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福氏志贺菌外膜蛋白A是细菌入侵宿主细胞的作用蛋白,同时激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在动物疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得福氏志贺菌OmpA蛋白表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得OmpA蛋白,免疫小鼠制备OmpA蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blot检测抗血清特异性;DNAMan与MEGA软件分析OmpA蛋白系统进化关系。结果显示,OmpA重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致;ELISA法确认OmpA抗血清滴度达1∶1 600,Western blot证实抗血清具有很好的特异性。OmpA序列系统发生分析发现不同种的致病菌存在同源性,尤其C-端同源性较高,并且不同种志贺菌具有更高的同源性。表明成功制备OmpA蛋白和小鼠多克隆抗体,为OmpA蛋白功能与疫苗开发研究奠定了基础。 相似文献
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为探究肠炎沙门菌伴侣蛋白Hfq对nmpC的调控机理及其基因编码产物OmpD在致病过程中参与的生物学功能,采用PCR方法扩增肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD基因nmpC,并将其克隆至原核表达载体pColdTM TF,构建重组表达载体pColdTM TF-nmpC.将其转化受体菌E.coli BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和Ni-NTA亲和层析获得高纯度的融合蛋白OmpD.用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗OmpD抗体.结果显示,经酶切、测序和Western blot鉴定分析,本研究成功构建并表达肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD,经纯化后免疫BALB/c小鼠,获得特异性的鼠源OmpD多克隆抗体,为进一步探究肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD在致病过程中参与的生物学功能奠定基础. 相似文献
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《中国家禽》2016,(24)
对从健康鸡空肠和病变组织中分离的15株细菌进行显微镜检、菌落形态观察、16 S rRNA基因序列比较分析、致病试验及药敏试验。结果显示:分离菌革兰氏染色阴性,在普通营养琼脂培养基上形成圆形透明菌落,能够在SS培养基生长,在HE培养基和三糖铁培养基产生H_2S;与Gen Bank奇异变形杆菌的相似性为100%~99.6%,与大肠杆菌、沙门菌的相似性为89.7%~91.0%,结合菌落特征和生长特性,该分离菌被鉴定为奇异变形杆菌。人工感染雏鸡(1.7×10~7cfu/mL),复制出与自然病例相似临床症状和病理变化。提示奇异变形杆菌引起鸡感染,肠道可能是奇异变形杆菌贮存库,对鸡群有潜在性威胁。药敏试验发现在6类18种常用抗菌素中,分离菌仅对氨基糖苷类没有抗药性。 相似文献
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【目的】表达与纯化猪丁型冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）的核衣壳（nucleocapsid,N）蛋白,并制备其多克隆抗体（polyclonal antibody,PcAb）。【方法】以PDCoV CHN-HN-1601分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增PDCoV全长的N基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-28a（+）中构建重组质粒pET-28a-PDCoV-N。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,利用0.5 mmol/L IPTG于37 ℃诱导表达12 h。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化N-端和C-端均携带6×His标签的重组N蛋白,并将其免疫新西兰白兔制备抗血清。利用Protein A/G琼脂糖树脂从免疫兔的抗血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定及抗体效价的间接ELISA测定。【结果】重组PDCoV-N蛋白以可溶性和包涵体两种形式表达,分子质量约为42 ku;上清可溶性N蛋白的纯化纯度可达90%、蛋白浓度为0.45 mg/mL;纯化后的多克隆抗体纯度较高,ELISA方法检测其效价为1∶6 400,能特异性地识别重组N蛋白和PDCoV,与可引起猪腹泻的猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PRoV）无交叉反应。【结论】本研究成功制备重组PDCoV-N蛋白及其多克隆抗体,为后续深入研究N蛋白的功能、PDCoV优化血清学检测方法、免疫层析试纸条的制备及开展PDCoV相关基础研究提供参考。 相似文献
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为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1:1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。 相似文献
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为了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的牛细菌性腹泻病原菌的分布情况及耐药性情况。对2020—2021年采集新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的患腹泻牛粪便、肛拭子及内脏病料358份,采用细菌分离鉴定、形态学观察、生化鉴定等方法对大肠杆菌、沙门菌、奇异变形杆菌、空肠弯曲杆菌等细菌性病原菌进行分离鉴定,采用K-B药敏纸片法检测临床分离菌株对临床中常用的药物耐药情况。结果显示：从358份病料样品中分离到大肠杆菌62株、沙门菌52株、空肠弯曲杆菌29株、奇异变形杆菌28株,检出率分别为17.3%、14.5%、8.1%、7.8%;分离的菌株对临床中常用的药物产生不同的耐药性,其中大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌均对头孢噻呋、头孢喹肟、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、硫酸黏菌素等药物敏感,对其他药物耐药。为该牛细菌性腹泻病防治及合理指导临床用药提供参考。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(1)
为了对吉林省长春地区致犬腹泻的奇异变形杆菌进行流行病学调查及药物敏感性检测,试验采用传统细菌鉴定方法及16S rRNA系统发育学分析方法,对2015—2017年间送检的62份疑似患细菌性肠炎犬的腹泻物进行奇异变形杆菌的分离鉴定及遗传进化分析,并对分离菌进行药物敏感性试验及小鼠致病性试验。结果表明:从送检病料中共分离获得12株奇异变形杆菌(分离率为19.35%),革兰氏染色为阴性,理化特性鉴定与奇异变形杆菌的生理特性基本一致;分离菌经16S rRNA基因扩增获得大小的为1 600 bp条带,所测序列与奇异变形杆菌的核苷酸序列同源性在98%以上,12株分离株处于3个独立分株;其中分离菌对兽医临床常用药物整体耐药水平较高,仅有部分菌株对环丙沙星、恩诺沙星、头孢曲松敏感;分离菌CC15031对小鼠的半数致死量(LD_(50))为2.8×10~6 cfu/mL,具有较强的致病性。说明分离得到的奇异变形杆菌具有较强的耐药性和不同程度的致病性,应引起重视。 相似文献
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用已建立的四重荧光PCR方法、传统国标或行标方法、MALDI Biotyper高通量微生物鉴定法(基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法)对随机抽取的14份食品样品进行检测,比较3种检测方法的匹配性。并用四重荧光PCR对农贸市场、大型超市采集的10类食品共205份样品进行检测。旨在研究四重荧光PCR法在食品中检测沙门氏菌、弗氏枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌和迟缓爱德华菌的应用及食品中这4种菌的污染情况。在205份食品样品中,受污染的食品有110份,污染率53.66%(110/205),同时检出两种及两种以上致病菌的样品有62份,占污染样品的56.36%(62/110)。迟缓爱德华菌大肠菌、弗氏枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌、沙门氏菌的检出率分别为7.80%(16/205)、53.66%(110/205)、26.34%(54/205)、5.85%(12/205)。在这3种检测方法中,四重荧光PCR的特异性好、准确性高,操作简便省时,更适用于食品中4种致病菌的快速检测。抽检的食品样品中存在这4种菌的污染,尤以生禽畜肉和水产品污染严重,需加强对食品加工、流通环节的卫生监管和监测。 相似文献
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试验通过对阿克苏某生猪养殖场腹泻仔猪肛拭子进行病原分离,并成功分离到一株细菌。细菌纯化后通过革兰氏染色观察其形态结构,并提取其DNA测序。分离菌株得到的基因序列标记为W1,通过DNA star生物软件将菌株W1与国内外菌株进行基因序列对比,并做同源性和进化树分析。结果表明:W1与国内外15株奇异变形杆菌的同源性为96.4%~99.4%,其中与W1同源性最低的是KT216564,与W1同源性最高的是AB272366。遗传进化树分析表明,分离株W1与南京株JF775415处于同一分支,属于奇异变形杆菌,该菌株的成功分离为阿克苏地区对奇异变形杆菌的研究提供参考。 相似文献
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OBJECTIVE: To compare 3 alternative culture techniques for the detection of Salmonella organisms in swine feces with a modification of the International Standard Organization (ISO) 6579 standard protocol. SAMPLE POPULATION: Fecal samples from swine herds suspected of having Salmonella infections. PROCEDURE: 4 experiments were performed to evaluate the following: 1) diagnostic sensitivity of the selective preenrichment and rapid isolation novel technology (SPRINT) protocol, compared with that of the modified ISO protocol; 2) detection limit of the SPRINT protocol for Salmonella organisms; 3) use of tetrathionate-novobiocin (TTN) broth, compared with selenite cysteine (SC) broth for selective enrichment; and 4) use of universal preenrichment (UPE) broth, compared with buffered peptone water (BPW) for preenrichment of samples prior to the use of modified semisolid Rappaport-Vassiliadis (MSRV) plates. RESULTS: Comparing the Salmonella culture results of 183 swine fecal samples, the diagnostic sensitivity of the SPRINT protocol (0.86) was not significantly different than the diagnostic sensitivity of the modified ISO protocol (0.80), although it was 24 hours faster. The SPRINT protocol could detect 5 of the 6 investigated Salmonella serotypes at inoculation concentrations of < 10 colony-forming units (CFU)/25 g of uncontaminated feces. The TTN broth performed significantly better than the SC broth for selective enrichment of Salmonella organisms. There was no significant difference in results of preenrichment of samples between the use of UPE broth or BPW. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: The SPRINT protocol may provide a faster alternative for isolation of Salmonella organisms from swine fecal samples. Furthermore, the use of TTN broth instead of SC broth may increase the sensitivity of the modified ISO 6579 protocol. 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌和奇异变形杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究 总被引：2，自引：1，他引：1
为确定甘肃省临夏州某奶牛场犊牛腹泻的病因,并提供合适的治疗方案和防控措施,试验采集该牛场13头腹泻犊牛的粪便和血清,通过胶体金技术、ELISA方法、细菌分离鉴定、Kirby-Bauer法分别进行病毒病原学检测、病毒血清学抗体检测、病原菌鉴定和药物敏感性试验。病毒学检测结果显示,13份粪样中未检测出牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCV）的抗原,牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原阳性率为23.08%（3/13）;未检出BRV和BCV的抗体,BVDV血清学抗体阳性率为38.46%（5/13）。病原菌检测结果显示,13份粪便样品中,分离出13株大肠杆菌和7株奇异变形杆菌。药敏试验表明,分离的大肠杆菌和奇异变形杆菌对20种常规药物均产生了不同程度的耐药,且无对两种细菌均有效的药物。此次犊牛腹泻是由BVDV、大肠杆菌、奇异变形杆菌混合感染引起的,且大肠杆菌和奇异变形杆菌的耐药现象严重,本试验结果为该牛场进一步治疗此次的犊牛腹泻病提供了合理有效的依据。 相似文献
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为确定广东某竹鼠养殖场发生竹鼠死亡的原因,本研究从发病竹鼠血液和组织中分离到可疑细菌,并对分离的菌株进行革兰氏染色、生化特性分析和16S rRNA基因鉴定及序列分析,同时进行药敏试验。结果显示:分离的细菌为杆状、球状和球杆状形状不一的革兰氏阴性菌;生化特性与奇异变形杆菌基本一致;16S rRNA序列与NCBI数据库中奇异变形杆菌16S rRNA核苷酸相似性为99%以上。结果表明,该分离细菌为奇异变形杆菌将其命名为GD/ZS-01株;药敏实验显示,该菌株对头孢哌酮、丁胺卡那和左氧氟沙星高度敏感。本研究结果为竹鼠养殖场疫情的防治提供了科学参考。 相似文献
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山东规模化养殖场毛皮动物多重感染病原学分析 总被引：2，自引：0，他引：2
2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。 相似文献
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通过PCR反应扩增7株鸡奇异变形杆菌和1株兔奇异变形杆菌的23SrRNA基因片段(1045bp),经克隆测序,用DNA Star分析软件将所获得的序列与GenBank中收录的奇异变形杆菌、普通变形杆菌以及其他相近属的23S rRNA基因序列进行同源性比较,并由此构建奇异变形杆菌系统进化发生树。结果表示,本实验室保存的7株鸡奇异变形杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的奇异变形杆菌核苷酸序列同源性为99.4%～99.8%,与兔奇异变形杆菌核苷酸序列同源性为98.8%～99.3%,与普通变形杆菌的核苷酸序列同源性为95.4%～96.2%,而与其他相近属同源性只有92.9%～93.4%。结果表明,23S rRNA基因序列分析可以作为鉴定奇异变形杆菌的一种快速、简便的方法。 相似文献
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Intestinal bacterial flora of the household lizard, Gecko gecko 总被引：1，自引：0，他引：1
A total of 114 isolates was recovered from the intestines of 43 househould lizards, Gecko gecko. Among the important ones were Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis and Edwardsiella tarda. 相似文献
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Enzyme-linked immunosorbent assay, using monoclonal antibody, to detect enterotoxic Escherichia coli K99 antigen in feces of dairy calves 总被引：1，自引：0，他引：1
A modified, double-antibody, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to detect the K99 pilus antigen of enterotoxic Escherichia coli (ETEC) in feces of calves. Extremely high positive to negative ratios (greater than 200) were obtained by using monoclonal antisera as the primary antibody. Strong positive reactions were obtained with strains of E coli known to produce the K99 antigen; however, non-enteropathogenic E coli (strains not producing the K99 antigen), Salmonella, Proteus, Klebsiella, Pseudomonas, Staphylococcus, Streptococcus, and rotavirus produced negative results. Seventy-five fecal samples, 8 from healthy calves and 67 from calves with neonatal calf diarrhea were examined with the K99 ELISA for the presence of ETEC. Rotavirus test and fecal culture results were available on feces from calves with diarrhea and were used with the K99 ELISA results to determine the specific cause of the disease. Enterotoxic E coli was the predominant agent detected in the feces of 29 diarrheal calves less than 5 days of age. Mixed infections of rotavirus and ETEC were also common in these calves, but rotavirus infections alone were not detected. In 38 calves greater than or equal to 5 days, rotavirus was detected without ETEC. Of these calves, only 2 produced positive tests with the K99 ELISA. Salmonella sp and Proteus sp were detected from 5 of 67 calves with diarrhea. 相似文献