鸡传染性喉气管炎病毒地方株的分离鉴定     

杨明凡  崔保安  陈红英  王学斌  魏战勇 《河南农业科学》2008,(11)

对河南荥阳某养鸡场发病鸡喉头和气管等病料进行病毒分离,采用鸡胚尿囊膜接种和琼脂扩散试验对分离病毒进行鉴定。结果表明,所分离病毒为鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV),获得了1株ILTV河南分离株。参考GenBank收录的鸡传染性喉气管炎病毒基因序列设计、并合成1对引物,以ILTV地方分离株的DNA为模板,PCR扩增出1条特异性条带,测序结果与GenBank收录序列的同源性达99.9%,说明分离病毒的这一段DNA序列相对保守。  相似文献   

猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达     

郑兰兰  崔保安  陈红英  贾云飞  陈瑞亮  方忠意 《华南农业大学学报》2008,29(3)

RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T pIL18,转化E.coli JM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将其分别克隆到表达载体pQE30、pET-28a、pGEX6P-1中,构建重组表达质粒pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18.用IPTG诱导表达,重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量分别为19 000、21 000、45 000的重组蛋白.经薄层扫描分析,pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18菌体裂解物分别占菌体总蛋白的17%、28%、27%,均以包涵体形式存在.  相似文献   

酵母蛋白替代进口鱼粉对断奶仔猪 生产性能的影响     

王学兵  崔保安  魏战勇  杨明凡 《中国农学通报》2008,24(9):18-21

试验将60头28日龄断奶的健康、体重相近（7.63μ0.52kg）的长大二元杂交商品仔猪按体重、性别,随机分为5组,即对照组和4个试验组,对照组即原用进口鱼粉配方组,第1、2、3、4试验组为分别用山东济宁圣齐生物生物工程生产的活性酵母蛋白粉替代25%、50%、75%和100%的进口鱼粉组,共试验4w。研究添加不同水平酵母蛋白粉对断奶仔猪生产性能的影响。结果表明：断奶仔猪日粮中添加酵母蛋白替代进口鱼粉后均没有显著改变原添加进口鱼粉仔猪断奶后0~4w的平均日采食量和平均日增重,饲喂效果较好。综合各项试验指标,酵母蛋白粉以50%~75%的比例替代进口鱼粉,添加到断奶仔猪日粮中对仔猪生产性能有明显的促进作用,且饲料成本下降。  相似文献   

板蓝根生物碱抗猪细小病病毒的作用   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈瑞亮王林青  崔保安张红英王学兵  徐端红韩卫丽 《中国农学通报》2010,26(22):20-23

摘 要:【目的】探讨板蓝根水溶性生物碱和脂溶性生物碱对猪细小病毒的体外抑制作用。【方法】采用醇提法从板蓝根中提取了水溶性生物碱和脂溶性生物碱,并测定其对PK-15细胞的最大无毒浓度（TD50）,应用先加药后接种病毒、先接种病毒后加药、病毒和药物体外作用2h后再同时加入细胞单层三种加药方式测定了生物碱的体外抗PPV效果。【结果】板蓝根水溶性生物碱的TD0为62.5μg /ml,板蓝根脂溶性生物碱的TD0为50μg /ml.板蓝根水溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为7.81μg /ml、15.62μg /ml、7.81μg /ml。板蓝根脂溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /ml、12.5μg /ml、0.78μg /ml。板蓝根混合生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /m、12.5μg /ml、0.78μg /ml。【结论】板蓝根脂溶性生物碱的抗病毒作用强于板蓝根水溶性生物碱,板蓝根混合生物碱的抗病毒作用比两种生物碱单独使用效果要好。  相似文献   

"决胜市场"论坛第十五期·赢在金百合专场生态养殖与食品安全     

崔保安  刘来亭  黄炎坤  郭金玲  白海银  郑文革  高留来  杜灵广  谭然  常剑峰  刘磊  张家昌  徐流中  苏会兵  司艳丽 《河南畜牧兽医(综合版)》2010,31(11)

论题一 抗生素滥用的危害及原因有哪些? 主持人:抗生素在治疗人类疾病、促进人类健康、延长人类寿命等方面作出了巨大贡献.  相似文献   

表达传染性支气管炎病毒S1基因与鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建     

管倩  陈红英  崔保安  杨明凡  高文明  李双亮 《中国兽医学报》2010,30(11)

将含痘病毒启动子LP2EP2的鸡传染性支气管炎病毒S1糖蛋白基因和鸡IL-18(ChIL-18)基因同时插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组禽痘病毒转移载体pSYS1/ChIL-18。用脂质体将其转染已感染禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达S1和鸡IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-S1-ChIL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选,对重组病毒rFPV-S1-ChIL-18进行多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用S1基因和鸡IL-18基因特异引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7 kb和1条约0.6 kb的带。经间接免疫荧光法和T细胞转化试验证实感染rFPV-S1-ChIL-18的CEF中存在表达的S1和鸡IL-18。  相似文献   

人β2微球蛋白成熟肽基因克隆及其原核表达载体的构建     

张蕾  李新生  崔保安  陈红英  魏战勇  孙凯  宋亚鹏  阮武营 《河南农业大学学报》2010,44(1)

根据GenBank基因库中人β2微球蛋白(β2m)成熟肽基因序列设计2对引物,使用RT-PCR法从健康人血液中扩增人β2m成熟肽基因,扩增产物进行T-A克隆和测序.结果表明,获得的人β2m成熟肽基因为297 bp,与模板序列的同源性为100%.利用基因重组技术,将β2m成熟肽基因亚克隆入pET-28a(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定,证实所获重组表达质粒pET-28/Humβ2m中含有目的片段,且连接、构建正确,表明成功构建了重组表达质粒pET-28/Ham β2m.  相似文献   

多重PCR检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

胡慧  贾艳艳  杨春华  王亚宾  陈丽颖  张红英  崔保安 《河南农业大学学报》2010,44(4)

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因、猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2基因序列,设计合成了3对特异引物,分别建立了PRV,PPV和PCV2的单项PCR诊断方法;通过对扩增条件的筛选,建立了PRV,PPV,PCV2的复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增PRV的355 bp,PPV的195 bp和PCV2 487 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)扩增结果均为阴性,对PRV,PPV,PCV2的最低检出量分别为100 fg,1 pg和10 pg的DNA.该方法适合对PRV,PPV和PCV2的联合检测和鉴别诊断.  相似文献   

贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析     

宋亚鹏  陈红英  崔保安  贾艳艳  郭显坡  张蕾 《江苏农业学报》2010,26(2)

参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组质粒,测定其核苷酸序列。测序结果表明,贵宾犬α-干扰素基因全长为564 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。用DNAStar软件将所得序列与人和其他种动物的IFN-α基因进行核苷酸及氨基酸同源性比较,并通过绘制系统进化树可知,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。  相似文献   

鸭MHC-Ⅰ_α链胞外区成熟肽基因的克隆、序列分析及表达载体构建     

孙凯  李新生  崔保安  陈红英  魏战勇  张蕾  宋亚鹏  阮武营 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(2):57-62

【目的】克隆鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pET/DuMHC-Ⅰ。【方法】依据GenBank/DDBJ/EMBL基因库中公布的鸭MHC-Ⅰ基因序列设计1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中扩增MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA,T-A克隆到pGEM-T Easy载体中,并进行测序。通过PCR和酶切的方法,将鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因亚克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ,并进行PCR、NcoⅠ和NotⅠ双酶切及测序鉴定。【结果】测序结果表明,获得了MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因,其长度为813 bp,编码271个氨基酸。MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因与GenBank中登录的鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因序列的同源性为89.4%~91.7%,氨基酸同源性为78.2%~83.7%;与鸡、鹅、鹌鹑、草鱼、狗、猪、鼠和人的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽氨基酸序列的同源性分别为64.6%,79.3%,59.4%,41.0%,26.6%,45.0%,12.5%和22.1%,这表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种属多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。所获重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ经PCR、酶切、测序鉴定,证实鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA已正确克隆入pET-28a(+)表达载体。【结论】成功克隆出鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因,并构建了重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ。  相似文献