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抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的制备及单链抗体基因的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体并构建其单链抗体（single chain variable fragment,ScFv）基因,为从PthA角度进一步研究柑橘溃疡病致病机理创造条件,并为构建单链抗体基因植物表达载体,尝试利用转基因和植物抗体技术创制抗溃疡病柑橘新种质奠定基础。【方法】利用PthA-NLS重组多肽免疫Balb/c小鼠,制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体,从分泌抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）法构建其单链抗体基因,并克隆到pGEM-T载体和原核表达载体pET32a(+)中,重组原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。【结果】获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株1C8H1、2D12B6、3D8A10。成功构建了单链抗体基因ScFv,获得的ScFv基因大小约750 bp,其中重链可变区（VH）基因有360 bp,轻链可变区（VL）基因有342 bp,中间连接肽基因45 bp,经过IPTG诱导ScFv原核表达,获得了大小为44.5 kD的ScFv重组蛋白。【结论】试验获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株,成功构建了ScFv基因,并实现了原核表达,为进一步探索PthA的致病机理和下一步利用抗体技术获得抗溃疡病柑橘种质的研究打下了基础。 相似文献
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用RT2PCR和RACE方法, 从β - 氨基丁酸(β-aminobutyric acid, BABA) 诱导辣椒叶片的基因表达体系中克隆出CYP92A的全长cDNA序列。在BABA处理后, CYP92A 基因以一种快速而短暂的方式作出应答。生物信息学分析表明, 该基因编码一条509个氨基酸残基的多肽, 含有一段细胞色素P450保守的血红素结合区域, 由此CYP92A被确定是细胞色素P450。通过系统进化分析, CYP92A 属于多基因家族P450的92A亚家族。结合已报道92A亚家族成员的研究, 推测CYP92A参与植物的防御反应。通过生物信息学分析蛋白结构, 对CYP92A催化反应特性进行了讨论。为进一步探讨BABA的诱导机理奠定了基础。 相似文献
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为筛选适于培育枳苗的有机肥，以不添加有机肥的营养土(V河沙∶V锯木屑∶V草炭=1∶2∶0.5,复合肥0.5 kg/m3,钙镁磷肥1.25 kg/m3)为对照，研究添加菜枯、花生枯、桐枯、蓖麻枯、蚯蚓粪等不同有机肥(添加量为5 kg/m3)对盆栽枳苗生长及营养土pH值和酶活性的影响。结果表明，相比对照，所有有机肥处理均能显著提高植株叶片的叶绿素含量，且以桐枯处理的效果最佳；桐枯能显著促进株高增加，桐枯和蓖麻枯均能显著促进叶面积增加，而其他有机肥处理无显著性促进作用，蚯蚓粪处理甚至显著抑制了株高和茎粗的增长。菜枯、桐枯和蓖麻枯处理的营养土pH值均在枳苗生长的最适范围(5.5～6.5)内，而花生枯和蚯蚓粪处理的pH值高出最适范围，蚯蚓粪处理的超出程度表现显著。桐枯和蚯蚓粪能显著提高营养土的过氧化氢酶活性，花生枯和桐枯能显著提高脲酶活性。综合比较，桐枯使营养土pH值环境适宜枳苗生长，且具有改善营养土酶活性的功效，促进了枳苗生长。桐枯可作为枳育苗营养土的添加成分。 相似文献
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以特早熟温州蜜柑橘湘早为试材，在采果前15 d喷施糖醇钙50、500、1 000倍液（钙浓度分别为3.5、0.35、0.175 g/L）和氯化钙（钙浓度0.35 g/L），研究其对果实品质和果实常温贮藏的影响。结果表明，在果实采收时，糖醇钙500倍液处理的果实品质最佳，其可溶性固形物、维生素C含量分别较对照增加了8.58%和6.37%，可滴定酸含量降低了9.52%。在果实常温贮藏14 d后，所有采前喷施糖醇钙的处理均能延缓果实贮藏品质变劣，其中糖醇钙1 000倍液处理对贮藏果实可溶性固形物和维生素C含量提升的效果最为显著；糖醇钙500倍液处理延缓果实失水的效果最为显著；糖醇钙50倍液处理能显著加速贮藏期果实可滴定酸含量的下降幅度，且在贮藏期内未观察到呼吸高峰。相比氯化钙处理，相同钙浓度的糖醇钙处理（糖醇钙500倍液）更能促进田间果实可溶性固形物和维生素C含量的形成，且对贮藏果实也有促进维生素C含量的形成和推迟呼吸高峰的作用。综合分析认为，采前喷施糖醇钙是改善柑橘品质和耐藏性能的有效措施，且以糖醇钙500倍液处理的效果最优。 相似文献
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本研究以不添加有机肥的营养土为对照,研究菜枯、花生枯、桐枯、蓖麻枯、蚯蚓粪等有机肥对柑橘砧木枳苗生长及营养土pH和酶活的影响,为柑橘育苗科学选择有机肥和提升苗木质量提供依据。结果表明：相比对照,在植物生长方面,所有有机肥均能显著提高叶绿素含量,且以桐枯处理的效果最佳；桐枯能显著促进株高增加,桐枯和蓖麻枯均能显著促进叶面积增加,而其它有机肥处理无显著性差异,甚至蚯蚓粪处理能显著抑制株高和茎粗的增长。在营养土pH方面,菜枯、桐枯、蓖麻枯处理的pH值均在枳苗生长的最适范围(5.5-6.5),而花生枯和蚯蚓粪处理高出最适范围,以蚯蚓粪超出程度表现显著；在营养土酶活方面,桐枯和蚯蚓粪能显著提高过氧化氢酶活性,花生枯和桐枯能显著提高脲酶活性。综合比较,桐枯有利于促进枳苗生长,使营养土pH环境适宜枳苗生长,且具有改善营养土酶活性的功效。因此,桐枯可作为柑橘育苗营养土的添加成分。 相似文献