汉坦病毒长春分离株YZG-Changchun S基因片段克隆和序列分析     

袁子国  张秀香  郝雪  李修明  张守峰  徐慧娟  高胜岩  王晓虎  扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》2007,(11)

肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)和汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrom,HPS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属中的病原体引起的一种病情重、病死率高的自然疫源性急性传染病。目前发现汉坦病毒有20多种血清型,在我国主要流行汉滩病毒(Hantaan virus,HT- NV)和汉城病毒(Seoul virus,SEOV)2种型别病毒。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因疫苗的构建及免疫小鼠试验   总被引：3，自引：0，他引：3  

周井祥  薛江东  张嘉保  袁宝  刘全  扈荣良 《吉林农业大学学报》2007,29(1):91-94

参照已公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株GP5蛋白基因序列,设计并合成1对引物,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的GP5基因片段(603 bp)。回收目的基因片段,克隆到pMD18-T载体内构建成重组质粒pMD18T-G。经酶切鉴定、测序正确后,再回收目的基因片段,克隆到真核表达载体pIRES-neo内,经单酶切和双酶切鉴定,成功构建基因疫苗表达载体pIRES-G。免疫小鼠试验表明,2次免疫后抗体水平显著提高,但总的抗体水平体低于灭活苗。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法的建立     

米立娟  吕宗吉  马春全  顾万军  张守峰  刘晔  扈荣良 《中国动物传染病学报》2013,(1):42-47

为了建立一种快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)直接免疫荧光检测方法,对前期制备的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体进行亲和层析法纯化,经异硫氰酸荧光素标记;通过对荧光染色的固定试剂、固定时间、染色时间和荧光抗体工作浓度的测定,确定荧光抗体染色法在PRRSV感染细胞和病料中的最佳工作条件。利用荧光抗体染色法对本实验室收集的62份病料进行检测,同时以RT-PCR进行验证,确定荧光染色法的检测符合率。结果显示,FITC标记的荧光抗体检测细胞培养物最佳工作条件:80%丙酮4℃固定20 min,荧光抗体按1:400稀释,感作时间为1 h;检测组织病料最佳工作条件:病料组织进行涂片后,用80%丙酮4℃固定30 min,荧光抗体按1:200稀释,感作时间为2 h;病料组织荧光检测与RT-PCR的检测一致率为74.2%。本研究建立的快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法为今后该疾病诊断奠定了基础。  相似文献   

狂犬病快速诊断方法的建立和应用     

曹亮  扈荣良  张守峰  单文鲁 《新疆农业大学学报》2005,28(2):30-33

根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物，建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中．扩增出443bp的核酸片段，检出核酸的敏感性约为3pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合，但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断，具有快速、简便和敏感的优点。  相似文献   

以伪狂犬病病毒(Bartha-K61)为载体正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白重组疫苗的构建     

袁子国  张秀香  徐慧娟  王晓虎  张守峰  扈荣良 《中国兽医学报》2009,29(10)

构建以伪狂犬病病毒Bartha-K61株为载体的正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白的重组活载体疫苗.将eGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Mlu Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8AA-eGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/eGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的滴度(TCID_(50))为10~(8.125)/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组Bartha-K61的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制与开发奠定基础.  相似文献   

RNA疫苗研究进展及狂犬病RNA疫苗     

汪芋  缪发明  张守峰  么乃全  扈荣良 《中国兽医学报》2024,(5):1078-1086

狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus, RABV)引起的一种严重人畜共患的急性接触性传染病,其致死率为100%,每年全球约6万人死于该病,其中亚洲和非洲发生最多。RABV是狂犬病的致病病原体,由结构蛋白和负链RNA构成。狂犬病一旦发病致死率为100%,目前疫苗接种仍是预防和控制狂犬病最为有效的策略。RNA疫苗是新一代核酸疫苗,其安全性好,有效性高,设计灵活,研发周期短,且借助高效递送系统,可刺激机体快速产生强烈免疫应答。RNA疫苗这一特点对于潜伏期短且病死率高的狂犬病的防控具有重要应用价值。现对RNA疫苗及狂犬病RNA疫苗的研究进行系统梳理,以阐明其研究现状及应用前景。  相似文献   

非洲猪瘟病毒JX21毒株全基因组序列分析和生物学特性研究     

郭晓盼  周鑫韬  张艳艳  陈腾  缪发明  扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》2023,(23):1-6+12+125-126

为了明确非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)JX21毒株的基因组变化及其生物学特性，试验采用PCR检测、病毒分离培养、病毒全基因组测序、红细胞吸附试验及动物感染试验等对从江西省某菜市场采样分离到的ASFV自然变异毒株JX21进行研究。结果表明：与ASFV SY18毒株序列比较，JX21毒株全基因组序列中出现110处碱基差异和8个基因的自然缺失。其中EP402R基因(编码CD2v蛋白)第395位碱基后插入1个碱基“A”,导致翻译提前终止，JX21毒株丧失了红细胞吸附特性。试验组5头健康家猪感染JX21毒株后，28 d内全部死亡，期间均出现较高水平的病毒血症，剖检后均出现ASFV阳性组织，病程较长。说明分离的JX21毒株属于自然变异株，基因组中存在多处变异，其中EP402R基因变异可引起病毒失去红细胞吸附特性，其毒力未见明显减弱，仍为100%致死，但病程延长。  相似文献