腹泻仔猪中猪圆环病毒2型的检测及生物信息学分析     

平措  许思遥  徐志文  朱玲 《猪业科学》2017,(10):95-99

为研究仔猪腹泻中猪圆环病毒2型(PCV2)的生物信息,参考Gen Bank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计并合成一对特异性引物,从四川地区猪场送检的腹泻仔猪病料中扩增PCV2全长基因序列,回收PCR产物。将其插入PMD19-T载体,构建了重组质粒,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。将测序结果及推导的氨基酸序列与国内外的不同分离株进行生物信息学分析。结果表明,分离株基因组全长为1 767 bp,分离的三株基因组与Gen Bank上已发表的PCV2分离株之间的核苷酸同源性分别为1#94.7%~89.6%、2#94.7%~89.3%、3#96.4%~86.8%,氨基酸序列同源性为1#97.9%~95.7%、2#97.1%~95.5%、3#98.4%~94.8%,说明四川地区腹泻仔猪病料中PCV2的变异相对保守。  相似文献   

猪瘟病毒感染致外周免疫器官损伤的病理组织学观察   总被引：1，自引：0，他引：1  

梅淼  徐志文  余庆  刘彬  尹雪琴  刘万铃 《中国兽医学报》2010,30(12)

将10头28日龄健康仔猪随机分成2组,其中感染组8头,对照组2头。感染组按1 mL/头颈部肌注猪瘟病毒(CSFV)石门株血毒(104TCID50/mL)进行人工感染,对照组不做任何处理。2 d后感染组仔猪体温升至40~41.5℃,稽留不退,而对照组体温正常。采集体温升高的仔猪扁桃体,运用RT-PCR方法检测,结果CSFV均为阳性,表明人工感染CSFV成功。分别于感染后4,7 d剖杀感染组和对照组仔猪各1头,剖解后观察各器官大体病变并采集脾脏和淋巴结等外周免疫器官制作石蜡切片,观察病理组织学变化;其余感染组仔猪分别于感染后13,16(2头),19,23,31 d自然死亡,死亡后按剖杀猪方法同样处理。组织学观察显示:随着病情的发展,感染组仔猪的脾脏和淋巴结的淋巴滤泡逐渐发生萎缩、甚至消失,脾脏的动脉周围淋巴鞘、淋巴结的副皮质区细胞亦逐渐减少坏死,即造成了T、B淋巴细胞的渐进性减少,而对照组无异常变化。结果表明:CSFV感染仔猪后,可引起脾脏淋巴结的淋巴细胞渐进性变性与坏死,造成免疫损伤。  相似文献   

共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶茂  郭万柱  徐志文  王小玉  李云云 《西南农业学报》2010,23(3)

为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达.用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达.用pcDNA.VEI和不表达IFN-Κ的pcDNAZ.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组.共免疫两次,间隔2周检测免疫指标.结果表明,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞.该核酸疫苗能够诱导脾淋巴细胞增殖.ELISA结果显示,与pcDNA.VE和阴性对照组进行比较,pcDNA.VEI所诱导产生的两种抗体都较高.pcDNA.VEI组能较稳定的诱导产生T细胞亚群,并检测到CD4+/CD8+比例于首免2周后都高于pcDNA.VE.因此表明该核酸疫苗能产生特异诱导体液免疫和细胞免疫且是安全的,证明了IFNγ基因具有免疫增强效果,为乙脑和猪细小病毒核酸疫苗研究提供了实验依据.  相似文献   

黄带犀猎蝽成虫对草地贪夜蛾幼虫的捕食行为和能力研究     

任雪敏  徐志文  赵斌  路纪芳  孙亚茹  展茂魁 《生物灾害科学》2022,45(1):48-52

[目的]探讨黄带犀猎蝽[Sycanus croceouittatus(Dohrn)]雌雄成虫对草地贪夜蛾[Spodoptera frugiperda(J.E.Smith)]不同龄期幼虫的捕食能力,为利用黄带犀猎蝽防治有害生物提供信息.[方法]在人工饲养条件下,观察黄带犀猎蝽成虫对草地贪夜蛾3、4、5龄幼虫的捕食行为和能...  相似文献   

不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗存留试验     

熊丁杰  范学政  徐璐  王琴  徐志文  郭万柱  周远成  刘俊  陈蕾  汤波 《中国兽医杂志》2011,47(8)

用1 200 RID、6 000 RID和24 000 RID 3种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验猪的抗体消长和疫苗毒核酸在猪体内的存留时间,并用6头猪进行攻毒保护试验.结果表明:不同免疫剂量的试验猪其抗体水平的动态变化没有显著差异,免疫后21 d试验猪的猪瘟抗体均成阳性,63 d后至578 d猪瘟抗体阻断率仍然高于85％,应用荧光定量RT-PCR技术检测,猪瘟疫苗毒核酸在猪血液和扁桃体中的检出时间分别达28 d和42 d;免疫后370 d进行猪瘟强毒攻击后,免疫猪没有出现明显的临床症状,存活且不带毒.本研究证实,没有其他疫病和母源抗体的仔猪单次接种合理剂量的猪瘟活疫苗就能产生坚强的保护力,提出加强种猪场各种病原监测,淘汰病原阳性种猪,净化种猪群对提高猪瘟疫苗免疫效果,最终控制猪瘟具有重要意义.  相似文献   

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立     

张博  郭万柱  徐志文  王印  朱玲  孙志勇  王小玉 《中国兽医学报》2011,31(3)

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.  相似文献   

江西农产品发展优势及对策     

李春根  徐志文  涂北根  钟荣  周开洪  张道新 《江西农业学报》2007,19(11):137-138,141

以提高农产品竞争力,有效增加农民收入的目的出发,通过对江西省农产品生产的优势分析,找出了具有竞争优势的农产品,并提出了发展农产品的对策建议。  相似文献   

猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)疫苗株的构建(初报)   总被引：2，自引：0，他引：2  

徐志文  郭万柱  朱玲  王晓玉 《四川农业大学学报》2004,22(2):95-98

采用磷酸钙转染系统 ,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA2 15株DNA与PP6 3LacZE2DNA共转染Vero细胞 ,获得SA2 15 (A) 1、SA2 15 (A) 2和SA2 15 (A) 3等 12个重组病毒株。以光生物素标记的HCVE2基因为探针进行初步鉴定后 ,挑选SA2 15 (A) 1株作BamHⅠ酶切和southern转印杂交鉴定 ,结果表明构建是成功的 ,将其命名为SA2 15(A)。直接荧光抗体检测、SDS -PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCVE2基因在重组病毒内获得表达 ,产生大小约 5 1kd的蛋白。对SA2 15 (A)株进行部分生物学特性研究 ,培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK2 1和鸡胚成纤维细胞等多种细胞 ,但对不同细胞系表现有一定的差异。  相似文献   

伪狂犬病毒SN株、SL株的分离鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐志文  郭万柱  刘春茂 《四川畜牧兽医》2000,27(3):23-23

对琼扩试验检测为伪狂犬病毒 (PRV )阳性的病料 ,采用MDBK细胞进行病毒分离培养 ,获得了两株PRV ,进而经家兔接种和核酸杂交鉴定为PRV阳性 ,将其分别命名为PRVSN株、SL株。  相似文献   

猪瘟病毒基因组及基因工程疫苗研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

徐志文  郭万柱  石谦  阳爱国 《四川畜牧兽医》2005,32(3):32-33,35

本文着重介绍了猪瘟病毒基因组结构组成、基因组产物和以基因组为研究对象开展的亚单位疫苗、活栽体疫苗、标记疫苗等新型基因工程疫苗的研究现状。  相似文献