用斑点杂交法同时检测鸡群中的CAV MDV和REV   总被引：9，自引：1，他引：8  

姜世金  张志  孙淑红  杨汉春  崔治中 《中国兽医杂志》2003,39(5):6-8

为研究鸡传染性贫血病毒(CAV)在鸡群中的感染状况以及马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮细胞增生病病毒(REV)在鸡群中的发病率，用斑点杂交法对山东省4个肉鸡场和2个肉种鸡场进行CAV、MDV和REV的检测，结果表明除一个肉种鸡场没有检测出REV以外，其他鸡场均同时检测出CAV、MDV和REV，并且发现直接从病科中检测CAV的阳性率(20％)远远低于将病科接种SPF鸡胚后的检出率(80％)。  相似文献   

2012~2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测   总被引：3，自引：0，他引：3  

孔令超  李志国  张瑞华  焦玉祥  马明杰  郭翠平  朱岩丽  谢之景  姜世金 《中国动物传染病学报》2014,(4):56-62

为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的基因型分布,及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响,分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物,对93株2012~2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测,并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性(50.54%~86.30%);PMQR基因携带率达到60.21%(56/93),其中26.88%(25/93)的菌株携带2种PMQR基因,1.07%(1/93)的菌株携带3种PMQR基因;qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到,qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛,其检出率依次为22.58%(21/93)、40.86%(38/93)和24.73%(23/93)。  相似文献   

猪流感病毒H1N1亚型济南株HA、NA、NP基因的克隆与序列分析     

朱晓林  凌宗帅  祝素珍  谢之景  赵宏坤  姜世金  张兴晓 《中国兽医学报》2011,31(1)

根据GenBank中流感病毒H1N1亚型HA、NA、NP基因序列,分别设计扩增HA、NA、NP基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒(SIV)H1N1济南株(SW/SD/JT/07)HA、NA、NP基因,分别将RT-PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果显示,SW/SD/JT/07(H1N1)HA基因长为1 701bp,编码566个氨基酸;HA蛋白切割位点为IPSIQSR↓G,属于非高致病性毒株;HA蛋白有8个糖基化位点,其中有6个在HA1蛋白上,有2个在HA2蛋白上,与个别参考毒株糖基化位点个数不同;HA蛋白上的受体结合位点与多数参考毒株一致。SW/SD/JT/07(H1N1)NA基因长为1 410bp,编码469个氨基酸;NA基因颈部未发现氨基酸缺失现象;NA蛋白的头部有5个可能的抗原位点Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ分别由5个区段组成,在340、346、366位分别为P、I、N,其余参考毒株在相应位置的氨基酸分别为S、V、S;NA蛋白共有8个糖基化位点,与个别参考毒株的糖基化个数不同。SW/SD/JT/07(H1N1)NP基因长为1 565bp,编码498个氨基酸,根据HA、NA、NP基...  相似文献   

PRRSV持续性感染猪群抗体动态观察及对猪瘟疫苗免疫的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

王美君  陈静  孙圣福  马慧玲  田夫林  姜世金 《中国兽医学报》2011,31(5)

为了解在PRRSV持续性感染猪群中的抗体动态,对蓝耳病阳性猪场育肥猪、经产母猪、后备母猪及仔猪每周采血1次,分离血清,用RT-PCR方法检测PRRSV,ELISA试剂盒检测抗PRRSV抗体并检测猪瘟疫苗免疫后的抗体水平.结果表明,在猪群康复后PRRS抗体水平呈下降趋势,并逐渐趋向于稳定,当整个猪群再次表现临床症状时,抗体逐渐上升至一定水平,但抗原检出率较低;猪瘟疫苗免疫后抗体水平上升依然很快,免疫效果较好.  相似文献   

犬细小病毒Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用     

刘海防  胡传伟  谢之景  姜世金  张兴晓  倪长鹏  贾赟  杨笃宝 《中国兽医学报》2010,30(5)

根据GenBank中CPV VP2蛋白基因序列,选择CPV VP2基因保守序列,分别设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了CPV Taq Man荧光定量PCR检测方法。对CPV Taq Man荧光定量PCR的反应体系和反应条件进行优化,并对其特异性和敏感性进行了测定,建立标准曲线。结果,CPV Taq Man荧光定量PCR对CPV检测阳性,并能对10拷贝/μL的CPV模板检测阳性,标准曲线的相关系数为0.9992,但对非CPV模板检测阴性。结果表明,所建立的CPV Taq Man荧光定量PCR具有很好的特异性和敏感性,标准曲线具有很强的实用性。同时对CPV Taq Man荧光定量PCR与CPV PCR进行了比较试验,结果前者比后者的敏感性高100倍。采用CPVHA、CPV PCR与CPV Taq Man荧光定量PCR对55份临床样品进行检测,CPV HA对30份样品检测阳性,CPVPCR对40份样品检测阳性,CPV Taq Man荧光定量PCR对47份样品检测阳性。这表明,CPV Taq Man荧光定量PCR对样品的检出率最高,具有特异、敏感、快速的特点,适用临床样品的检测。  相似文献   

猪流感病毒H9N2亚型济南株HA、NA基因的克隆与序列分析     

朱晓林  凌宗帅  邱莹  谢之景  赵宏坤  姜世金  张兴晓 《中国兽医学报》2010,30(2)

根据GenBank中流感病毒H9N2亚型HA基因与NA基因序列,分别设计扩增HA基因与NA基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒H9N2济南株(SW/SD/JT/07)HA基因和NA基因,分别将RT-PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果表明,SW/SD/JT/07 HA基因长度为1701bp,编码566个氨基酸,HA0切割位点序列为R-S-S-R-G,属非高致病性毒株;HA蛋白有8个糖基化位点,与参考毒株糖基化位点数一致;HA蛋白有5个受体结合位点,其中在190位氨基酸与其余参考毒株存在差异。SW/SD/JT/07 NA基因长度为1413bp,编码470个氨基酸,NA蛋白基质结合部与参考毒株一致,高度保守;NA蛋白有5个抗原位点,在325位为D其余参考毒株均为N,SW/SD/JT/07与DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99在398位为E,其余参考毒株为D或N;SW/SD/JT/07 NA蛋白与CK/SH/F/98,DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99,SW/GD/WXL/04,SW/SD/W4/03,SW/YN/Simao2/07一样在茎区63,64,65位发生氨基酸缺失。SW/SD/JT/07 HA基因与参考毒株的同源性82.5%～98.6%,NA基因与参考毒株的同源性82.2%～99.1%。SW/SD/JT/07 HA基因与NA基因系统发生树分析表明,SW/SD/JT/07与AIV H9N2亚型亲缘关系密切。  相似文献   

仔猪猪瘟母源抗体消长规律   总被引：1，自引：0，他引：1  

王波  陈静  王敏  田夫林  姜世金 《中国兽医学报》2010,30(4)

采用IDEXX公司阻断ELISA检测试剂盒,对仔猪0、1、4、7、10、14、20、30日龄的猪瘟母源抗体进行检测。结果表明哺乳前仔猪抗体水平为0,第1天抗体水平达到最高,之后缓慢下降。20日龄断乳时抗体水平有明显下降,但平均抗体水平还在25.9之上,30日龄平均抗体水平为24.3,由此推算仔猪猪瘟母源抗体的半衰期为6.8 d。  相似文献   

鸭圆环病毒Cap 基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定     

张兴晓  邹金峰  相琪旺  王鑫  陈琳  谢之景  姜世金 《西北农业学报》2012,21(3):7-11

通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。  相似文献   

Ⅰ型马立克氏病病毒Md11株pp24基因的真核表达     

姜世金  杨汉春  崔治中 《中国预防兽医学报》2005,27(5):326-328

通过PCR方法扩增MDV Md11株的pp24基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/zeo( )中.阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验检测,结果证明阳性克隆在CEF细胞中表达了pp24蛋白.  相似文献   

从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒   总被引：35，自引：4，他引：35  

张志  崔治中  姜世金 《中国兽医学报》2004,24(1):10-13

将表现为典型 J亚群禽白血病肿瘤的病料分别接种于鸡胚成纤维细胞和 DF1细胞 ,采用间接荧光抗体试验(IFA)和 PCR方法 ,从这些肿瘤病料中分离和鉴定出 8株 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)。对证明感染了 AL V- J的细胞继续培养 ,并用禽网状内皮组织增生症病毒 (REV)的特异性单抗及引物做 IFA和 PCR,在 8株 AL V- J中 ,有 3株AL V- J的感染细胞中同时有 REV感染。由此表明 ,发生肿瘤的肉鸡中 ,AL V- J和 REV的共感染已相当普遍。将这 3株 REV- SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和 SD0 10 2的 3′- L TR用 PCR扩增、克隆和序列比较 ,发现分离的 SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和SD0 10 2与国内的另外 2株 REV- SD990 1和 HA990 1的同源性为 96 .7%和 96 .1% ;而与另 1株 REV参考株鸭脾坏死性病毒 (SNV)的同源性高达 99%。  相似文献