Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

谢体三  农微  张新民  覃琦丽  黄雅琼  石德顺 《中国兽医学报》2009,29(11)

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.  相似文献   

低氧对水牛卵泡内膜细胞雄激素合成能力的影响     

张俊  陈梦佳  闫茜  陈莫斯楠  李政达  卢嘉卡  石德顺  陆凤花 《中国兽医学报》2022,(2):349-354

本研究采用低氧(5％O2)条件培养水牛内膜细胞,探讨低氧对水牛内膜细胞雄激素合成的影响.结果 显示,低氧能显著提高水牛内膜细胞雄激素合成相关基因(CYP11A1、CYP17A1和3β-HSD)表达和睾酮分泌水平(P＜0.05);低氧能显著增强水牛内膜细胞对促黄体素(LH)的敏感性(P＜0.05).结果 表明,低氧(5％...  相似文献   

慢病毒介导的水牛CD14基因shRNA序列的筛选     

李美青  康超  黄时海  覃兆鲜  路新梅  乔树叶  李湘萍  石德顺 《畜牧与兽医》2012,44(12):4-9

研究慢病毒载体介导的RNA干扰对水牛CD14基因表达的影响,设计并筛选具有抑制作用的靶序列。将真核表达载体pDsRed-N1-buffaloCD14转染293细胞株,建立稳定表达水牛CD14基因细胞系。同时设计5条水牛CD14 shRNA(319/421/755/970/1 041)以及1条阴性对照序列(NC-1864),构建慢病毒重组质粒pSicoR-GFP-shRNA。采用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T细胞包装慢病毒,并进行滴度测定。最后,通过对慢病毒感染的pDsRed1-N1-buffalo CD14-293细胞进行QRT-PCR检测,筛选具有抑制效果的shRNA。结果显示:在各感染细胞组中,外源水牛CD14基因mRNA的表达均受到不同程度的抑制,其中,CD14 shRNA-970靶点的干扰效率最高,达到79.3%(P<0.01)。成功筛选出具有较高抑制效果的水牛CD14 shRNA靶序列,为研究CD14基因在布氏杆菌所致炎症反应中的作用,建立家畜布氏杆菌病防治新方法奠定了基础。  相似文献   

水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系的建立     

汪彩珠  杨素芳  罗婵  陈施蓓  石德顺 《中国兽医学报》2012,32(12)

本试验对水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系建立进行了研究。首先比较了组织块法和酶消化法培养水牛胎儿成纤维细胞的差异;其次探讨丝裂霉素处理水牛胎儿成纤维细胞的有效时间;最后以建立的饲养层体系培养水牛胚胎生殖干细胞。结果表明：（1）组织块法培养的细胞状态优于酶消化法,组织块培养法更适于水牛胎儿成纤维细胞的分离培养;（2）第三代的水牛胎儿成纤维细胞核型正常,状态良好,可用于饲养层的制备;（3）通过MTT和Brdu法检测,确定10mg／L的丝裂霉素C处理水牛胎儿成纤维细胞3．5h能有效抑制成纤维细胞增殖且细胞形态良好;（4）在本试验条件下制备的饲养层能有效维持水牛胚胎生殖千细胞至8代。  相似文献   

水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨素芳  陈自洪  韦精卫  陆凤花  石德顺 《畜牧兽医学报》2009,40(12)

本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI)核移植效果的影响.采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法(Perivitelline Microinjection,PM)和WCICSI核移植效果.另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间.结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM(87.1%vs 81.1%,P＜0.05),虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM(49.5%vs 71.8%,P＜0.01),但囊胚率、核移植的效率无显著差异(P＞0.05).卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5～3 h,但3 h是最佳的作用时间.结果表明,(1)WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;(2)水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好.  相似文献   

水牛卵母细胞在不同培养液中成熟与凋亡的比较研究     

王晓丽  杨娟  张宗利  潘红平  成俊萍  石德顺 《畜牧与兽医》2009,41(2)

为了解卵母细胞体外成熟与凋亡过程,进而提高卵母细胞体外成熟率,本试验研究了在培养液中添加不同浓度的表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对水牛卵母细胞体外成熟和凋亡的影响。结果表明:(1)添加各种浓度的EGF(10,20,30,50,100 ng/mL)均可以提高水牛卵母细胞的成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,其中50 ng/mL EGF有显著影响(P<0.05);(2)添加各种浓度的IGF-1(10,30,50,100 ng/mL)均能提高水牛卵母细胞体外成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,以30 ng/mL效果明显(P<0.05);(3)添加20 ng/mL EGF+30ng/mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率和凋亡率分别高于和低于单独添加IGF-1和EGF组。  相似文献   

水牛Ghrelin基因的克隆与序列分析     

农微  谢体三  张新民  王晓丽  刘庆友  石德顺 《畜牧与兽医》2009,41(1)

根据GenBank中公布的牛、人等物种的Ghrelin核苷酸序列设计合成一对引物,以水牛皱胃组织总RNA为模板,采用RT-PCR法,扩增出Ghrelin成熟蛋白编码cDNA序列,将此扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明,扩增的水牛Ghre-lin基因编码序列长为351 bp,编码116个氨基酸。同源性分析表明,水牛Ghrelin基因与牛、人、猪、小鼠及绵羊基因相应序列的同源性分别为97%、79%、81%、75%和95%,氨基酸同源性与牛、羊、人、猪、小鼠分别为96%,94%,73%,76%和75%,说明Ghrelin是一组在进化上高度保守的蛋白质。水牛Ghrelin成熟蛋白cDNA的成功克隆,为进一步研究水牛Ghrelin基因结构、基因表达与调控奠定了基础。  相似文献   

激活素Activin A对猪卵母细胞胞质成熟的影响     

吉俊玲  吴正三  卞桂华  石德顺 《安徽农业科学》2012,40(1):213-214,232

[目的]探讨体外成熟过程中在培养液中添加激活素Activin A对猪卵母细胞胞质成熟的影响。[方法]在TCM-199中添加不同剂量Activin A的培养猪卵母细胞40 h,以激光共聚焦显微镜观察到的着色的线粒体排布形态类型来判断卵母细胞胞质是否成熟。[结果]当Activin A剂量为100 ng/ml时,胞质中线粒体呈弥散型分布形态的卵母细胞数目极显著增加(P0.01),同时线粒体呈圆周型排布与半周型排布的卵母细胞数目显著下降(P0.05)。[结论]猪卵母细胞体外成熟过程中在成熟培养液中添加激活素Activin A,能促进卵母细胞胞质的成熟。  相似文献   

水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王晓丽  杨娟  陈玉  成俊萍  潘红平  韦精卫  陆凤花  石德顺 《畜牧兽医学报》2009,40(9)

为了探讨水牛卵母细胞体外发育潜能与卵丘颗粒细胞凋亡之间的关系,本研究将水牛卵母细胞体外培养22～24 h后,取其卵丘颗粒细胞,采用Annexin V-FITC法进行颗粒细胞凋亡染色,进行凋亡率的分析,并与卵母细胞的成熟情况和卵母细胞的评分及形成卵裂、囊胚的结果进行对照.结果发现,随着卵母细胞成熟时间的增加,卵丘颗粒细胞凋亡率升高;随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,卵丘颗粒细胞凋亡率逐渐升高.由此表明,卵母细胞发育潜能与卵丘颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定卵丘颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.  相似文献   

牛体外受精胚胎的玻璃化冷冻及一步脱防冻剂的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

阳年生  文国艺  石德顺  谭世俭 《广西畜牧兽医》1999,15(3):3-5

在过去的１０年中,体外受精技术进展很快,目前已可以利用该技术在实验室内大批量生产牛胚胎。研究简单、有效的冷冻方法无疑会加速体外受精胚胎在生产中的推广应用。玻璃化冷冻法由于操作简便,可以快速冷冻胚胎而日益受到重视。过去的研究已证实,用２５％乙二醇＋２５...  相似文献