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大肠杆菌外排泵系统基因表达及ELISA检测方法建立 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】对大肠杆菌AcrAB外排泵系统acrA、acrB基因进行原核表达,获得的表达产物AcrA、AcrB蛋白分别免疫兔,制备相应的抗体,建立大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法。【方法】扩增AcrAB外排泵系统acrA、acrB基因片段,扩增片段分别与原核表达载体 pET-41a(+)连接构建重组质粒,于BL21（DE3）中进行诱导表达。表达产物AcrA、AcrB纯化后分别免疫新西兰大白兔,获得抗AcrA、AcrB抗血清,并用Western blot方法对表达产物进行鉴定分析。纯化的AcrA、AcrB蛋白分别按不同的浓度包被酶标板,与不同稀释倍数的抗血清反应,通过ELISA检测确定最佳抗原包被浓度及抗体稀释度,初步建立大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法。【结果】成功克隆和表达了 acrA、acrB基因片段,经 SDS-PAGE检测表明两种表达产物 AcrA、AcrB均以可溶性蛋白形式存在。AcrA、AcrB抗原蛋白最佳包被浓度分别为 1.0μg?ml-1和0.5μg?ml-1,抗AcrA、AcrB血清的最佳稀释度分别为1﹕800和1﹕400。用初步建立的ELISA方法检测8株大肠杆菌多重耐药菌株外排泵表达水平,结果表明分别用两种蛋白作包被抗体检测外排泵表达水平的结果一致。【结论】本研究通过原核表达的方法获得大肠杆菌AcrAB外排泵系统AcrA、AcrB蛋白并制备了相应的抗体,分别用两种抗体包被酶标板,并建立了大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法,对8株多重耐药菌株的检测结果表明该方法可行、可靠。 相似文献
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【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASFV)抗体化学发光检测方法,用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白,用适量的牛血清白蛋白(BSA)进行封闭,加入检测样品进行反应,以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标抗体,加入相应底物进行显色,优化各项反应条件,建立ASFV抗体化学发光检测方法,并对该方法的特异性、敏感度、重复性和检出率进行验证。【结果】建立的ASFV抗体化学发光检测方法蛋白与羧基磁珠偶联最适pH为7.0,最佳蛋白偶联浓度为5μg/mL,使用10%BSA溶液封闭效果最佳,反应磁珠终浓度为1.00 mg/mL,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶40 000。同时该方法反应时间为30 min,血清稀释度为1∶512,敏感度高于商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒,与猪瘟病毒、A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒gE、猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性标准血清均无交叉反应。重复性试验中,批内变异系数为4.41%～8.70%,... 相似文献
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强鸡散对免疫抑制小鼠脾转录因子GATA-3和T-bet 表达量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
试验旨在通过定量检测小鼠转录因子T-bet、GATA-3 mRNA表达水平,探讨强鸡散对环磷酰胺致免疫抑制小鼠转录因子GATA-3和T-bet的调节作用.40只体重20 g左右的昆明纯种小鼠被随机分为4组:环磷酰胺组、中药组、环磷酰胺+中药组、对照组,采用实时荧光定量PCR方法,以β-actin基因作为内参基因,检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达量.结果显示:强鸡散能改变小鼠脾脏转录因子GA TA-3的相对表达量,对T-bet基因表达量没有明显影响.表明强鸡散具有调节环磷酰胺致免疫抑制小鼠脾脏转录因子GATA-3和T-bet表达量的作用,通过降低GATA-3的表达量,间接减少Th2细胞的生成,使Th1/Th2平衡向Th1方向转化. 相似文献
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番鸭新病——"花肝病"的研究初报 总被引：10，自引：0，他引：10
番鸭“花肝病”（暂定名）自１９９９年春季以来 ,流行于广东、福建两省的番鸭群。该病的剖检特征为肝脏出现针头大小的坏死点 ,因此称之为“花肝病”。我们对其发病特点、病理变化等进行了初步研究。现报道如下。１流行病学、临床症状和病理变化１．１流行情况自１９９９年春季以来 ,广东省的三水、中山、南海、番禺、广州市郊等地和福建省的莆田等地的雏番鸭发病。易感动物目前仅见于番鸭。发病日龄为７～３５日龄 ,以１５日龄以内的雏番鸭最易感。发病率５０ %～９５ % ,死亡率６０ %～９０ %。发病鸭群应用过多种疫苗免疫 ,也应用过抗番… 相似文献
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本研究从主动外排机制、膜孔蛋白缺失及氟喹诺酮类药物作用靶位改变等几个方面探讨,临床分离的20株动物源性多重耐药大肠杆菌的耐药分子特征。实验结果表明,20株临床分离大肠杆菌gyrA83、gyrA87、parC80的突变率分别为95％、85％、55％。gyrA和parC共同突变的有11株,突变率为55％;20株多重耐药菌大肠杆菌普遍存在主动外排机制,主要介导对部分氨基糖苷类、四环素、氟苯尼考和氟喹诺酮类药物耐药,当添加外排泵抑制剂PAβN后多数菌株庆大霉素、新霉素、四环素、氟苯尼考及氟喹诺酮类药物的MIC都降低了2倍～256倍。利用建立的ELISA方法检测外排泵AcrA蛋白的表达水平,结果证实所有,临床分离菌外排泵表达都增高;20株分离大肠杆菌中,部分菌株缺失OmpC或OmpF蛋白,同时缺失这两个蛋白的只有3株。部分菌株OmpF蛋白条带附近存在有多重耐药相关蛋白（Mar）。本研究结果揭示多重耐药大肠杆菌对常用抗菌药物高水平的耐药表型是主动外排机制、药物作用靶位的改变、外膜通透性的改变及其它机制共同作用的结果。 相似文献
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免疫佐剂广义上是指免疫系统的调节剂。佐剂是先于抗原或与抗原同时应用,能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,能增强该抗原的免疫原性或改变免疫反应类型,而本身并无抗原性的物质。佐剂作用于半抗原或抗原,作用于参与免疫应答的细胞,主要通过增强巨噬细胞活性,促进T细胞或B细胞的反应来行使其作用。佐剂可突出抗原表位,诱导较强的免疫应答;有的使抗原颗粒化而缓慢释放,诱导长时期的免疫应答。研究证叽越来越多的物质被发现有佐剂功能,这些物质主要有以下几类。1油类和无机盐类免疫性剂主要有佛氏佐剂、可降解的… 相似文献
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随着国民经济的发展，人民生活的逐步提高，人们对动物性蛋白的需求量越来越多，品质要求越来越高。对养鸡业，人们不仅要求高的产蛋率，而且需要良好的蛋品质。饲料添加剂被称为饲养报酬的支柱，适当添加可提高饲养报酬，降低发病率，改善肉品质，提高产蛋率等。抗生素和化药常被用作添加剂，虽可减少发病率或死亡率，但是蛋鸡饲料中长期添加抗生素和化药，所产生的抗药性和残留，引起的公害是人法避免的。中兽医重视“整体观念”和“四时调理”，针对蛋鸡的生理特点及四时季节冷暖不同而重于调整鸡的整体机能。中草药以其来源广、无毒副作… 相似文献
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番鸭“花肝病”的研究简报 总被引：8，自引：1，他引：7
1999年初至今 ,在广东省的三水、番禺、南海、中山 ,福建莆田等地多处番鸭场均发生一种临床上以缩头、厌食、拉白(绿 )痢为特征的流行病 ,其病变为肝、脾出现坏死点 ,肾肿大出血等。该病潜伏期较长、病程不一 :发病率为 5 0 %～90 %,死亡率 60 %～ 90 %,给广大养殖户造成较大经济损失。据其病变特征 ,群众形象地称之为番鸭“花肝病” ,因其病原尚待确定 ,我们也暂如此称之。目前国内外尚未见报道类似鸭病。我们对该病的发病情况作了调查 ,并进行了治疗试验、病例复制试验和病原的分离等工作 ,现简报如下。1 发病情况调查在广东省的三水、番… 相似文献