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大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定 总被引：5，自引：2，他引：3
根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TFl07E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明：该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS—PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16．297ku)与谷胱苷肽转移酶(27．335ku)相连组成分子量为43．632ku的融合蛋白。 相似文献
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蛋白多肽二级结构的电脑预测表明，非洲猪瘟病毒ｋ８Ｒ基因编码带有多个疏水氨基酸小区的２７ｋＤａ蛋白质。该基因的ＰＣＲ产物克隆入质粒ｐＧＥＸ－２Ｔ后，在大肠杆菌中表达４２－５４ｋＤａ不溶性ＧＳＴ－ｋ８Ｒ融合蛋白。此表达蛋白能被针对不同非洲猪瘟病毒侏的猪免疫血清识别。 相似文献
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致奶牛乳房炎链球菌快速鉴别及耐药试验用选择培养液的培养特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
奶牛乳房炎是影响世界奶牛业发展的主要疾病之一，虽然其病原菌有数十种之多，但以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌为主。标准的链球菌鉴定程序包括增菌培养、血琼脂平板培养、革兰氏染色镜检和生化试验，然后用细菌纯培养进行纸片扩散法药敏试验或最小抑菌浓度（MIC）测定，整个过程不仅需要5d左右的时间，而且需要必要的细菌学试验条件和技术。因此，很多奶牛场在治疗乳房炎前很少进行必要的细菌学鉴定和药敏试验，长期、盲目、超量使用抗生素已导致细菌耐药现象日益普遍。 相似文献
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本研究在Baird-parker培养基基础上,研制出致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌(SA)快速鉴别培养及药敏试验用选择mBP培养液.在此培养液中,除SA生长良好外,链球菌等4种革兰氏阳性茵和大肠杆茵等6种革兰氏阴性菌均不生长;将10μL奶样接种入mBP培养液,37℃培养24 h后即可根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中有无SA,检测灵敏度为60个细菌:经与标准纸片法药敏试验对比证明,mBP培养液对常用于奶牛乳腺炎治疗的7类8种抗生素的抑茵活性无明显影响:将10μL奶样或选择培养物接种入含标准抑茵浓度抗生素的mBP培养液中,35℃培养24 h后即能根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中SA对所试抗生素的敏感性.以mBP培养液为基础建立的致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球茵快速鏊剐及药敏试验方法具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用. 相似文献
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为了掌握上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌基因型,本文采用ERIC-PCR分型方法,对从患有乳腺炎的奶牛乳汁中分离所得的74株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74株金黄色葡萄球菌可扩增出4~9条带,共分为4个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占97.7%。发现在同一牛群中的分离株可以是相同的基因型,也可以存在不同的基因型,而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。但总的来说,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因型,在某个或某些牛群中存在金黄色葡萄球菌的优势基因型,而不同地区、不同环境和条件下同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌基因型。 相似文献
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通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichia pastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1.分别用Sal Ⅰ及Bgl Ⅱ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得抗3 mg/ml G418 Mut+型分泌表达hKLK1的重组酵母菌4株,抗1 mg/mlG418 Muts型分泌表达hKLK1的酵母菌3株.酶活性测定数据表明:高拷贝转化子重组蛋白表达量高于低拷贝转化子;Mut+型转化子重组蛋白表达量高于Muts型转化子;且当甲醇诱导体积分数为2%时,重组蛋白的表达量最高.进一步的Western-blotting分析证明,表达的重组hKLK1分子质量正确,能被特异的抗体识别. 相似文献
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表达可溶性猪唾液酸黏附素重组腺病毒的构建和鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
猪唾液酸黏附素(pSn)是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主的重要受体。采用RT-PCR和基因合成方法构建能够表达猪Sn蛋白前4个Ig样结构域(Sn4D)和IgG1Fc片段融合蛋白的穿梭载体pShuttle-Sn4D-Fc,利用AdEasyTMAdenoviral Vector System制备重组腺病毒。透射电子显微镜观察表明,构建重组病毒rAd-Fc和rAd-Sn4DFc具有典型腺病毒形态;在重组腺病毒感染的细胞中,RT-PCR能检测到预期的Fc和Sn4D-Fc转录子;在重组腺病毒转导细胞裂解物及培养上清中,Western-blot能检测到预期的28ku Fc或72ku Sn4D-Fc蛋白;从重组病毒转导细胞培养上清中纯化的Fc和Sn4D-Fc蛋白为单一的条带,能被抗猪IgG或Sn抗体识别。结果表明:成功构建了分泌表达猪Fc片段和Sn4D-Fc融合蛋白的重组腺病毒,为用Sn可溶性受体阻断抗PRRSV感染研究打下基础。 相似文献
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利用F18菌毛a因子单克降抗体以及已建立的鉴定F18菌毛及其亚型的双重PCR法,对来自断奶仔猪水肿病和／或腹泻病例的60株VTEC、24株VTEC／ETEC以及24株ETEC的进行了F18菌毛检测,以了解F18ab^＋和F18ac^＋大肠杆菌在江苏省断奶仔猪群的分子流行病学。结果表明：通过F18菌毛a因子单克隆抗体,可检测出52株大肠杆菌为F18^＋,检出率为48．15％;而通过双重PCIL方法,共检测出63株大肠杆菌为F18^＋,检出率为58．33％,其中53株（49．07％）为F18ab^＋10株（92．6％）为F18ac^＋。另外还发现：在VTEC、VTEC／ETEC以及ETEC的菌株之间,这2种F18菌毛亚型的分子流行病学是不同的。在VTEC中,F18ab^＋,菌株37株（61．67％）,未发现F18ac^＋菌株;在VTEC／ETEC中,F18ab^＋菌株15株（62．50%）,F18ac^＋菌株8株（33．33％）;而在ETEC中F18ab^＋菌株只有1株（4．17％）,F18ac^＋菌株只有2株（8.33％）。以上数据表明：④PCR法检测F18菌毛优于单抗法;②F18菌毛是VTEC／ETEC、VTEC的重要致病因子,而在ETEC中则明显低于VTEC／ETEC和VTEC;⑧F18ab^＋菌株一般为SLT-IIe^＋,而F8ac^＋菌株一般为STI^＋。 相似文献