H9N2亚型禽流感病毒对海兰白鸡感染和传播特性的研究     

周长良  邓瑞坡  王伟  臧凤霞  冉多良  陈洪岩  孟庆文 《中国家禽》2015,(2):26-30

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对海兰白鸡的感染和传播特性,将80只4周龄海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只,采用100~107EID50/0.4 m LH9N2 AIV以滴鼻和点眼方式攻毒,24 h后放入同居组。感染14 d内每天进行临床观察,采集咽拭子和泄殖腔拭子用于病毒分离,感染后7、10、14 d测定HI抗体滴度。结果表明:4周龄海兰白鸡感染H9N2 AIV后未出现明显的临床症状;感染剂量为100~101EID50/0.4 m L的感染组和同居组均未分离到病毒;感染剂量为102~103EID50/0.4 m L的感染组排毒期为2~6 d,同居组排毒期为4~6 d;感染剂量为104~107EID50/0.4 m L感染组排毒期为1~6 d,同居组排毒期为2~8 d;感染剂量为102~107EID50/0.4 m L感染组和同居组鸡分别于感染后7和10 d开始产生抗体,第14天感染组和同居组鸡的平均抗体滴度分别为(7.8±1.4)log2和(6.7±1.1)log2。结果显示该毒株使4周龄海兰白鸡全部感染的最低感染剂量为103EID50/0.4 m L,以106EID50/0.4 m L感染鸡,能刺激感染组与同居组产生较高的HI抗体,表明106EID50/0.4 m L H9N2亚型AIV能在海兰白鸡体内建立有效感染和传播。  相似文献   

猪MHC-Ⅰα生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化     

肖一红  刘光亮  王群  童铁钢  白宇  孟庆文  吴东来 《中国兽医学报》2008,28(4):456-460

采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞（PBMC）中获得猪白细胞抗原基因座P1、P14等位基因的胞外区,并在其3′端拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列（BSP）,构建了pET-P1-BSP和pET-P14-BSP高效表达载体并进行诱导表达和纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定。结果显示,成功构建了融合表达载体pET-P1-BSP和pET-P14-BSP,表达产物以包涵体的形式存在,获得高纯度的P1-BSP和P14-BSP蛋白,为进一步利用亲和素在体外构建SLA-I类分子肽四聚体奠定了基础。  相似文献   

薄皮甜瓜新品种靓妹的选育及示范(摘要)     

孟庆文  续延国 《吉林蔬菜》2004,(3):32-32

靓妹薄皮甜瓜是杂交一代新品种。该品种早熟,子蔓孙蔓均可结瓜;果实长椭圆形,黄白色,靓丽,桔红色瓤,水粉色肉,肉质甜脆爽口,可溶性固形物含量18％,肉厚1.8厘米左右,单瓜重400～600克,单产3700～4800千克／667米^2,高抗枯萎病、蔓枯病、炭疽病,耐贮运,适于大棚、小拱棚及露地地膜覆盖栽培。  相似文献   

绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建与表达检测     

孟庆文  曹素芳  李媛  金红  于康震 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

拟构建绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ, ＧＦＰ）基因的真核表达载体 ｐｃＤＮＡ_３ＧＦＰ,并观察其在 ＭＤＣＫ细胞（大肾细胞系）中的表达。以Ｎｏｔ　Ⅰ切取ＧＦＰ后插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ_3,以ＢａｍＨⅠ鉴定方向,以ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＴＭ将ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ转染至培养的ＭＤＣ Ｋ,经Ｇ４１８筛选ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ阳性克隆,荧光显微镜下观察。结果证实成功构建了含ＧＦＰ ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ,并成功转染ＭＤＣＫ,在荧光显微镜下阳性克隆细胞呈绿色。 ＧＦＰ基因可在 ＭＤＣＫ细胞中成功表达,并发出绿色荧光,是一良好的报告基因和筛选标记。  相似文献   

表达带His-tag的禽流感病毒HA基因杆状病毒转移载体的构建及重组病毒的鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

李永强  孟庆文  冉多良  于康震  陈化兰  李贺  吴东来 《新疆农业大学学报》2005,28(4):53-55

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A／Goose／GuangDong／1／96（H5N1）1．7kb HA基因的eDNA将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4．5，筛选到重组质粒命名为rpBacHisH5HA。测序正确后，在脂质体介导下，与线性化的杆状病毒ENA（Bac-N-Blue TMDNA）共转染Sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经3轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rBacHisH5HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。  相似文献   

表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

乔传玲  于康震  姜永萍  张建林  邓国华  孟庆文  田国斌  唐秀英 《中国农业科学》2003,36(6):704-708

 从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY6 81,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP +LacZ)。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S FPV 0 17的鸡胚成纤维细胞 ,在X gal存在的条件下 ,利用蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化以及PCR、Western blot鉴定 ,结果证明 ,获得了能高效表达AIVNP蛋白的重组禽痘病毒rFPV NP。SPF鸡体内的免疫保护试验结果表明 ,它能够诱导机体产生较高水平的NP特异性抗体 ,并对H5N1和H7N1这 2种亚型高致病力禽流感病毒的攻击提供一定的保护。  相似文献   

禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达   总被引：6，自引：2，他引：4  

乔传玲  张建林  贾永清  邓国华  姜永萍  王秀荣  孟庆文  于康震 《动物医学进展》2003,24(1):81-83

为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。  相似文献   

反义RNA及其抗病毒病的应用研究     

孟庆文  于康霞 《预防兽医学进展》2001,3(3):23-27

  相似文献   

自然感染的新疆美利奴羊中绵羊慢病毒的分离鉴定     

张福萍  邓普辉  孟庆文  简子健  李庆芬 《中国预防兽医学报》1998,(2)

本文从自然感染绵羊慢病毒的绵羊的外周白细胞及组织中分离病毒，在接种后２代均出现细胞病变效应，将病毒培养液浓缩１００倍作为抗原进行琼扩检测呈阳性反应，病毒培养液经免疫电镜检测，观察到了病毒颗粒。病毒的半数感染量约为１０－５／ｍｌ，将分离到的３株ＯＰＰＶ分别命名为ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３，ＮＸＪ－０４８１。  相似文献   

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

孟庆文  邓普辉 《中国兽医科技》1998,28(8):3-6

选１２只自然感染绵羊慢病毒的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原的抗体，出现对病毒包膜糖蛋白的抗体，同时出现对ｐ２５和ｐｇ１３５二者的抗体互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶ ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３和ＮＸＪ－０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值诊次为１×１０＾－５．６，１×１  相似文献