鸡Mx基因的表达及其抗血清的制备     

谭复善  李文超  崔雷  刘丹  秦红刚  孟庆文 《中国预防兽医学报》2009,31(5)

Mx蛋白已被证明具有抗A型流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的生物活性.本研究通过PCR扩增,将Mx基因克隆至pMD18-T载体;经测序验证后将Mx基因克隆到原核表达载体pProExHTa和pcDNA3.1中.以构建的重组质粒pProExHTa-Mx转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达,以切胶纯化方式回收了Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清;SDS-PAGE和western blot分析表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 ku,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应.以真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性.抗血清的制备为鸡Mx蛋白的功能研究、Mx蛋白在转基因动物机体中表达的检测奠定了基础.  相似文献   

PCR技术检测产蛋下降综合征病毒核酸的研究     

刘大程  刘红葵  刘岩芳  孟庆文 《畜牧与饲料科学》2005,26(2):23-25

根据已报道的腺病毒DNA序列，设计合成了1对核苷酸引物，引物间隔约630bp。用该引物对EDS76病毒内蒙古地区分离株(N3、B4)和参考株(AV-127)核酸进行聚合酶链式反应(PCR)，均扩增出约630bp的特异性DNA片段。对PCR灵敏度进行测定，该法可检出100pg的样品模板。结果表明，PCR是检测EDS76病毒的一种简便快速、特异性强和灵敏度高的方法。  相似文献   

SYBR Green Ⅰ荧光RT—PCR检测新城疫病毒的研究     

司昌德  秦红刚  孟庆文  闫丽辉  刘加森  韩凌霞  姜骞  曲连东 《黑龙江畜牧兽医》2008,(11)

新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性、败血性禽类传染病.NDV为副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属单股负链RNA病毒.近年来,新城疫呈现散发性和非典型性流行.在临床上,非典型的新城疫在呼吸道症状上和禽流感(AI)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性喉气管炎(ILT)极为相似,因此给本病的确诊增加了难度,故开发出快速、灵敏、特异的诊断方法显得极为重要.  相似文献   

猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化     

肖一红  刘光亮  童铁钢  王群  孟庆文  吴东来 《中国兽医杂志》2008,44(8)

在病毒感染机体时,MHC-I类分子限制的抗原特异性CTL反应是清除病毒、控制病毒复制和散播的主要机制[1].  相似文献   

禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因的克隆及其重组禽痘病毒转移载体的构建   总被引：10，自引：1，他引：9  

乔传玲  于康震  邓国华  王秀荣  孟庆文  田国斌  唐秀英 《中国兽医学报》2003,23(2):111-114

采用RT－PCR技术扩增了禽流感病毒A／Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶（NA）基因，并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为：NA基因全长为1410bp，共编码469个氨基酸，从pUCNA中切下NA基因片段，将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点，将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点，然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段，再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点，经限制性内切酶分析，PCR鉴定等，证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功，从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。  相似文献   

基质配方对试管苗生长影响的试验     

吴德寿  孙福临  孟庆文  归原 《中国马铃薯》2001,15(5):307-307

青岛恒生源生态农业有限公司生物工程中心 ,1999年新上脱毒马铃薯原原种生产。为了探索基质配方对脱毒试管苗生长的影响 ,生物工程中心对基质中大量元素和白糖的不同含量与常规培养基配方进行了比较试验。1　材料与方法鲁引 1号脱毒马铃薯试管苗。配方试验对大量元素含量和白糖含量分别做了6组处理。常规配方做对照 (ＣＫ )。重复 10次。ｐＨ值用 ｐＨ试纸于灭菌前测试。表中基质成分含量以每升溶液中的含量计算。表 1　基质配方编号 大量元素(ｍｌ)微量元素(ｍｌ)铁盐(ｍｌ)白糖(ｇ)琼脂(ｇ) ｐＨ115 0 10 10 10 0 75 8～ 6 02 15 0 10 1…  相似文献   

H5亚型禽流感病毒核蛋白基因重组质粒的构建及其在Hela细胞的瞬时表达     

刘光亮 王群童铁钢  肖一红孟庆文 吴东来 《中国兽医科技》2006,36(3):189-192

采用PCR技术从重组质粒pMel-NP扩增得到了禽流感病毒（AIV）A／GOOse／Guangdong／1／96（HSN1）株的核蛋白（NP）基因，将其亚克隆至真核表达载体pVAX1上。将提取的pVAX—NP阳性克隆转染Hela细胞，48h后经间接免疫荧光试验和Western—blotting检测，NP基因在Hela细胞中已成功瞬时表达。表达产物的分子质量约为57ku，它与H5N1亚型AIV多克隆抗血清有较好的免疫反应。  相似文献   

重组逆转录病毒介导的neo~R基因在公鼠生殖系细胞的转移   总被引：1，自引：0，他引：1  

王凤阳  张守峰  赵君  池海英  孟庆文  扈荣良  殷震 《中国兽医学报》2001,21(6)

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo R基因在公鼠生殖系细胞的转移  相似文献   

喉支消粉治疗人工诱发鸡大肠杆菌病的效果观察     

孟庆文 《辽宁畜牧兽医》2001,(3):36-36

  相似文献   

喉支消粉治疗人工诱发鸡大肠杆菌病的效果观察     

孟庆文 《现代畜牧兽医》2001,(3):36

选用25日龄、体重200～220克的健康艾维茵雏鸡150只,按常规饲养方式饲养,未经大肠杆菌苗免疫.将试验鸡随机分为5组,每组30只.A组(感染、给药组)、B组(感染、给药组)、C组(感染、给药组)、D组(感染、不用药组)、E组(健康对照组、不用药).  相似文献