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81.
根据GenBank上发表的金黄色葡萄球菌β-溶血素基因序列,设计了一对特异性引物。提取临床乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌山东株zfb的全基因组DNA为PCR模板,扩增β-溶血素基因,将PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸和1个终止子的成熟蛋白,与已报道的金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白的氨基酸组成同源性为99.4%。软件分析显示,克隆的金葡菌β-溶血素是一种依赖于金属离子的磷脂酶。上述结果显示,已获得金黄色葡萄球菌β-溶血素基因,为获得重组金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。  相似文献   
82.
提取牛血液和精液DNA,进行PCR扩增、RFLP分析,建立尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)检测方法。对济南市6个奶牛场224头荷斯坦奶牛及53头种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测,共检测出2头杂合母牛(携带者),杂合子占检测母牛群的0.89%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。实验证明,该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠。  相似文献   
83.
应用PCR方法检测奶牛乳房炎主要病原菌   总被引:1,自引:0,他引:1  
为建立一种在分子水平快速检测乳房炎主要病原菌的方法,根据GenBank已发表的序列设计了3对特异性引物,结果可同时检测奶牛乳房炎的3种主要病原菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌.其特异性为100%,敏感性检测的最低浓度为:1.25×103 cfu/mL.  相似文献   
84.
利用巢式PCR快速鉴定牛传染性鼻气管炎   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了快速检测牛传染性鼻气管炎,采用SDS-蛋白酶K法,提取病毒模板DNA.根据IBRV gB基因序列设计了1对特异引物,在其上下游引物的内侧又分别设计了1对引物,以这4条引物对IBRV模板进行扩增.结果成功扩增出预期目的片段,建立了巢式PCR检测方法.敏感性、特异性等检测试验结果表明该方法能特异检测IBR病毒.本方法具有快速、灵敏、特异的优点,适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定.  相似文献   
85.
为建立奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌致病菌株的检测方法,依据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列,设计合成特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增Nuc基因,并将扩增基因克隆入T载体,进行序列测定,对所分离的奶牛乳腺炎病原菌进行鉴定。结果显示:金黄色葡萄球菌扩增出特异性条带,大小为694bp;其他菌株未出现条带。敏感性检测的最低浓度为1.25×103cfu/mL。本试验所建立的方法具有特异性强、敏感度高的特点。  相似文献   
86.
牛轮状病毒与病毒性腹泻病毒的双重RT-PCR检测方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
建立了能够同时检测牛轮状病毒(BRV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的双重RT-PCR方法.应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分编码序列,其扩增产物分别为342bp和196bp.说明该方法的特异性强、敏感性高,可检测到1pg的病毒RNA,可应用于临床诊断和流行病学研究.  相似文献   
87.
GALNTL5是近年来新发现的一个在睾丸中特异性表达,并参与精子发生的重要蛋白。GALNTL5的突变可导致雄性患弱精症,影响雄性生育能力。因此,GALNTL5基因可作为候选基因,阐述相关雄性先天性不育的部分病因。论文简要介绍了GALNTL5的结构与功能及其突变对精子发生产生的生物学影响。  相似文献   
88.
为了探索hsp70基因多态性与热应激性状(直肠温度和红细胞钾含量)的相关性,利用PCR-SSCP方法检测290头中国荷斯坦奶牛hsp70基因的未知SNP,并利用PCR-RFLP方法对基因进行分型,采用SBYE荧光定量PCR方法检测不同组织中hsp70 mRNA表达水平。结果显示,在1524位点发现一个G/A突变,有两种基因型(AA/AB),基因频率和基因型频率分别是0.957 0,0.043 0和0.913 7,0.086 3,卡方检验该群体处于哈迪-温伯格平衡。相关性分析结果表明,AA、AB基因型的直肠温度没有显著差异,但在红细胞钾含量中有极显著差异。肝脏中hsp70 mRNA表达水平显著高于其他组织。推测hsp70基因1524位点的G/A SNP与中国荷斯坦奶牛热应激有关。  相似文献   
89.
鲤肠粘液与血清中免疫球蛋白的比较研究   总被引:12,自引:2,他引:10  
鱼类肠道中存在大量粘液,而其中所含的免疫球蛋白无疑对体内以血清IgM为中心的免疫系统是一个补充,在鱼类免疫中起着重要的作用。目前人们已从多种鱼类的肠粘液中分离提取了免疫球蛋白[1,2],但至今未见对鲤肠粘液中免疫球蛋白研究的报道。由于鲤是我国的主要淡水养殖鱼类之一,对其肠粘液与血清中免疫球蛋白进行比较研究,不仅有助于全面了解鱼类的特异性体液免疫机制,而且将会对鱼类病害口服疫苗的免疫防治提供重要理论依据。收稿日期:1998-07-271 材料与方法1.1 实验材料鲤20尾,每尾重约0.5kg,取自…  相似文献   
90.
无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达质粒的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
提取无乳链球菌的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到PMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768bp的ORF,可编码含256个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成圊源性为98.4%。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/cfb。这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。  相似文献   
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