河南省部分地区规模化猪场繁殖障碍性疫病的血清学调查     

常洪涛  姚惠霞  李鸿雁  陈陆  杨霞  赵军  王川庆 《安徽农业科学》2010,38(34):19521-19522,19525

[目的]了解河南省部分地区规模化养猪场繁殖障碍性疫病的流行情况,为有目的、有重点地开展相应的猪繁殖障碍性疫病免疫预防工作提供参考。[方法]对河南部分猪场送检于河南农业大学动物疫病检测诊断中心的血清进行监测,其中6 825、2 609、1 177、123和53份血清分别用于检测猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病和衣原体病抗体。[结果]血清学监测结果显示,血清中猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病和衣原体病相应抗体阳性率分别为63.28%、61.44%、25.49%、39.84%、5.66%。[结论]河南省部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病的防疫工作亟待加强,猪伪狂犬病的防治需要进一步强化,衣原体病已得到有效控制。  相似文献   

河南不同临床型鸡支气管炎病毒流行毒株的分离鉴定及其S1基因变异分析     

徐雪  王川庆  王泽霖  杨霞  陈陆  王宏魁  刘春生  刘慧敏  郑鹿平  郭伦涛  王新娟 《中国兽医学报》2010,30(6)

经鸡胚接种、RT-PCR、气管环培养等方法从河南地区发病鸡群中分离、鉴定出2株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitic virus,IBV),分别命名为HN/HL株和HN/SG株。应用RT-PCR方法对尿囊液中HN/HL株和HN/SG株以及本室保存的H120株的S1基因全序列进行了扩增,并对其进行克隆测序。结果显示,3株IBV目的片段全长分别为1828、1825、1819bp,3个序列相互之间存在多位点的变异,同时存在插入和缺失现象;对推导的氨基酸序列进行分析表明,HN/HL株S蛋白裂解识别位点序列为HRRRR,而HN/SG株和H120株S蛋白裂解识别位点同为RRFRR。将测序结果同GenBank上登录的其他IBVS1基因相比较,发现本试验的HN/HL株与疫苗H120株的同源性仅为78.1%,HN/SG株与H120株的同源性仅为81.1%,而HN/HL株与HN/SG株的同源性为87.9%。同源性及遗传进化分析还发现,已报道的腺胃型ZJ971株和QX株在分子水平上应该分别属于呼吸型和肾型IBV。  相似文献   

单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

许保疆  游一  郭成留  王川庆 《中国兽医学报》2010,30(12)

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。  相似文献   

SPF蛋鸡人工感染鸡杆菌的病理形态学观察     

刘慧敏  陈陆  杨霞  常洪涛  郑鹿平  王永生  高冬生  王珊  王川庆 《中国兽医学报》2010,30(7)

采用鸡杆菌自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染开产前(105日龄)和开产后(163日龄)的SPF蛋鸡,运用组织学的方法对鸡杆菌自然病例和试验病例进行比较病理学观察。结果表明,自然病例和试验病例均可引起蛋鸡产蛋高峰推迟,产蛋量下降,且多产畸形蛋;病变主要在呼吸道和生殖道,主要表现为呼吸道和生殖道黏膜层严重充血、水肿、浆液性及炎性渗出等反应。但是试验病例未出现自然病例中常见的腹膜炎和输卵管炎症状。输卵管的病变主要在膨大部和子宫部,这种特征性病变可作为该病病理诊断的重要指征之一。这表明鸡杆菌单因子感染可引起SPF开产蛋鸡生产性能明显降低以及呼吸道和生殖道的病理变化。  相似文献   

猪链球菌9型荚膜多糖cps9G基因的原核表达     

刘春生  徐耀辉  陈陆  杨霞  王新娟  刘春明  王川庆 《中国兽医学报》2011,31(7)

本研究旨在克隆表达猪链球菌9型荚膜多糖部分抗原表位。设计1对引物,采用PCR法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHⅠ、XhoⅠ进行双酶切后,将其定向克隆到pET32a（＋）中,构建重组表达质粒pET32a—cps9G,并将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,并优化表达条件。结果表明,经1．2mmol／L IPTG诱导4h后SDS-PAGE分析表明,重组菌株表达出了约50700的融合蛋白条带,与预期一致。Western-blotting分析表明,该融合蛋白具有特异的生物学活性。这为以后建立快速、简便、特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原,同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因NS1的表达及其单克隆抗体的研制     

杨霞  陈少渠  李建丽  王川庆  王泽霖 《中国兽医学报》2011,31(9)

利用RT-PCR技术扩增获得了H9N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为654bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21,并诱导表达出了相对分子质量大约为28 000的NS1融合蛋白。NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化,采用缓慢稀释和透析相结合的方法复性H9N2-NS1蛋白,获得纯度较高的NS1蛋白,以纯化的NS1免疫BALB/c小鼠,间接接ELISA方法筛选阳性克隆,对获得的抗H9N2-NS1单克隆抗体（McAbs）进行特异性分析;建立了2株稳定分泌抗H9N2-NS1McAbs的杂交瘤细胞系6B9和6C2;腹水的特异性鉴定结果表明,2株McAbs能特异性的识别H9N2-NS1,而与H5N2亚型AIV、H9N2亚型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76均不发生反应。Western blotting鉴定表明,所获得的单抗只与NSl蛋白条带反应。亚类显示,6B9为IgG1,6C2为IgG2b。结果表明,2株抗H9N2-NS1McAbs的制备对H9N2亚型禽流感病毒检测试剂盒的研制以及该病的防治有重要意义。另外,NSl蛋白单抗的成功研制为进一步研究NSl蛋白的结构、功能与细胞的相互作用机制及AI遗传变异规律奠定了一定的基础。  相似文献   

雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性     

师润  吕文强  陈陆  杨霞  刘红英  余秋颖  明星  王川庆 《中国兽医学报》2014,(1):110-115

设计1对引物,建立RT-PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡β1基因表达水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用此方法测定1²0日龄雏鸡不同肠段组织β1基因表达水平。结果显示,从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA;检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致(扩增曲线斜率差<0.1),满足使用比较Ct值法对β1基因mRNA进行相对定量分析的前提;扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明,1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明,鸡肠组织中存在β1基因表达,并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。  相似文献   

鸡卡氏杆菌的分子鉴定及其16S rRNA基因序列分析(英文)     

皇甫和平  王川庆  陈陆  杨霞  刘红英  彭志锋  郑鹿平  徐雪  刘慧敏  付仁一  郭伦涛 《（《农业科学与技术》）编辑部》2009,(1)

Two strains of Gallibacterium, isolated from one laying hen flock in Zhengzhou City of Henan Province, were identified by the morphological observation, genus-specific PCR, and analysis of 16S rRNA gene, which was used to generate the phylogenetic tree, with the 21 members of the 12 genera belonging to Pasteurellaceae to analyze the homology. Two strains were named Yu-ZZ-HL-I-SLG and Yu-ZZ-HL-II-GZ. The comparative result of the 16S rDNA sequence shows that the 2 isolated strains are identical in sequence; the highest identity (99.9%) was observed between the isolated strain and one of the strains of Gallibacterium anatis (AF228002), the homologies between the isolated strain and 3 strains of gallibacterium accessed in NCBI (AF228016, Gallibacterium genomosp.1, AF228017, Gallibacterium genomosp.2, AF228018, Gallibacterium genomosp.1) were above 97.1%, higher than that of the isolated strain and the other strains of the other 11 genera which were between 90.7%-93.2%. It can be seen from the phylogenetic tree that the 2 isolated strains and the other 4 strain of gallibacterium fell into the same branch, furthermore the 2 isolated strains and the strain of Gallibacterium anatis locate in an internal branch, indicating that the 2 isolated strains belong to Gallibacterium anatis.  相似文献   

16S rRNA基因序列分析技术在细菌分类中应用的研究进展   总被引：6，自引：0，他引：6  

杨霞  陈陆  王川庆 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(2):55-60

由于16S rRNA基因序列的保守性和存在的普遍性,应用16S rRNA作为分子指标已逐渐成为微生物检测和分类鉴定的一种强有力工具。文章就该基因的特征、研究方法、检测方法及临床应用与研究的新进展等作以简要综述,同时对存在的问题进行了探讨。  相似文献   

蛋鸡群卡氏杆菌感染情况的初步研究   总被引：7，自引：1，他引：6  

王川庆  陈陆  杨霞  皇甫和平  刘红英  彭志峰  郑鹿平  徐雪  刘惠敏  付仁一  郭轮涛 《河南农业科学》2008,(3):97-101

首次报道了我国鸡场中鸭卡氏杆菌的感染情况。利用流行病学、临床观察、病理剖检、微生物学、分子生物学及血清学等方法研究表明,所调查的12个鸡场均有卡氏杆菌感染,平均抗体阳性率为48.4%,发病期为26~101周龄,典型症状是产蛋下降,病鸡腹部下垂、着地,行走如企鹅状,触之有波动感。剖检变化主要为卵黄性腹膜炎、输卵管炎或输卵管囊肿。从病鸡的卵巢、输卵管、肝脏等分离的细菌经鉴定为鸭卡氏杆菌,药敏试验显示,所有菌株仅对头孢类、阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考等药物高度敏感,而对其余大多数抗生素均不敏感。同时也分离到大肠杆菌和沙门氏菌。结果提示:我国鸡群中的卡氏杆菌感染可能已相当普遍,有必要对其影响做出客观评价。  相似文献