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通过乳腺注射牛γ干扰素(BoINF-γ)和人溶菌酶(LYZ)表达质粒,比较单独和联合注射重组质粒与抗生素对奶牛乳房炎的治疗效果。将PCR扩增的BoINF-γc DNA插入真核表达载体pcDNAK,用重组质粒pcDNAK-BoINF-γ转染NIH 3T3细胞,经免疫荧光试验证明,重组质粒能正确表达。将91个奶牛乳房炎乳区分为4组,通过乳腺穿刺法注射,第1组注射400μg pcDNAKLYZ,第2组注射400μg pcDNAK-BoINF-γ,第3组注射400μg pcDNAKLYZ和400μg pcDNAK-BoINF-γ,第4组注射100 IU青霉素和25μg链霉素,次日重复注射1次。在注射后10 d进行临床症状观察、乳汁体细胞检测和细菌培养计数。结果显示:注射pcDNAKLYZ对临床型乳房炎的治疗效果为80%,对隐性乳房炎的治疗效果为79.2%;注射pcDNAK-BoINF-γ对临床型乳房炎的治疗效果为50%,对隐性乳房炎的治疗效果为66.7%;联合注射pcDNAKLYZ和pcDNAKBoINF-γ对临床型乳房炎的治疗效果为100%,对隐性乳房炎的治疗效果为83.5%;青链霉素合剂对临床型乳房炎的治疗效果为50%,对隐性乳房炎的治疗效果为60%。试验结果表明,联合注射人溶菌酶和牛γ干扰素表达质粒对奶牛乳房炎具有更好的治疗效果。 相似文献
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为了研究分枝杆菌热休克蛋白(Hsp70)对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的免疫佐剂作用,以自聚肽ELK16为纯化标签,分别与Hsp70和PCV2 Cap基因融合后诱导表达,利用离心洗涤法进行融合蛋白纯化,获得了纯化的融合蛋白ELK16-Cap、ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70,其纯度高达95%、96%和85%,产量分别为92、84和83 mg/L;接着用PBS、ELK16-Cap、ELK16-Cap+弗氏不完全佐剂(IFA)、ELK16-Cap+ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70分别免疫小鼠,初免后21 d ELK16-Cap-Hsp70免疫组抗体水平达到最高;在二免后2周取免疫小鼠脾脏淋巴细胞,用试剂盒检测细胞因子表达,TNF-α浓度依次为588.55、802.55、995.55、1 382.55和1 719.55 pg/mL,IFN-γ浓度依次为46.30、92.22、155.56、470.37和518.15 pg/mL,IL-12浓度依次为14.72、28.06、20.83、31.39和34.72 pg/mL。这些研究结果表明,Hsp70对刺激PCV2 Cap蛋白ELISA抗体产生的作用优于IFA,但两者融合蛋白的刺激作用较强;与Cap蛋白融合的Hsp70对刺激TNF-α、IFN-γ和IL-12产生的作用较强,而ELK16-Hsp70+ELK16-Cap对3种细胞因子产生的刺激作用次之。 相似文献
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非洲猪瘟（Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ，ＡＳＦ）是发生于家猪的高度接触性传染病，其抗感染机制十分复杂。一方面，除某些超强毒株外，感染康复猪能抵抗同源毒株的攻击或再感染；另一方面，大量的体外中和和体内被动免疫保护试验表明，病毒特异抗血清对病毒不具... 相似文献
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用miRNA Target Finder分析软件预测干扰RB1B株马立克氏病病毒（Marek’s Disease Virus，MDV）gM基因翻译的潜在靶序列，从中筛选出3个作为干扰对象，根据干扰载体pRFPRNAiC特点，设计合成3对单链DNA序列，经PCR反应扩增出双链DNA，并将其插入干扰载体pRFPRNAiC，构建重组干扰质粒pRFPRNAiCgM1、pRFPRNAiCgM2、pRFPRNAiCgM3。将质粒pRFPRNAiCgM1以不同的剂量转染鸡胚成纤维（CEF）细胞，确定最佳转染质粒量，试验结果表明1μg转染剂量转染效果最佳。以1μg剂量将3种重组干扰质粒分别转染CEF细胞，24h后感染RB1B株MDV，72h后用空斑计数MDV在CEF细胞上增殖数量，以此判定miRNA干扰效果，结果显示，重组干扰质粒中质粒pRFPRNAiCgM2干扰效果较好，能有效抑制MDV在CEF上的生长繁殖。 相似文献
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根据已经发表的大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位(FedA／ab)的基因序列(fedA／ab)设计1对引物，利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107／86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列．并克隆至pGEM-T载体，获得重组质粒TF107A、TYCED1A、TYCED2A、TCA、TDA、TEA、T12FA、T8813A、T8199A、T2134PA。通过序列测定，并与已发表的fedA／ab进行比较、基因树分析，可将这10个菌株分为2个基因群，其中F107／86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedA／ab具有高度同源性，属于fedA／ab．大小为513bp；E、8813、8199、2134P构成另一单独的分支，属于fedA／ac．大小为516bp。 相似文献
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防治奶牛乳房炎基因药物介绍 总被引：3，自引：0，他引：3
奶牛乳房炎是世界范围内发生最普遍、防治最难、花费最大的奶牛疾病之一，对奶牛业的危害主要包括以下几个方面：①感染和发病率高，据报道，国外隐性奶牛乳房炎的发生率在20％～60％之间，我国的发生率在46.4％～85.7％之间；②降低奶产量和奶品质。隐性乳房炎能使奶产量降低10％～15％（平均降低3.7千克），因病牛乳汁中含有大量的病原微生物及其毒素，食用后可引起发烧、呕吐、腹泻、脱水、过敏等病理反应；③增加医药费用。据报道，美国治疗一例乳房炎的费用为117～182美元，丹麦为225美元，加拿大为140～300美元，我国平均为23元（无明确评定指标）；④导致牛奶废弃，造成更大损失。因为治疗后的牛奶中有大量的抗菌素残留，应予以废弃，据估计国内弃奶损失高达260元／头。 相似文献
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为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗免IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀释,40C孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0～11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用.这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱. 相似文献
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在秋季驱虫季节,选择荷斯坦(Holstein)、夏洛来(Charolais)、利木赞(Limousin)、西门塔尔(Simmental)4个品种种公牛各10头,将其分为两组,分别采用阿维菌素背部浇泼和伊维菌素肌肉注射两种给药方法,研究不同驱虫药和方法对种公牛精子质量的影响。结果与投药前相比,伊维菌素注射法驱虫可使种公牛精液活力、密度、活精子百分数、顶体完整率平均下降14.3%(p<0.01)、28.4%(p<0.01)、21.0%(p<0.01)和19.5%(p<0.01),精子畸形率上升30.8%(p<0.01),总冻精产量由给药前2个月的69820支下降到给药后2个月的65540支;阿维菌素浇泼法驱虫可使种公牛精液活力、密度、活精子百分数、顶体完整率平均下降1.6%(p>0.05)、5.4%(p>0.05)、9.4%(p<0.05)和5.0%(p>0.05),精子畸形率上升15.8%(p<0.01),总冻精产量由投药前2个月的70370支上升到投药后2个月的71870支。两种驱虫方法对种公牛精液品质的影响因品种不同而异,从总的趋势看,无论是阿维菌素浇泼法还是伊维菌素注射法,对荷斯坦种公牛精液品质的影响小于西门塔尔、夏洛来和利木赞种公牛。 相似文献
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四环素诱导表达系统（Tet-off／Tet-on系统）是比较成熟的真核生物基因诱导表达系统之一,具有高效、无毒、严密开／关功能的特点。猿猴病毒40T（SV40T）是一种病毒癌蛋白,其与肿瘤抑制蛋白p53和Rb结合,并使之失活,从而消除它们抑制细胞生长的功能,使细胞分裂加速,形成肿瘤。利用Tet-on系统首先稳定筛选获得了表达Tet-on系统调节元件rtTA的阳性细胞CHO-pTet-on,再通过稳定筛选又成功得到导入其反应元件的双阳性细胞CHO-pTet-on-pTRE2-SV40T-Hyg,经强力霉素诱导表达了目的基因SV40T,建立了Tet-on基因诱导表达系统的细胞诱导表达研究平台。 相似文献