为poIL-10的功能研究和临床应用奠定了基础。  相似文献   

猪γ干扰素的体外表达及其多克隆抗血清的制备   总被引：3，自引：3，他引：0  

闫丽萍  周艳君  仇华吉  魏萍  童光志 《中国预防兽医学报》2004,26(4):252-255

从健康仔猪前腔静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,用猪γ干扰素(IFN-γ)基因特异性引物通过RT-PCR扩增猪IFN-γ的全长cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中,再亚克隆到pUC18和表达载体pET-30a中,经测序发现其序列与GenBank报道的IFN-γ基因序列基本一致.将重组质粒pET-30a-IFN-γ转化大肠杆菌BL21,于37℃经IPTG诱导表达,IFN-γ基因获得表达,表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39%.经SDS-PAGE及Westernblot分析表明,表达的融合蛋白分子量约为25 ku.将包涵体用8 mol/L脲变性,用ProBondTM Purification Systerm纯化,经透析复性,得到纯化的目的蛋白,含量可达0.3 mg/mL.将复性蛋白免疫新西兰白兔三次,制备了高滴度的猪IFN-γ抗血清.本实验表达和纯化了猪IFN-γ,并制备兔抗猪IFN-γ的抗血清,为下一阶段关于猪γ干扰素重组蛋白其应用奠定了基础.  相似文献   

OIE最新疫情报告     

仇华吉 《畜牧兽医科技信息》2003,19(12)

猪瘟 2003年11月24日,在斯洛伐克中部地区发生一起猪瘟,发病猪场是一个带有育肥场的繁殖场。病例670例,死亡30例,销毁4256例。2003年12月2日,在斯洛伐克中部地区的一个农场再次发生猪瘟,发病猪场为一个繁殖场,危及1952头猪,病例575例,死亡18例,销毁1934例。 西尼罗河热 2003年11月23日在阿曼的Sib镇发生一起西尼罗河热,马群饲养于设施良好的马厩并且有专门的  相似文献   

一种新型病毒检测技术:实时RT-PCR     

仇华吉 《畜牧兽医科技信息》2002,18(8)

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猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NSl基因的克隆与原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴丹  童光志  仇华吉  薛强  周艳君  李景鹏 《中国农业科学》2003,36(11):1352-1356

根据猪细小病毒 (porcineparvovirus ,PPV)NADL 2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物 ,扩增出了PPVSY 99株的NS1基因 ,将其克隆到原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组质粒SYNS1/pET2 8a。将SYNS1/pET2 8a转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导 ,使PPVNS1基因获得了表达 ,运用ELISA和Westernblotting证实了表达产物的特异性。经表达产物细胞定位分析 ,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度 ,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 .6mmol·L-1,诱导时间为 3h ,在大肠杆菌中最高表达含量为 17.8%。亲和层析后 ,得到了纯化的NS1蛋白 ,在Westernblotting检测中 ,纯化蛋白大大降低了反应背景。表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生 ,而且还可用于鉴别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪  相似文献   

检测猪瘟病毒野毒株胶体金免疫层析方法的建立   总被引：8，自引：1，他引：7  

王向鹏  孙元  杨增岐  仇华吉 《中国预防兽医学报》2010,32(6)

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)野毒的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗CSFVE2蛋白的单克隆抗体(MAb)6E10作为捕捉抗体,将纯化的抗CSFVE2蛋白的MAbHQ06和兔抗鼠IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,优化反应条件,组装成胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条用于检测CSFV野毒感染的PK-15细胞培养物,在检测线和质控线处均呈现红色条带,健康PK-15细胞培养物对照仅在质控线呈现红色条带;试纸条检出病毒培养物的最低限为103.5 TCID50;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与猪瘟兔化弱毒(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、伪狂犬病病毒(PrV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)反应。所制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,初步达到了区分检测CSFV野毒株和弱毒株的目的。  相似文献   

猪瘟病毒囊膜蛋白E2的锚定序列部分缺失对其在细胞内表达的影响     

贺番  王靖飞  郝永清  仇华吉 《中国预防兽医学报》2010,32(5)

为了将猪瘟病毒(CFSV)的囊膜蛋白表达在细胞表面,本研究根据与CSFV同属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的囊膜蛋白E2锚定序列,推测出CSFV的E2锚定序列。利用生物信息学软件对CSFV的E2锚定序列进行分析、建模与部分缺失,构建成4种不同的表达CSFV囊膜蛋白EmsE1E2的片段。将以上4种片段分别连接到真核表达载体pCAGGS中,转染幼仓鼠肾(BHK21)细胞,利用抗E2蛋白的单克隆抗体对表达蛋白进行westernblot检测与间接免疫荧光(IFA)检测,研究结果表明:跨膜区中锚定序列的部分缺失会降低E2在细胞内的表达,为猪瘟伪型病毒的研制提供了实验依据。  相似文献   

共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

邓晓辉  陈柳  叶伟成  李军星  崔尚金  余斌  云涛  崔言顺  孙元  仇华吉  张帅  张存 《中国预防兽医学报》2012,(4):251-256

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。  相似文献