吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选   总被引：1，自引：1，他引：0  

李有全  罗建勋  高金亮  关贵全  马米玲  刘志杰  刘军龙  刘爱红  任巧云  党志胜  鲁炳义  刘光远  白启  殷宏 《中国农业科学》2009,42(1):331-339

 【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo（dT）引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库的滴度为8.2×108 PFU?ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。  相似文献   

微小牛蜱Bm86基因的真核表达     

李文卉罗建勋  殷宏关贵全  马米玲刘志杰刘爱红  党志胜高金亮 任巧云 《中国兽医科技》2005,35(9):718-722

采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因，将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPlC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86，测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌Gs115，经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达，SDSPAGE和Western-blotting分析结果表明，诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的68ku重组Bm86蛋白，目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的32％以上，诱导96h目的蛋白的表达量为0．36mg／mL。  相似文献   

青海血蜱cDNA表达文库的构建     

高金亮  关贵全  马米玲  刘志杰  党志胜  刘爱红  李文卉  任巧云  罗建勋  殷宏 《畜牧兽医学报》2005,36(11):1187-1191

在无RNA酶污染的环境下摘取半饱血青海血蜱唾液腺、马氏管和卵巢等器官,从中提取RNA,进而纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成青海血蜱的cDNA表达文库。经测定,所构建青海血蜱cDNA文库的库容量约为2×106PFU/mL,重组率为100%,扩增后文库的滴度为8×109PFU/mL。通过对该文库的免疫学筛选,获得一个编码青海血蜱肌球蛋白碱性轻链的全长cDNA序列。所有结果显示,青海血蜱cDNA表达文库已成功构建。  相似文献   

用溶血素从感染红细胞分离羊泰勒虫裂殖子   总被引：1，自引：0，他引：1  

李有全  罗建勋  关贵全  马米玲  高金亮  刘志杰  党志胜  刘爱红  刘军龙  任巧云  鲁炳义  白启  殷宏 《畜牧兽医学报》2007,38(10):1093-1097

用嗜水气单胞菌产生的细胞毒素—溶血素Ah-1,裂解羊泰勒虫感染的红细胞,通过Percoll密度梯度离心分离羊泰勒虫裂殖子,建立了一种自感染红细胞中分离泰勒虫裂殖子的快速方法。光学显微镜观察显示,所分离的羊泰勒虫裂殖子基本保留原有的正常形态,并从宿主细胞成分中游离。  相似文献   

莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A 和mlc的克隆表达与多克隆抗体制备     

王锦明  刘爱红  任巧云  马米玲  刘志杰  李安岩  李有全  赵帅阳  张浩浩 《中国农业科学》2013,46(10):2175-2182

【目的】克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45, GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A（Myosin A, Myo A）和肌球蛋白轻链（myosin light chain, MLC）基因及制备兔源性多克隆抗体。【方法】利用末端快速扩增（rapid-amplification of cDNA ends, RACE）技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A及mlc基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）pLys中用IPTG诱导表达;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA测定抗体的效价及反应性。【结果】获得了gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长分别为664、1391、773和2 538 bp,开放阅读框长度分别为567、1194、606和2 514 bp,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价高于1:25 600。【结论】克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长,并制备了多克隆抗体,为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础。  相似文献   

羊泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆及真核表达载体的构建   总被引：1，自引：1，他引：0  

刘爱红  关贵全  刘军龙  李有全  马米玲  牛庆丽  任巧云  殷宏  罗建勋 《动物医学进展》2009,30(12):17-20

提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-T Easy 载体上,经PCR 和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析.随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-MPSP-P32,转化大肠埃希菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确.  相似文献   

张家川县牛、羊梨形虫病流行情况调查与分析          下载免费PDF全文

杨梅  杨来康  樊天喜  刘爱红  马保录  惠继龙  陈杰  马福杰  李万宏  付志亮 《中国畜禽种业》2023,19(4):137-141

为了解张家川县牛、羊梨形虫病的流行情况,该研究于2020年3—7月份,选择张家川县15个乡镇为采样点,分别采集牛、羊血液涂片、血清及抗凝血样本,通过血液涂片吉姆萨染色镜检、酶联免疫吸附试验（ELISA）及聚合酶链反应（PCR）分析张家川县牛、羊梨形虫病的流行趋势、流行原因。结果显示：被调查的120份血液涂片样本中,梨形虫病总阳性率达30.83%,其中牛阳性率为6.67%、羊阳性率为38.89%; 677份血清样本,抗体总阳性率46.09%,其中牛阳性率为37.33%、羊阳性率为52.73%; 43份抗凝血样本,扩增阳性率为46.51%,其中牛阳性率30%、羊阳性率51.5%。可见,牛、羊梨形虫病在该县流行非常广泛,也非常严重,该地区需及时提高对梨形虫病危害和防控的认识,加强对梨形虫病的防治力度。  相似文献   

徽县水稻绿色高质高效栽培技术要点及推广措施     

刘爱红  许晓慧  梁琼 《农业科技与信息》2023,(1):56-59

随着人民生活水平的不断提高和现代农业生产的发展，人们对食品安全和品质提出了更高要求，绿色食品越来越受到人们青睐。本文阐述了水稻绿色高质高效栽培技术要点和应用推广措施，以期为引领水稻产业绿色发展、实现农民节本增效提供参考。  相似文献   

徽县小麦生产现状及发展对策     

梁琼  刘爱红  许晓慧 《农业科技与信息》2023,(2):159-162

20世纪80年代，徽县是全国商品粮（小麦）生产基地，徽成盆地是陇南小麦的主产区。近年来，随着徽县绿色高质高效创建项目的实施，绿色增产集成技术得到大力普及，小麦生产的科技含量得到显著提升。本文阐述了徽县小麦生产现状，分析了小麦生产中存在的问题，并提出了发展对策，以期推进徽县小麦生产再上新台阶。  相似文献