结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宫强  刘思国  王牟平  王春来  彭永刚  沈国顺 《中国兽医学报》2004,24(4):340-342

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究     

刘思国  彭永刚  王牟平  王春来  宫强 《中国预防兽医学报》2004,26(6)

以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础.  相似文献   

四川猪链球菌Ⅱ型分离株生物学特性的初步研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘华雷王君玮  赵永刚赵云玲范伟兴  陈义平王志亮 《中国动物检疫》2005,22(10):20-22

猪链球菌Ⅱ型是导致许多国家猪链球菌病的主要病原，自90年代晚期江苏发生猪链球菌Ⅱ型感染以来已成为我国引起人畜共患病的一种重要的新病原菌。最近在四川省部分地区发生了不明原因的猪源人畜共患病，且具有较高的死亡率。我们从病死猪的病料中成功分离到三株猪链球菌分离株，经革兰氏染色、生化试验、血清凝集试验和PCR鉴定，最终证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定．结果发现MRP和EF均为阳性。进一步的药敏试验证实：分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅳ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢肤肟等抗菌药高度敏感。  相似文献   

比格犬源芽孢杆菌对小鼠体重和组织脏器的影响     

林康  刘国庆  李炼  刘洪成  刘慧  温建新 《中国动物检疫》2018,35(1):91-94

为验证比格犬源芽孢杆菌的安全性,以小鼠为试验动物,研究该菌对小鼠体重和组织脏器的影响。将40只30日龄SPF级小白鼠(雌雄各20只)随机分为4组,每组10只。对照组饲喂普通日粮;试验组在饲喂普通日粮的基础上,每只灌服0.2 m L比格犬源芽孢杆菌菌液(109 cfu/m L);每隔2 d测定体重;18 d后,将小鼠脱臼处死,取脾脏、肾脏称重;将肝脏、十二指肠、空肠和回肠用福尔马林固定,做组织切片试验。结果显示:试验组与对照组小鼠的体重差异不显著(P0.05);试验组小鼠肾脏重量有增加,肾脏指数与对照组相比,有显著性差异(P0.05);试验组公鼠脾脏重量增加明显,与对照组相比,差异极显著(P0.01);试验组小鼠肠绒毛较发达,肝小叶结构清晰,肝窦和门管区明显可见。试验证明,比格犬源芽孢杆菌对小鼠十二指肠、空肠、回肠和肝脏的正常结构未造成危害,说明比格犬源芽孢杆菌是安全可用的,且对组织脏器有一定的促生长作用。  相似文献   

爪哇香茅蒸馏和贮存时间对挥发油得率及特征组分的影响     

周丽珠  谷瑶  杨漓  陈明江  温如斯 《热带农业科学》2019,(6)

为了研究不同蒸馏和贮存时间爪哇香茅得油率以及特征组分的变化情况,采用水蒸汽蒸馏法对7月采集的爪哇香茅进行得油率测定,利用气相色谱(GC)对爪哇香茅油的化学成分进行定量分析,采用GC峰面积归一化法定量,观察蒸馏和贮存时间对爪哇香茅挥发油成分的影响。实验结果表明:爪哇香茅得油率(绝干计)随着蒸馏时间延长而增加,在90 min之后趋向稳定,其特征组分含量在蒸馏时间60 min达到QB/T 1033-2011规定要求;当蒸馏时间为150 min时,香茅醛含量降至23.238%,明显低于QB/T 1033-2011规定要求。爪哇香茅草阴干贮存,一周之内水分明显降低,绝干得油率整体呈下降趋势,降低幅度较小,爪哇香茅油特征组分在贮存7 d之内变化较小,贮存第14天,香茅醛含量降为31.223%,之后呈稳定趋势,香叶醇和香茅醇含量随着贮存时间的延长而明显增加。由此可见,蒸馏和贮存时间对爪哇香茅加工十分重要,厂家可根据生产实际和市场需求选择合适的蒸馏时间和贮存时间。  相似文献   

菊花花瓣伸长相关基因CmXTHs的克隆与功能验证     

温立柱  孙霞  任红  樊红梅  于媛媛  郭芸珲  郑成淑 《园艺学报》2017,44(11):2150-2162

从杭白菊(Chrysanthemum morifolium‘Hangbaiju’)中克隆了4个细胞壁松弛和伸展相关的木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因,分别命名为CmXTH1、CmXTH2、CmXTH3和CmXTH4,序列分析表明其编码的氨基酸序列N端都含有23~30个氨基酸组成的信号肽区域和保守的催化活性位点DE(I/L)DEFLG以及紧邻的N(R/A)T组成的N端糖基化位点,CmXTH1/2/3的C端均含有4个保守的半胱氨酸残基,CmXTH1/2/3/4蛋白的相似度为66.2%。系统进化分析结果表明,CmXTH1/2/3属于XTH家族Ⅰ组,CmXTH4属于Ⅱ组。实时荧光定量结果表明:(1)菊花CmXTH1/2/3/4在根、茎、叶和花蕾中均有表达。CmXTH1在根中表达量较高,CmXTH2/3在茎中表达量较高,CmXTH4在花蕾中表达量最高。(2)CmXTH1/2/3/4在花序不同部位表达量有差异,CmXTH1/4在舌状花中表达量最高,CmXTH2/3在筒状花中表达量较高。(3)CmXTH1/2/3/4在舌状花不同发育阶段表达量差异显著,CmXTH1/2在盛花期表达量最高,CmXTH3在衰老期表达量最高,CmXTH4在初开期表达量最高。病毒诱导基因沉默结果表明,CmXTH1/2/3/4沉默系的花序直径和舌状花长度与对照相比均有所减小,其中CmXTH4沉默系减小最大,分别减小了25.67%和10.42%,舌状花花瓣表皮细胞与对照相比明显变小,影响了舌状花花瓣的伸长;CmXTH2沉默系的筒状花雄蕊长度和CmXTH4沉默系的花萼直径分别与对照相比显著减小。这表明菊花CmXTH1/2/3/4基因参与了花序的开放,促进了舌状花花瓣的伸长,对于菊花的花序增大具有重要作用。  相似文献   

基于EEMD与EMD的降雨序列多时间尺度对比分析     

章国勇  伍永刚刘洋 张炜博 《中国农村水利水电》2014,(8):98-103

针对水文时间序列多时间尺度分析问题，分别应用经验模态分解(EMD)与总体经验模态分解(EEMD)方法进行对比研究。论文首先将EMD与EEMD进行测试函数仿真对比分析，结果表明EEMD较EMD能较好的解决模态混叠现象。将其应用于湖北省降雨序列演变特性分析，并引入基于LSSVM信号延拓方法以消除水文序列的端点效应，结合小波分析结果对比验证表明，EEMD作为一种新的信号处理方法，较EMD能更精确地获取降雨时序的多时间尺度特性，可为水文时间序列演变规律分析提供依据。  相似文献   

水稻低节位早发分蘖与秧苗叶片形态、碳氮代谢的关系     

涂雯  安琪  何永刚  刘少佳  蔡海亚  章志宏 《湖北农业科学》2019,58(21)

为了研究水稻(Oryza sativa L.)低节位早发分蘖与叶片形态、碳氮代谢之间的关系,并筛选低节位分蘖多、早期分蘖发生速率快且符合理想株型叶片形态的水稻品种(系),对31个籼亚种水稻品种(系)早期低节位的分蘖特性、叶片形态及碳氮代谢指标进行了相关性分析和聚类分析。结果表明,在正常栽培条件下,不同水稻品种(系)第一叶位成蘖率存在广泛变异,而第二、第三叶位成蘖率达到100%;水稻低节位分蘖发生速率与秧苗前3片叶叶长呈正相关,分蘖数量与叶宽呈负相关,因此,在育种上,可以将水稻秧苗前3片叶较长且较窄作为筛选早发分蘖水稻品种的参考形态指标;水稻植株体内蔗糖含量只影响分蘖发生速率,但不影响分蘖数量;硝态氮含量既影响分蘖发生速率,也影响成蘖率,氮代谢酶谷氨酸合酶(NADH-GOGAT)和谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)的活性能促进水稻低节位分蘖的发生;将31份水稻品种(系)进行聚类,可分为A、B、C 3类,其中C类材料是分蘖发生较早且分蘖发生速率快、叶片形态更接近于理想株型叶片形态的优质育种材料。  相似文献   

杂交稻甬优12的播期试验     

徐加湖  陶永刚  叶峰 《浙江农业科学》2014,(3):320-323

对籼粳杂交稻甬优12进行播期试验,结果表明,在黄岩区种植甬优12品种,6月7日后播种的667 m2产量将不会达到650 kg。为确保结实率80%以上,并且在11月10日前成熟,甬优12最佳播种期在5月24日左右,最迟播种期应不迟于5月27日。  相似文献   

应用营养调控技术保护奶牛养殖环境的措施     

康永刚  吕颜枝  廖云琼 《贵州畜牧兽医》2015,39(2):29-30

随着奶牛集约化程度的提高,奶牛粪便中氮、磷的排放也逐渐增加,减少奶牛粪便氮、磷排放已成为奶牛生产研究的热点问题。文章从奶牛营养调控技术阐述了降低奶牛粪便中氮、磷排放的调控措施,为减少奶牛氮、磷的排放,保护养殖环境提供可行方法。  相似文献