定量检测马动脉炎病毒方法的建立     

杨松  梁成珠  高宏伟  陈溥言 《中国畜牧兽医》2011,38(9):115-118

为建立快速、敏感、准确的马动脉炎病毒检测方法,笔者选取病毒基因组中高度保守的ORF7序列设计引物和TaqMan探针,分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品进行一步法实时定量RT-PCR,绘制扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。  相似文献   

葡萄品种鉴定技术及其在遗传多样性研究中的应用进展     

孙明君  汪东风  高宏伟  陈洪俊  朱水芳  梁成珠 《农学学报》2017,7(7):37-42

葡萄品种的鉴定是葡萄种质资源研究和新品种保护的基础。为了对葡萄种质资源的安全引进和输出提供技术保障,本文归纳了葡萄品种鉴定中常用技术及其在遗传多样性领域的研究进展,总结了在葡萄品种鉴定过程中存在的问题,分析了分子技术在葡萄品种鉴定中的发展趋势,并对今后品种鉴定工作进行了展望。  相似文献   

应用奇异变形杆菌多克隆抗体提高沙门菌分离鉴定准确性的研究     

肖西志  吴达  孙敏  邓明俊  岳志芹  高宏伟  朱来华  孙涛  吴信海  徐彪  梁成珠  张彦明 《兽医大学学报》2012,(10):1457-1460

在沙门菌检测过程中,奇异变形杆菌经常作为一种假阳性菌而出现。为提高沙门菌分离鉴定的准确性,我们制备了奇异变形杆菌的多克隆抗血清。抗血清经protein G抗体纯化柱纯化,与奇异变形杆菌混合后,在扫描电镜下观察二者的相互作用,分析该抗体是否能够在体外特异性的裂解奇异变形杆菌。经扫描电镜分析,制备的多克隆抗体在2h后将奇异变形杆菌裂解。同时,将纯化的抗体分别添加到氯化镁孔雀绿肉汤（MM）和亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）中分析对奇异变形杆菌的抑菌效果。在实际应用中,针对临床的100多份样本,进行改进方法与常规方法的比较,结果显示,改进的方法能够有效排除因奇异变形杆菌带来的假阳性干扰,明显提高了沙门菌分离鉴定的准确性。  相似文献   

实时定量RT-PCR检测马动脉炎病毒   总被引：2，自引：0，他引：2  

梁成珠  杨松  高宏伟  朱来华  蔡梅红  王谦滨  陈溥言 《中国兽医学报》2005,25(2):141-144

选取马动脉炎病毒(EAV)基因组中高度保守的开放阅读框7(ORF7)序列，设计了特异性引物和TaqMan探针，利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测EAV。使用含有选定检测序列的克隆标准品做标准曲线，证明该方法可以检测出含有5(4．77)个RNA分子，即可从组织培养液(TCF)中检出一般含有5PFU／μL病毒拷贝。对猪生殖呼吸道综合征病毒、马疱疹病毒无交叉反应，特异性好。用疫苗用种毒(Bucyrus标准株)肌肉注射于马驹后，定量RT-PCR比病毒分离试验更能灵敏地检出呼吸道排出的病毒。对456份临床鼻腔分泌物样品检测，定量RT—PCR检出6份阳性，而病毒分离只检出2份阳性。一步法实时定量RT—PCR检测样品中的EAV，在快捷、准确、方便和高通量方面优于细胞培养病毒分离的检测方法，可以作为检测马病毒性动脉炎(EVA)病毒的快速方法。  相似文献   

一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株     

黄兵  王莉莉  宋敏训  艾武  田夫林  梁成珠 《水禽世界》2004,(12):11-13

本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物,通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA,能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10-5稀释度(相当于103.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性,而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果,在5h内即可完成。实验结果表明,该方法特异、敏感,适用于强毒感染鸡群的快速检测  相似文献   

警惕一种外来有害杂草刺果藤     

邵秀玲  梁成珠  魏晓棠  吴兴海  厉艳 《植物检疫》2006,20(5):303-305,F0004

刺果藤（Sicyos．angulatus L．）是葫芦科刺瓜藤属的一种有害杂草，在世界多国有分布，2003年侵入青岛。本文简要介绍了该草的形态特征、生活习性、地理分布及危害，分析其传入渠道与风险，同时提出预防建议。  相似文献   

SIVp27抗原双抗体夹心ELISA检测方法的研究     

孙敏  魏强  梁成珠  佟巍  丛喆  蒋虹  涂新明 《中国动物检疫》2007,24(4):32-35

目的建立检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法并进行初步应用。方法使用ProteinA亲和层析柱纯化腹水中的SIVp27单抗,用过碘酸钠法对单抗进行辣根过氧化物酶标记。经抗体配对实验确定包被抗体和检测抗体,再用棋盘滴定法确定抗体工作浓度后,探索构建检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA法。应用建立的双抗体夹心ELISA法,对SIV模型猴血浆标本和SHIV模型猴病毒分离培养上清标本进行了检测,并将其结果与Coulter公司试剂盒检测结果进行比较。结果以稀释至20ug/mL的2E12为包被抗体、1:400稀释的酶标3G3为检测抗体为ELISA最优体系。模型猴血浆标本和病毒分离培养上清标本的检测结果表明自建体系可以用于SIVp27抗原的检测,特异性良好,灵敏度略低于Coulter公司试剂盒。结论检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法初步建成,为研制有独立知识产权的检测试剂奠定了一定的基础。  相似文献   

应用三重PCR快速同步检测和区分3种马疱疹病毒     

朱来华  陆承平  黄纪徽  梁成珠  郑小龙  魏乃林  马丰忠  于红光  孙敏  李强 《中国兽医杂志》2007,43(2):15-17

马疱疹病毒(equine herpesviruses,EHV)主要有5个型:EHV-1/2/3/4/5,广泛分布于世界马群,其中危害最严重的有EHV-1/2/4,其中EHV-1是马呼吸道疾病、病毒性流产的主要病因,EHV-2与马的上呼吸道感染、结膜炎等有关,EHV-4主要引起急性呼吸道感染[1~5]。EHV在原发性感染后,病毒可在动  相似文献   

山东沿海部分地区真鲷虹彩病毒病初步调查与分析          下载免费PDF全文

赵玉然  岳志芹  谭乐义  马亚  李琼  梁成珠  李八方 《渔业科学进展》2011,32(6):31-36

2008年11月～2010年11月,采集山东海域大菱鲆、石鲽、鲈鱼各20批,按照世界动物卫生组织推荐的PCR检测方法对真鲷虹彩病毒病(Red Sea Bream Iridoviral Disease,RSIVD)进行初步调查.结果显示,共检出4例RSIVD感染样品.以真鲷虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus,RSIV)和传染性脾肾坏死病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus,ISKNV)主要衣壳蛋白基因为基础,设计简并引物,PCR扩增本次检出阳性样品的RSIV/ISKNV MCP基因.将MCP基因PCR扩增产物测序,提交GenBank,并以MCP基因为基础,对被检出的阳性样品进行虹彩病毒属系统分类,绘制进化树.由进化树得出,4例阳性病毒株均属于虹彩病毒科细胞肿大病毒属.  相似文献   

常规PCR、实时定量PCR检测传染性皮下及造血器官坏死病毒的效果分析     

周优  岳志芹  梁成珠  徐彪  朱来华  高宏伟  孙敏  刘荭  汪东风 《海洋水产研究》2008,29(2):90-96

对虾传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)可感染世界各地养殖对虾,给对虾养殖业造成严重经济损失。本实验首次采用实时定量PCR法对广西地区的84份凡纳滨对虾样品进行检测,同时以常规PCR检测作对照。实时定量PCR检测阳性率为79·8%,常规PCR检测阳性率为40·5%,表明广西地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV的感染率较高。将二者检测均呈阳性的30份样品扩增产物进行序列分析测序,测序结果通过DNA STAR软件包进行分析,并通过NCBI Blast与GenBank中的序列进行比对。结果证明,测定的是IHHNV序列。30份样品的IHHNV序列很保守,可以分为4种类型,仅有两个碱基的位置发生变异。实时定量PCR检测IHHNV,快速、灵敏、准确,特异性好,可以作为检测对虾感染病毒的有效方法。  相似文献