日本三角涡虫全能干细胞的分离培养与鉴定     

王秀革  刘旭东  于倩  黄金明  王长法  袁金铎 《山东农业科学》2013,45(2):34-37

涡虫具有极强的再生能力,并且认为涡虫体内存在一类具有增殖分化潜能被称为neoblasts的全能干细胞。这种细胞在涡虫体内可发生迁移、增殖和分化,对其个体组织器官损伤的修复具有重要作用。本实验中,三角涡虫经过饥饿处理后切取特定的组织块,然后再经过处理使组织块中的细胞分离出来。分离的细胞继续培养并通过碱性磷酸酶检测最终鉴定为neoblasts干细胞。  相似文献   

中国荷斯坦牛SLC11A1基因多态性与乳腺炎的相关性研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

郭洋  王洪梅  侯明海  王长法  何洪彬  吕文发  仲跻峰 《中国农业科学》2011,44(19):4072-4080

 【目的】通过研究中国荷斯坦牛SLC11A1基因多态性与乳腺炎性状间的相关性,为奶牛乳腺炎抗性选育提供参考。【方法】采用巢式PCR、降落PCR和DNA测序等技术,研究分析771头牛SLC11A1基因外显子10、内含子9和11的基因多态性,采用SHEsis和PHASE软件进行配对连锁不平衡和单倍型分析。【结果】发现4个不连锁的SNPs,分别为内含子9的6 067（A/G）、6 358（C/T）,外显子10的7 155（A/G）和内含子11的7 809（A/T）;其中,6 067（A/G）、6 358（C/T）和7 809（A/T）为新SNPs。不同基因型与乳腺炎相关性分析结果表明,SLC11A1基因的6 358（C/T）和7 155（A/G）对SCS和产奶量有显著影响（P＜0.05）,6 358（C/T）的CC基因型和7 155（A/G）的AA基因型是优良基因型;单倍型分析表明,群体中共发现16种单倍型组合,其中CAAA是优良的单倍型组合,其个体的SCS低、产奶量高。【结论】SLC11A1基因CAAA单倍型组合可能是奶牛SCS和产奶量的优良基因型和单倍型组合,可作为分子标记应用于奶牛乳腺炎抗性筛选。  相似文献   

金黄色葡萄球菌攻击下小鼠泌乳期乳腺炎症病理机制分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

李丽  魏春梅  刘代成  杨宏军  何洪彬  王长法  高运东  仲跻峰  彭广能 《山东农业科学》2011,(2):99-102,114

通过观察不同剂量(E1:10 CFU/μl;E2:20 CFU/μl;E3:100 CFU/μl;E4:200 CFU/μl;E5:2000CFU/μl)金黄色葡萄球菌攻击下的小鼠泌乳期乳腺炎症病理变化,选择最佳剂量建立小鼠乳腺内感染模型.结果表明:试验组乳腺组织中分离的细菌数呈先升高后下降的趋势,E3达到最高.组织形...  相似文献   

牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(h/b)的克隆、表达及溶血活性分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

杨钦  王长法  杨宏军  杨少华  高运东  仲跻峰  彭广能 《中国农业科学》2009,42(1)

[目的]实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性.[方法]PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应.[结果]测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103Hu·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应.[结论]成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础.此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法.  相似文献   

TLR2基因多态性及其与奶牛乳房炎的相关分析     

刘利  黄金明  王长法 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2009,37(9):45-52

【目的】研究牛Toll样受体蛋白2基因(TLR2)的多态性及其与中国荷斯坦奶牛乳房炎的关系。【方法】以中国荷斯坦奶牛、鲁西黄牛和渤海黑牛为研究对象,利用DNA测序、PCR-RFLP和创造酶切位点RFLP(CRS-RFLP)技术对TLR2基因多态性及其与中国荷斯坦奶牛乳房炎的关系进行研究。【结果】经DNA测序,在牛TLR2基因的3′非翻译区发现1个新的SNP,即mRNA序列的3 008位发生了T/C突变。TLR2基因编码区(c.651G>A,c.827A>G)和3′非翻译区(c.3008T>C)有3个突变位点,分别是PstI,Hin1Ⅱ和HhaI限制性内切酶的酶切多态位点。3个多态位点在各品种牛之间的基因型频率和等位基因频率差异较大;经χ2适合性检验,除鲁西黄牛的HhaI酶切位点处于非Hardy-Weinberg平衡状态外,3种牛在其他位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。只有Hin1Ⅱ酶切多态位点与牛乳中的体细胞评分(SCS)存在相关性,含有B等位基因的个体SCS显著低于含有A等位基因的个体(P<0.05)。中国荷斯坦奶牛在3个酶切位点形成了H1-H8共8种单倍型,产生了H1H1、H1H2、H1H3、H1H4、H1H7和H1H8等6种单倍型组合,其中H1H1的频率最高(55.89%),H1H4的SCS最低(3.17),且不同单倍型组合与SCS存在相关性。【结论】TLR2基因可用作奶牛抗乳房炎性状的辅助选择标记。  相似文献   

金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取及其多糖含量的测定     

孙焕  胡桂学  杨宏军  何洪彬  杨少华  王长法  王洪梅  高运东  仲跻峰 《勤云标准版测试》2009,29(6)

为提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖并测定多糖含量.采用超声波破碎菌液,用CTAB结合其中的多糖、CaCl2解离、乙醇沉淀等化学方法提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖,利用苯酚-硫酸法测定其含量.结果显示,得到荚膜多糖0.31 g,含量为65.06%.结果表明,成功提取金黄色葡萄球菌荚膜多糖,并对其含量进行了测定,初步确定了粗提金黄色葡萄球茵荚膜多糖的方法.  相似文献   

单味中药多糖对奶牛子宫内膜炎病原菌体外抑菌作用   总被引：5，自引：0，他引：5  

张洪波  葛利江  杨宏军  杨少华  王长法  高运东  仲跻峰 《西南农业学报》2009,22(3)

本实验对山东省3个大型奶牛场的40头患有子宫内膜炎的奶牛进行调查、采样、用常规方法对所采样品进行细菌的分离培养、纯化、鉴定等.利用水煎法提取黄连、大黄、五味子等8味中药的活性成分.通过琼脂平板扩散法对分离率大于5 %的病原菌进行中药体外抑菌试验.结果共分离细菌44株,其中大肠杆菌15株(34 %)、葡萄球菌(金黄色葡萄球菌5株)9株(20 %)、链球菌5株(11.4 %)、粪肠球菌5株(11.4 %)、不动杆菌属3株(6.8 %)、芽孢杆菌2株(4.5 %)、绿脓杆菌2株(4.5 %)、克雷伯氏菌1株(2.2 %)及梭状芽孢杆菌属的厌氧菌2株(4.5 %).中药体外抑菌结果表明,8味中药中,黄连、大黄和五味子等对子宫内膜炎病原菌都表现为高度或中度敏感,其它的中药抑菌效果表现不敏感.分离引起奶牛子宫内膜炎的病原菌并通过体外中药药敏实验的结果为临床治疗提供可靠的依据.  相似文献   

荷斯坦牛HSP70-1基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

程维杰  李秋玲  王洪梅  孙延鸣  王长法  李建斌  仲跻峰 《新疆农业科学》2008,45(6):1187

利用PCR-SSCP和PCR-RFLP相结合的方法检测HSP70-1基因在253头中国荷斯坦牛中的多态性,并分析其多态性与体细胞评分(SCS)的相关性.结果表明,HSP70-1基因扩增片断的1 623 bp处产生G-A的突变,1 623bp处产生G-A-C的突变.两位点都是沉默突变,未引起氨基酸序列的改变.HSP70-1基因分别经EcoRⅡ、BglⅠ、FokⅠ消化后表现多态性.经χ2 适合性检验,中国荷斯坦牛在该位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态.同时,群体基因座不同基因型与SCS相关分析的结果表明,2 409位点基因型与SCS相关性不显著,1623位点与SCS相关性显著,CC型SCS指标显著低于AG、GG型(P＜0.05),CC基因型可作为乳腺炎抗性的有利基因型,可将HSP70-1基因作为奶牛乳腺炎候选基因,将应用于分子标记辅助选择育种,为乳腺炎抗性牛群的选育奠定一定的理论基础.  相似文献   

荷斯坦牛TLR2基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

张翠霞  王洪梅  李建斌  王长法  赖松家  李秋玲  仲跻峰 《华北农学报》2008,23(6)

利用PCR—RFLP方法检测TLR2基因在297头中国荷斯坦牛中的多态性,并分析其多态性与体细胞评分（SCS）的相关性。结果表明,TLR2基因exon2扩增片断的109bp处产生C→A的突变,并导致天冬氨酸突变为谷氨酸。TLR2基因exon2被EcoR V消化后表现多态性,表现AA,AB,BB 3种基因型,其中B等位基因为优势等位基因,等位基因频率为0．7845,而A等位基因频率则为0．2155。经χ^2适合性检验,中国荷斯坦牛在该位点达到Hardy-Weinberg平衡状态。同时,群体EcoR V基因座不同基因型与SCS相关分析的结果表明,BB,AB型个体的SCS指标显著高于AA型（P〈0．05）,AA基因型可作为乳腺炎抗性的有利基因型,可将TLR2作为奶牛乳腺炎候选基因,将应用于分子标记辅助选择育种,为乳腺炎抗性牛群的选育奠定一定的理论基础。  相似文献   

德州驴种公驴的饲养管理及常见疾病防控     

张伟  王长法  胡莉萍  嵇传良  黄保华 《安徽农业科学》2018,46(12):89-91

针对德州驴种公驴的生理特性、遗传性状等品种属性以及饲料营养和配种交配,提出了种公驴遗传性能的选定原则和种用管理建议,并对其常见疾病的产生原因、防控措施、临床治疗等进行了阐述,旨在为德州驴种公驴的保种繁育、饲养管理和常见疾病防控提供技术参考。  相似文献