融合表达猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因真核质粒的构建及对小鼠的免疫原性   总被引：2，自引：0，他引：2  

史小红  徐志文  郭万柱  朱玲  年阳阳  古峰  李凤琴 《中国兽医学报》2011,31(9)

用PCR法扩增出猪圆环病毒2型的Rep蛋白基因（933bp）和Cap蛋白基因（705bp）,将其定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1（＋）的多克隆位点上,构建真核表达质粒pcDNA-ORF1-ORF2。将构建好的重组质粒pcD-NA-ORF1-ORF2按100μg/只腿部肌肉注射BALB/c小白鼠,同时设pcDNA-ORF1、pcDNA-ORF2、pcDNA3.1-（＋）、PCV2全毒疫苗和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第0、7、14、21、28、42天用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖效应,用ELISA法检测小鼠的抗体水平;并于首免后第0、7、14、21、28天测定脾淋巴细胞中各细胞亚群的比例,对该核酸疫苗的免疫原性进行初步评价。结果显示,重组质粒能诱导鼠体产生较强的细胞免疫和体液免疫,并从免疫后第7天起所测各组数据均显著高于（P〈0.05）或极显著高于（P〈0.01）其他试验组。结果表明,将ORF1和ORF2基因共同用于PCV2核酸疫苗的研发具有很好的前景,为研究新型猪圆环病毒疫苗奠定了基础。  相似文献   

猪口蹄疫疫苗的研究进展及其应用   总被引：2，自引：2，他引：0  

易悦  王利娜  徐志文  郭万柱  朱玲  韩国全 《猪业科学》2011,28(2):44-48

口蹄疫号称畜牧业的"头号杀手",传染性极强,传播途径广泛,给世界经济和社会发展带来巨大的危害.目前接种疫苗是预防口蹄疫的有效手段之一,安全有效的疫苗是成功预防、控制口蹄疫的首要条件.口蹄疫疫苗的研制经历了弱毒疫苗、灭活疫苗到新型疫苗的探索过程.就口蹄疫疫苗的研究现状及其应用做一综述,以期为疫苗的合理应用提供技术帮助.  相似文献   

农作物良种繁育技术标准推广的探讨——以陕西杨凌秦丰农业新品种试验示范中心为例          下载免费PDF全文

徐志文 《农业科研经济管理》2005,(1):36-38

种子是农业的基础，是农业生产中不可代替的极其重要的生产资料。种子的好坏直接关系到农作物的产量和品质，因此如何繁育出科技含量高、品质优良的种子是现代农业发展中的一项重要工作，而在种子繁育过程中如何抓好标准化生产、推广标准化技术则是重中之重。然而，目前我国种业的标准化工作还相对落后，主要表现为：技术标准体系不完善，企业标准化意识淡薄，政府检测、  相似文献   

ORF9基因缺失突变PCV2的构建与部分生物学特性     

曾秀  梅淼  郭万柱  朱玲  徐志文  王印  余庆 《兽医大学学报》2012,(3):371-377

设计1对针对猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组的特异性引物,从疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的病料中经PCR直接扩增出PCV2全基因组,再与载体pMD18-T Simple连接后构建重组质粒pMD18-T Simple-PCV2（命名为P-S-PCV2）。用ORF9特异的限制性内切酶Bpu10Ⅰ对P-S-PCV2进行酶切、补平连接反应,构建了ORF9基因缺失突变的重组质粒（命名为P-S-PCV2-J）。用SacⅡ对基因缺失突变的重组质粒进行酶切,获得的线性化基因突变PCV2基因组在体外进行自身环化,形成了相应缺失基因DNA（命名为PCV2-J）。用PCV2-J缺失突变株进行细胞转染、动物致病性和免疫原性、T淋巴细胞亚群的动态变化等部分生物学特性的研究。结果显示：PCV2-J转染IBRS-2细胞后,电镜观察可见病毒颗粒,PCR-RFLP检测有突变株生长;PCV2-J接种仔猪后无临床典型大体病变,PCR-RFLP检测淋巴结中有PCV2-J突变病毒的感染;PCV2-J免疫仔猪后的抗体水平在第2周开始上升,与对照组相比差异显著,CD3＋下降,与对照组无差异,CD4＋下降,第1周与对照组差异显著,CD8＋与对照组差异不显著。结果表明,ORF9基因缺失突变的PCV2仍具有复制感染能力,但免疫原性减弱。  相似文献   

断奶应激对仔猪红细胞免疫功能的影响研究     

唐蕊涵  李莉  刘兵  梅淼  王娅  徐志文  邓俊良  左之才 《黑龙江畜牧兽医》2012,(11):64-65,68

为了研究早期断奶应激对仔猪红细胞免疫功能的影响,试验采用同窝杜×(大×长)三元杂交健康仔猪12只,分别于断奶前3天、断奶后3天及断奶后2周进行红细胞受体C3b花环试验、免疫复合物IC花环试验及血常规检验,观察断奶应激对仔猪红细胞免疫功能、红细胞数量及血红蛋白含量影响的动态变化。结果表明:断奶应激导致仔猪红细胞C3b受体花环率(C3bRR率)、红细胞总数和血红蛋白含量降低,IC花环率(ICR率)的变化明显。说明断奶应激可导致仔猪红细胞免疫功能下降,红细胞免疫功能低的仔猪更容易发生(断奶)应激性腹泻。  相似文献   

是高仔猪存活率的措施     

张辉  季红伟  易悦  年阳阳  吴江江  徐志文  朱玲 《动物科学与动物医学》2012,(1):40-42

仔猪存活率是影响猪场经济效益的重要因素。通过对影响仔猪生长的3个关键时期即母猪妊娠期、仔猪哺乳期、仔猪断奶期的分析,针对仔猪的生理特点和生长规律,采取相应的措施来提高仔猪的存活率。  相似文献   

四川部分地区公猪精液中猪瘟病毒分子流行病学调查     

李海全  王雪  徐志文 《四川畜牧兽医》2013,40(10)

本试验在四川省7个市的部分猪场采集公猪精液样本共67份,用RT-PCR方法检测出有4份CFSV抗原呈阳性,对该4株CSFV的E2基因进行克隆、测序,然后运用DNAStar序列分析软件与已知的15株CSFV E2基因进行同源性比对.  相似文献   

枯草芽孢杆菌发酵上清液对玉米植株生长和养分吸收的影响     

李婧  揣峻峰  王磊  张东旭  肖艳  徐志文 《安徽农业科学》2019,47(10)

采用盆栽试验研究枯草芽孢杆菌发酵上清液冲施对玉米植株生长和养分吸收的影响。结果表明,不同用量上清液冲施均能明显地促进玉米生长,增加干物质累积量,促进植株对氮、磷、钾的吸收和利用。其中30 000 L/hm~2冲施处理表现最好,与对照相比,可使玉米株高增加10.9%,茎粗增加10.0%,叶绿素SPAD值增加29.2%,地上部干重增加27.4%,根系干重增加51.1%,玉米地上部氮、磷、钾含量增加15.1%、25.1%、32.9%;根系氮、磷、钾含量增加30.6%、38.4%和22.1%。由此可见,枯草芽孢杆菌发酵上清液在作物生长期内可以作为一种肥料进行冲施,既能促进作物生长,又能实现资源的再利用。  相似文献   

A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用     

杨钰楚  王晨曦  周雪珂  赵军  徐志文  朱玲 《江苏农业学报》2019,35(4)

为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验。将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×10~0～1×10~7拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定。结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1 000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性。临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6%,水疱液样本SVA阳性率为100.0%,2种方法检测结果一致,符合率为100%。综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断。  相似文献   

猪非典型性瘟病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用     

郭佳琪  杨晓宇  冯宇  杨钒  徐志文  朱玲 《江苏农业学报》2019,35(2)

为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPV NS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500 bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,该方法对APPV的最低检出量为1μl 4.95×10~4拷贝,重复性试验中组间、组内试验结果均与预期相符。应用该方法对68份疑似患病的仔猪样品进行检测,阳性病料检出率为7.35%。利用Mega7.0绘制APPV系统进化树,对APPV进行遗传进化分析,结果显示本试验检出的APPV(SC株)与中国报道的APPV的亲缘关系较近。建立的APPV RT-PCR检测方法可用于APPV的临床诊断及流行病学检测。  相似文献