口蹄疫病毒对牦牛持续性感染的分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

周建华  丛国正  王光华  高闪电  常惠芸 《浙江农业科学》2007,(4):468-471

利用口蹄疫病毒株Akesu/58感染牦牛来建立口蹄疫病毒持续性感染动物模型。连续饲养12个月,每月采集牦牛血液并利用酶联免疫吸附试验检测中和抗体的效价和3ABC非结构蛋白的OD值。3ABC非结构蛋白OD值的数据统计采用SPSS11.5软件包中的Curve Estimation进行曲线回归。利用体外细胞实验来检测口蹄疫病毒毒力的变化情况。结果显示,口蹄疫病毒的毒力是逐渐下降的,中和抗体和3ABC的含量均呈下降趋势,并且可人为地划分两个阶段。由于口蹄疫病毒凭借VP1蛋白、L和3C蛋白酶对牦牛的致病性,在第一个阶段内,体液免疫被认为是牦牛机体抗击FMDV感染的主要形式;在第二阶段,细胞免疫被认为是机体抗击FMDV感染的主要形式。  相似文献   

同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒     

卢曾军  曹轶梅  包惠芳  刘在新  赵启祖  陈应理  常惠芸  谢庆阁 《畜牧市场》2009,(9):14-16

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有0型口蹄疫病毒P1—2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体。首先将P12A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle—CMV上,再将重组穿梭质柱用Pinel线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv—P12×5c和pAdcmv—p12×3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中。重组腺病毒质粒经Pacl线性化后转染HEK295细胞,转染1w内细胞出现典型病变。取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24～48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT—PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达。取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在。本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。  相似文献   

亲和层析和反相层析纯化O型口蹄疫病毒单抗的比较     

宋帅  林彤  邵军军  常惠芸  胡永浩 《甘肃畜牧兽医》2009,39(1):2-5

为了获得有效纯化抗体的方法,将杂交瘤细胞株（4C3）用细胞培养液扩大培养后制备腹水,所得腹水依次用50％和45％的饱和硫酸铵沉淀后再分别用亲和层析和反相层析进一步纯化抗体,并用SDS—PAGE和间接酶联免疫吸附试验分析其纯化抗体的纯度和活性。结果表明,亲和层析获得了较高纯度的抗体,并且抗体活性没有丧失,反相层析获得的抗体有较好的活性,但抗体中还有微量的杂蛋白。因此亲和层析是单抗纯化的较好途径,所获得的高纯度单抗将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究提供良好的物质基础。  相似文献   

C型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定     

杨沁  林彤  常惠芸  薛慧文 《甘肃农业大学学报》2013,48(1):1-5

将灭活的C型FMDV背部皮下多点注射免疫BABL/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG1 500作用下融合,用有限稀释法进行亚克隆.以C型FMDV重组VP1蛋白为抗原,间接ELISA法筛选单抗.以O、Asial、A型FMDV以及猪水疱病病毒为抗原,间接ELISA法检测单抗特异性.获得2株抗C型FMDV的单抗3B3和6D5,亚型鉴定为IgG1、IgG3;腹水效价分别为1∶25 600和1∶51 200;中和效价分别为1∶1 280和1∶640;2株单抗与O、Asial、A型FMDV以及猪水疱病病毒间无交叉反应,表明这2株单抗为高特异性抗C型FMDV单抗.研究结果可为C型FMD的诊断及预防提供基础材料,也可用于病因学及免疫学研究.  相似文献   

影响啤酒酵母传代培养的关键因素初探     

王玲  蒲万霞  常惠芸  华兰英  索朗斯珠  胡振英  魏小娟  孟晓琴 《动物医学进展》2006,27(11):96-98

啤酒酵母主要生长在偏酸性、含糖较丰富的环境中,在其传代培养过程中会有一部分酵母死亡,甚至产生自溶。传代培养过程中不可能完全防止酵母细胞的自溶,只能控制酵母细胞自溶的限度。通过观察不同pH、装液量、酵母浸膏浓度、葡萄糖浓度、麦芽汁、紫外线照射、温度因素对啤酒酵母传代培养的影响,确定酵母菌的最佳培养方式及各影响因素的最佳值。优化后的啤酒酵母传代培养条件为:pH为5.0,温度为30℃,接种量为100 mL/L,葡萄糖浓度50 g/L,酵母浸膏浓度2.0 g/L,装液量以小于60%为宜,以增加摇瓶内的溶氧量。此外,增加摇床转速也可提高摇瓶的通气量,以40 r/min较为理想。转接酵母前,过滤去除麦芽汁培养基中析出的冷凝固物。传代培养过程中应避免紫外线辐射,以减少酵母细胞衰老、死亡及自溶的概率。  相似文献   

Asia1型口蹄疫病毒VP1基因的克隆、原核表达及纯化     

独军政  常惠芸  丛国正  林彤  邵军军  魏小娟  刘在新  谢庆阁 《畜牧兽医学报》2005,36(6):631-634

口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病，该病被国际兽疫局列为A类传染病之首，对畜牧业危害极大，是世界各国检疫和防疫的重点对象。目前已知该病毒有7个血清型，  相似文献   

细胞因子佐剂研究进展     

李世芳  刘泽众  常惠芸 《中国畜牧兽医》2017,44(1):296-301

佐剂可通过增强巨噬细胞活性促进机体T细胞或B细胞的反应,参与半抗原或抗原免疫应答。随着人们对疫苗免疫效果的研究,细胞因子作为新型分子佐剂能增强疫苗的特异性免疫反应而被广泛研究。细胞因子在调节先天免疫和适应性免疫中发挥着关键作用,能增强疫苗的特异性免疫反应。最近几年,白细胞介素、干扰素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子、趋化因子的研究已取得了很大进展,现对细胞因子佐剂的应用进展进行阐述,以期为其在将来的应用中提供参考。  相似文献   

一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

高闪电  常惠芸  独军政  丛国正  邵军军  林彤 《华北农学报》2009,24(6)

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C.将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1.将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度.Western blot 分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应.对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值.  相似文献   

C型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因的原核表达及其生物活性的初步分析     

常惠芸  丛国正  独军政  邵军军  林彤  冯金瑞  刘萍 《华北农学报》2009,24(5)

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化E.coli.BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达, Western Blot 检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产物主要以包涵体的形式存在,进一步采用纯化试剂盒纯化P1蛋白做为诊断抗原.  相似文献   

RNA干扰及其应用进展     

孙德惠  才学鹏  常惠芸  独军政 《动物医学进展》2006,27(6):1-5

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点。RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究。文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源、可能的作用机制、作用特点、研究方法、应用前景及展望等方面进行了综述。  相似文献