《兽医免疫学》教学中的理论与实践相结合   总被引：1，自引：0，他引：1  

冉旭华  闻晓波  王新  邵红 《畜牧与饲料科学》2010,31(9)

<兽医免疫学>作为兽医专业的基础课,其理论课学习难度较大且与实践结合紧密.因此,在教学过程中,应根据教学的需要对教学方式进行改革,以加强与其他学科之间的渗透,尤其是与兽医临床应用的紧密结合.阐述了与实践结合紧密的教学方案、改善实验教学方法、充分利用现代化教学工具、改革考试方式等方面的教学改革措施,以达到提高学生学习积极性,在掌握扎实理论基础知识的同时也具备良好的实践操作能力,以及有效提高教学质量的目的.  相似文献   

猪细小病毒NS1蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

冉旭华  闻晓波  孟凡  周恩民 《中国兽医学报》2009,29(8)

通过分子生物学软件对GenBank中发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)中国株NS1蛋白的氨基酸序列进行分析,确定了主要抗原表位区域,针对此区域设计了1对特异性引物.通过PCR方法扩增出长度为843bp的基因片段,将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建了原核表达我体pET30a-NS1,实现了PPVNS1蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效表达.重组蛋白相对分子质量约为43 000,与预期相符.Western-blot试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性.以纯化的该蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为2 mg/L,一抗的最佳稀释倍数为1:100,阳性标准为:待检血清D150≥0.36,且待检血清D450/阴性血清D4502,作为阴阳性临界值,初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法.用该方法对临床血清样本进行检测,间接ELISA判定为阳性的60份血清,经Western-blot试验只有45份为阳性.随机抽取100份猪血清样品与商品化试剂盒检测结果对比,符合率为96%,表明所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为流行病学调查和疾病的鉴别诊断奠定了基础.  相似文献   

绵羊肝片吸虫谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆与序列分析     

冉旭华  闻晓波  王春仁  刘娣  孙中武  李晓娟  王密 《中国畜牧兽医》2012,39(1):64-67

本研究扩增肝片吸虫(Fasciola hepatica,Fh)谷胱甘肽硫转移酶(GST)基因,并进行同源性分析。根据GenBank发表的部分Fh GST基因序列设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出Fh GST基因完整的开放阅读框(open reading frame,ORF),测定序列,使用分子生物学软件进行同源性分析。获得Fh GST基因全长682 bp,编码218个氨基酸,与澳大利亚分离的肝片吸虫GST同源性较高,与大片吸虫和卫氏并殖吸虫的GST也有较高的同源性。不同虫株GST基因具有较高的同源性,因此Fh GST蛋白不适合用作诊断抗原,但由于其存在交叉反应,GST基因作为分子疫苗的候选基因具有重要意义。肝片吸虫GST基因的克隆,为进一步研究GST蛋白的功能和作用奠定了基础。  相似文献   

牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达     

冉旭华  曹思  张峣  魏晓曼  闻晓波  倪宏波  朱战波 《中国畜牧兽医》2015,42(5):1104-1109

轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55 ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473 bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55 ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。  相似文献   

C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定     

冉旭华  张峣  曹思  卢元赫  张玲玲  刘阳阳  倪宏波  朱战波  闻晓波 《中国畜牧兽医》2016,43(5):1368-1373

为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆。通过氨苄青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软件与GenBank上参考序列进行同源性比对。测序结果表明,从样品中分离到了1株BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1056bp;进化分析表明,NX49隶属于BPIV3C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷酸同源性为99.4%;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下Mg²⁺对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1∶4,且仅在4℃孵育时出现凝集反应。本研究成功分离得到一株BPIV3C型毒株,这将有助于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究。  相似文献   

动物医学机能学实验室信息化建设与教学改革实践     

计红  王春仁  杨焕民  李士泽  崔一喆  郭景茹  张旭  郭丽  冉旭华  于立权 《畜牧与饲料科学》2012,33(7):41-42

动物医学是一门实践性很强的专业,机能学实验在动物医学专业课程学习中起着举足轻重的作用。介绍了黑龙江八一农垦大学动物医学机能学实验信息化建设与教学改革实践的具体情况和效果,以期为我国动物医学专业人才的培养提供参考和建议。  相似文献   

牛副流感病毒3型N基因的克隆与系统进化分析     

薛娟  曹思  张峣  冉旭华  闻晓波 《动物医学进展》2015,(3):32-34

扩增大庆地区分离的牛副流感病毒3型的N基因,并进行同源性分析。设计特异性引物,通过聚合酶链反应扩增牛副流感3型N基因,将该基因分别连接到克隆载体的BamHⅠ、HindⅢ酶切位点中,测定插入片段的核苷酸序列,并利用分子生物学软件进行同源性分析。序列分析结果表明,扩增获得BPIV-3-N基因全长1 548bp,编码515个氨基酸,该N段基因核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GenBank中日本分离株910N基因序列同源性较高,核苷酸同源性为99.7%,氨基酸同源性为100%。  相似文献   

《兽医生物制品学》课程建设中的探索研究     

闻晓波  冉旭华  王春仁  侯喜林  朱战波 《畜牧与饲料科学》2012,(8):22-23

针对黑龙江八一农垦大学现有动物医学专业《兽医生物制品学》理论和实验教学中的问题,在理论课教学中,采取编写教学纲要、改进教学方法、利用多媒体教学、改革考试方法等手段提高教学质量;同时,在实验课中,对实验课教学方法和手段进行调整,通过鼓励学生参加实验准备、提高学生应变能力和培养学生安全意识,来提高学生的综合实践能力。主要总结了教学改革中已获得的成绩和经验,分析了该门课程教学中存在的问题,以期为进一步推进该校校级教学改革项目建设提出建议。  相似文献   

检测PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

冉旭华  赵喜红  闻晓波  倪宏波  李树东  周恩民 《中国预防兽医学报》2008,30(7)

用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为98.8%。Western blot检测结果58份阳性,两者的符合率为96.9%。试验结果表明,本试验所建立的间接阻断ELISA方法具有良好敏感性和特异性,可用于PRRS流行病学调查和疾病的诊断。  相似文献   

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区的原核表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

冉旭华  闻晓波  王密  李冬野  侯喜林 《中国畜牧兽医》2010,37(1):51-53

用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端的主要抗原表位区。通过对GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列进行分析,确定了其N端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了1对特异性引物,RT-PCR扩增该区段,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2N,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/LIPTG37℃诱导表达。RT-PCR扩增得到424 bp的片段,重组蛋白大小约为21.8 ku,与预期大小相符。West-ern blotting分析结果表明,该蛋白能与阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区在大肠杆菌中成功表达,具有一定的反应原性,为进一步用其建立诊断方法奠定基础。  相似文献