布鲁氏菌eryA基因的克隆、原核表达及生物信息学分析     

宋前进  杭天宇  乌东高娃  李伊铭  关平原  温永俊 《中国动物检疫》2019,36(5):61-67

为分析羊种布鲁氏菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,从Rev.I株基因组中扩增eryA基因片段,构建重组质粒pET-30a-eryA并进行原核表达、Western-blot检测,同时对该基因进行生物信息学分析。结果显示:本试验成功克隆并表达了eryA基因;经Western-blot检测发现,该基因编码蛋白可与阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示:该蛋白含有较多的抗原决定簇。因此,推测eryA蛋白有望作为布鲁氏菌的免疫诊断抗原,这为进一步探索布鲁氏菌基因工程疫苗的研制及iELISA诊断试剂盒的建立奠定了基础。  相似文献   

内蒙古地区鸡沙门氏菌病流行病学调查     

申之义  李利萍  张庆华  亢文华  李平安  关平原  张七斤  张仙保 《中国家禽》2000,22(10):33-34

对内蒙古呼和浩特、包头、集宁、丰镇、东胜、临河、赤峰、通辽８个地区的２７个养鸡场随机采取血清样品共１２８２４份,采用平板凝集试验,进行鸡白痢、鸡伤寒抗体检测。结果表明,父母代蛋种鸡平均阳性率为２０．６６％,最高达４６．２５％,最低为１．３３％;商品蛋鸡平均阳性率为４７％,最高达７０％,最低为３２．５％;父母代肉种鸡平均阳性率为１２．６６％,最高达３８％,最低为１．０８％;商品肉鸡平均阳性率为７２．  相似文献   

两株1型鸭甲肝病毒山东分离株的鉴定与致病性分析     

王宇飞  孙伟  陈佶慧  刘芹防  滕巧泱  杨健美  苑纯秀  李泽君  李雪松  关平原 《中国动物传染病学报》2021,(1):26-30

鸭病毒性肝炎(DVH)是危害雏鸭的一种急性高度致死性传染病,引发DVH的主要病原体为鸭甲肝病毒(DHAV),其中1型鸭肝炎病毒在中国各省流行最广.本研究于2018年从山东某养鸭场的病料中分离得到两株DHAV,经分子生物学鉴定、序列比对和进化树分析,鉴定引起雏鸭患病的病原体为DHAV-1.经过纯化后,对SPF雏鸭进行致病...  相似文献   

布鲁菌疫苗株Rev.1全基因序列的测定与分析     

于环宇  张志丹  刘建奇  赵丹彤  赵丽霞  刘国英  宋庆庆  王国华  潘相臣  刘冬冬  田普厚  石顺利  关平原 《畜牧与饲料科学》2020,41(5):91-95

为促进布鲁菌病Rev.1疫苗及相关疫苗的研发, 该研究提取Rev.1疫苗株核酸, 应用PacBio平台进行全基因序列测定与分析。结果表明, Rev.1疫苗株基因组大小约3 299 187 bp, G+C含量为57.2%, 组装为染色体1、染色体2两条环状基因组, 大小分别为2 121 370、1 177 817 bp, G+C含量分别为57.2%、57.3%。将其Ery、BLS和VirB10基因序列与9株GenBank上发表的布鲁菌参考菌株的Ery、BLS和VirB10基因序列进行比较分析, 存在不同程度的差异, 同源性为97.4%~100%。  相似文献   

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定     

郭日东  吴晓亮  宋丽华  韩吉雨  魏小军  李平安  关平原  兰儒冰 《养殖与饲料．饲料世界》2015,(8)

在1年的时间里,对北方的1个规模化牧场乳房炎病牛连续采集45个样品,进行分离鉴定,分离到葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯菌和无乳链球菌4种乳房炎病原菌,在发病时间分布上有明显的特点,6-10月期间,大肠杆菌为乳房炎的主要病原菌,12月至次年4月期间,无乳链球菌为乳房炎的主要病原菌。  相似文献   

布鲁菌Rev.1株eryA基因的原核表达及间接ELISA方法的建立     

程家海  宋前进  郭昊  侯丽娜  杨超  王凤雪  关平原  温永俊 《畜牧与饲料科学》2020,41(6):7-12

通过对布鲁菌优势抗原eryA基因进行原核表达,在获得目的蛋白的基础上建立以该蛋白为包被抗原的间接ELISA方法。构建原核表达载体pET-30a-eryA,并将其转入大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,镍柱亲和纯化eryA重组蛋白,SDS-PAGE 鉴定纯化蛋白,Western-Blotting检测反应原性后建立间接ELISA方法。反应条件优化后,抗原包被浓度为0.312 5 μg/mL,37 ℃包被2 h;封闭液为5%猪源明胶,37 ℃作用2 h;血清稀释度为1∶100,37 ℃作用1 h;酶标抗体稀释度为1∶8 000,37 ℃作用45 min。血清稀释度为1∶1 600时,仍然检测为阳性,证明建立的间接ELISA方法灵敏性良好;其他菌种及病毒经过特异性检测,均为阴性,证明建立的间接ELISA方法特异性良好;通过重复性检测,批间及批内变异系数均小于10%,证明建立的间接ELISA方法重复性良好。检测临床血清样品,建立的方法与试管凝集试验总符合率为95.7%,证明该方法可初步应用于临床诊断。  相似文献   

塞内卡病毒CH/ZZ/2016株全基因组测序与分析     

韩宇  王秀明  张斌  乌吉斯古楞  巨敏莹  刘建奇  宋庆庆  关平原 《中国动物检疫》2020,37(12):108-113

为了解塞内卡病毒分离株SVA/CH/ZZ/2016全基因组序列,设计4对相互重叠的特异性引物扩增基因片段,将扩增产物分别克隆至pCE2TA/Blunt-Zero载体并进行测序,拼接校正后获得SVA/CH/ZZ/2016株全基因组。结果显示,该毒株基因组全长7 292 bp,包括5''UTR（670 bp）、ORF（6 546 bp）以及3''UTR（76 bp）。选择国内外其他9株参考毒株序列,对编码区12个基因的核苷酸及编码氨基酸进行比对。结果显示,核苷酸同源性最高的是3B基因,最低的是VP1基因,其余基因的核苷酸序列同源性均在85.2%~100%之间。VP1基因遗传进化分析显示,SVA/CH/ZZ/2016株与美国分离株USAIL_Purdue_43_2016和USAIN_Purdue_3698_2016株亲缘关系最近,属同一进化分支,与原始毒株SVV-001株亲缘关系最远。对SVA/CH/ZZ/2016株和原始毒株SVV-001 VP1蛋白的氨基酸序列进行比对,发现共有10处氨基酸差异。本研究通过对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组测序及分析,为进一步开展SVA分子生物学研究及流行病学调查提供了基础数据。  相似文献   

牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备     

张智  刘泽  乌吉斯古楞  刘重阳  权璞宏  任旭荣  宋庆庆  关平原 《中国动物检疫》2021,38(1):94-99

为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析。结果显示,扩增的PlpE基因大小为1 050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa。间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512 000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好。PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础。  相似文献   

干扰素的研究进展     

银晓  关平原 《内蒙古畜牧科学》2008,(2):65-68

干扰素是人和动物细胞受到适宜的刺激产生的一种微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白。该文就干扰素的分类、分子结构、作用机理、生物学活性、体外重组技术以及临床应用等方面的研究进展进行了综述。  相似文献   

我国部分地区犬布氏杆菌感染流行病学调查     

狄栋栋  范伟兴  崔步云  张彦明  莫莎  申之义  关平原 《畜牧与兽医》2011,43(5)

为了了解我国部分省市犬感染布氏杆菌的情况。用血清样品用虎红平板凝集试验(RBT)和OIE标准间接酶标试验(i-ELISA)初筛,初筛阳性样品用试管凝集试验(SAT)复核,对SAT判定为阳性血清所对应的脾脏或新鲜全血进行布氏杆菌分离与培养。结果显示,4 750份犬血清中60份为阳性(29份检测到粗糙型布氏杆菌抗体:牧区2份、农区4份、城区23份;31份检测到光滑型布氏杆菌抗体:牧区19份、农区2份、城区10份),个体阳性率为1.26%(牧区6.69%,农区1.53%,城区0.84%);3份脾脏和1份新鲜全血经接种培养后,从1份全血中分离到1株菌,经AMOS-PCR方法鉴定为犬布氏杆菌。试验结果表明,调查的部分省市均有犬感染布氏杆菌,牧区个体阳性率最高、农区居中、城区最低,且存在粗糙型和光滑型布氏杆菌混合感染的现象。  相似文献