新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立     

魏家阳  李丽  王国康  徐英英  曾哲  罗青平  邵华斌  温国元  商雨  潘兹书 《动物医学进展》2023,(2):30-35

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统，根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物，扩增获得基因组片段，通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术，将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中，获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞，成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定，结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统，为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。  相似文献   

利用SSR分子标记鉴定“中丝2号”丝瓜杂交种纯度     

宋波  杨晓  刘高峰  郑胤建  卞中华  何莉梅  练华山  荆赞革  李清明  杨其长 《蔬菜》2023,(3):10-14

为了建立一套丝瓜种子纯度的快速鉴定方法，采用SSR分子标记对丝瓜杂交一代品种“中丝2号”的纯度进行鉴定，利用24对SSR引物对“中丝2号”丝瓜及其亲本的DNA进行扩增。结果表明：从24对引物中筛选出1对特异性引物ZS-SSR24，能够分别在“中丝2号”母本和父本中扩增出特异的2条多态性条带，大小分别为220 bp和250 bp,F1继承双亲的特异性条带，利用此标记能够鉴定出混在F1中的父本或母本。经田间鉴定，供试丝瓜种子纯度为91.3%，这与分子标记的结果完全吻合，故该标记能够用于“中丝2号”丝瓜品种的纯度鉴定。  相似文献   

芋ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）基因家族的克隆、生物信息学及表达分析          下载免费PDF全文

何芳练  刘莉莉  蒋慧萍  邱祖杨  黄诗宇  董伟清 《热带作物学报》2022,43(8):1554-1564

芋（Colocasia esculenta）为天南星科芋属成员,在世界范围内广泛种植,其球茎主要贮藏物质为淀粉。ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）是淀粉合成的第一个关键酶和限速酶,在植物淀粉合成中发挥关键作用,但目前关于芋AGPase基因家族的分子结构特征和表达模式还不清楚。本研究以芋新品种‘荔浦芋1号'为试材,从全长转录组注释信息中筛选到6个AGPase基因家族成员,利用RT-PCR技术克隆了6个基因的编码区,利用生物信息学对其理化性质、进化关系和保守motif进行分析;同时利用转录组学和荧光定量RT-PCR技术对6个基因在不同组织和球茎不同发育阶段的表达模式进行分析。结果表明：克隆获得6个芋AGPase基因编码区的cDNA序列,序列长度为1398~2028 bp,编码的蛋白大小为350~543 aa,其中4个基因（CeAGPL1~CeAGPL4）编码AGPase的大亚基,2个基因（CeAGPS1,CeAGPS2）编码AGPase的小亚基。系统进化分析显示,所有的AGPase分成了大亚基和小亚基2个群组,4个大亚基分在了大亚基组,2个小亚基分在了小亚基组。CeAGP家族蛋白分子质量范围为38 753.22~59 743.05 kDa,等电点范围为5.64~8.82,亚细胞定位为叶绿体、淀粉体和细胞质等。蛋白的保守motif分析发现,CeAGP家族蛋白共预测到11个保守motif,6个motif功能注释为NTP_transferase,除CeAGPS2外,另外5个CeAGP蛋白均包含11个motif。在不同组织中,6个CeAGP基因均能在所有组织中表达,其中CeAGPL3和CeAGPS1基因在叶片和叶柄中高表达,CeAGPL1和CeAGPS1基因在球茎中高表达,6个CeAGP基因在根的表达量均较低。在球茎不同发育阶段中,CeAGPL1和CeAGPS1高表达且均表现先升高后降低的趋势,2个基因分别在4月龄和5月龄阶段的表达量最高。该研究结果为后续阐明芋淀粉合成的分子机制提供依据。  相似文献   

复合乳酸菌和留茬高度对倒伏燕麦青贮品质调控研究     

蒋永梅  关皓  李海萍  汪辉  陈有军  贾志锋  刘文辉  陈仕勇  梁骥  周青平 《草地学报》2023,(12):3858-3866

为探究复合乳酸菌和留茬高度对倒伏燕麦青贮品质的影响和最佳调制手段，采用双因素试验设计，4个处理未接种复合乳酸菌，留茬高度为0 cm(H₁),15 cm(H₂),30 cm(H₃),45 cm(H₄);4个处理在留茬高度基础上分别接种等量复合乳酸菌，即为JH₁,JH₂,JH₃,JH₄。结果表明：青贮60 d后，接种复合乳酸菌降低青贮干物质损失、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维、pH、乙酸、氨态氮/总氮、丙酸含量，增加青贮干物质、可溶性碳水化合物、粗蛋白质和乳酸含量(P<0.05);青贮后未检测到霉菌、酵母菌、肠杆菌和丁酸；JH₄处理粗蛋白质最高、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、pH和丙酸含量最低。利用隶属函数法和主成分分析综合评价发现，JH₄处理(接种复合乳酸菌+留茬高度为45 cm)青贮品质最佳，是倒伏燕麦青贮品质调控的重要手段。  相似文献   

混播比例及乳酸菌剂对燕麦-饲用豌豆发酵TMR品质及瘤胃降解特性的影响     

张珈敏  关皓  李海萍  贾志锋  马祥  刘文辉  陈有军  陈仕勇  蒋永梅  甘丽  周青平  杨丽雪 《草业学报》2024,(1):169-181

为探究燕麦和饲用豌豆混播比例及乳酸菌剂对发酵全混合日粮（TMR）品质和瘤胃降解特性的影响，筛选出适宜制作发酵TMR的燕麦饲用豌豆混播比例，本试验将青海甜燕麦和青建一号饲用豌豆进行混播种植，混播比例为（燕麦∶饲用豌豆）0∶10,5∶5,6∶4,7∶3,8∶2,10∶0。在燕麦乳熟期和豌豆结荚期刈割后调制袋装发酵TMR，共设计12个处理，其中6个不接种乳酸菌，按照6个不同混播比例分别为C1、C2、C3、C4、C5、C6；另外6个处理在各比例基础上均匀加入混合乳酸菌（植物乳杆菌160∶短乳杆菌248∶戊糖乳杆菌260，比例为1∶1∶1，菌活：106 cfu·mL-1左右），即分别为I1、I2、I3、I4、I5、I6。所有处理按照饲草和农副7∶3的比例加入农副产品（青稞秸秆∶油菜秸秆∶油菜粕=1∶1∶1），实验室温度（20±5）℃下发酵60 d后对其营养成分、发酵品质及瘤胃降解特性进行测定。结果表明，随原料中燕麦比例的增加，中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量呈上升趋势，粗蛋白呈下降趋势，产气量呈下降趋势；添加混合乳酸菌显著降低了干物质损失（P<0.05）、pH和NH3-N/TN(P<0...  相似文献   

基于微卫星标记的瓯江唇鱼骨增殖放流效果评估          下载免费PDF全文

郭爱环  原居林  练青平  曹容玮  陈光美 《水产科技情报》2022,49(6):343-349

为评估瓯江唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨(Hemibarbus labeo)的增殖放流效果,利用已开发的10对微卫星引物,基于亲子鉴定技术,开展了瓯江增殖放流唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨对野生群体的资源贡献率评估。结果显示:28尾繁殖亲本群体和103尾回捕群体中共检出等位基因数(N_a)133个,单个位点等位基因数(N_a)、多态信息含量(PIC)、观测杂合度(H_o)和期望杂合度(H_e)的变化范围分别为7~19个、0.501~0.883、0.328~0.787和0.523~0.897,对应的平均值分别为13.3个、0.703、0.598和0.737,10对微卫星引物均表现为高度多态性,可用于后续亲缘关系鉴定。亲缘关系分析表明,在亲本性别未知的情况下,非亲排除率(NEP)范围为0.043～0.400,10座位累计非亲排除率(CEP)达到0.999 999 62。亲子鉴定结果表明,在回捕的103尾唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨个体中,3尾确认来源于增殖放流群体,由此推算出放流群体对野生群体的资源贡献率为2.91%。综合分析表明,瓯江唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨增殖放流具有一定的资源恢复效果。  相似文献   

抗病高产苦瓜新品种金田186及其 高效栽培技术     

欧阳丽莹  闫凯  张金容  脱飞飞  吴珊  阳洋  曹蔚旋  李春文  雷应才  练华山 《蔬菜》2023,(1):63-65

摘要：苦瓜新品种金田186是以QZ12·9为母本、GY-3QP19·23为父本配制而成的早熟苦瓜一代杂种，其 长势较旺，对霜霉病和白粉病抗性较强，丰产性高，耐贮运。经过多年试种和示范推广，总结出了早春苦 瓜套作花椰菜、结球甘蓝、大白菜和红皮萝卜等栽培模式，通过嫁接育苗，适宜的温、光、水、肥管理和 病虫害防治等技术措施，实现了苦瓜平均产量82.5 t/hm2 ，采收期恰逢苦瓜市场空白期，经济效益较好，产 值约18万元/hm2 。  相似文献   

外源GABA对盐胁迫下金花菜种子萌发及幼苗抗氧化能力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵嫚  陈仕勇  李亚萍  周青平  陈有军  常馨丹 《江苏农业学报》2021,37(2):310-316

以楚雄金花菜种子为研究材料,通过测定种子萌发特性、胚芽鲜质量、胚芽干质量、胚根鲜质量、胚根干质量、胚根长、超氧阴离子(O2·-)含量、过氧化氢(H2 O2)含量、丙二醛(MDA)含量以及抗氧化酶活性,研究外源GABA(γ-氨基丁酸)对盐胁迫下金花菜种子萌发及幼苗生长的影响.结果表明,0.5～2.0μmol/L GABA预处理提高了盐胁迫下金花菜种子的发芽势、活力指数,并显著缩短了平均萌发时间.100 mmol/L盐胁迫对幼苗胚芽鲜质量无影响,但显著降低了胚芽干质量、胚根干质量、胚根鲜质量及胚根长,而0.5～2.0μmol/L GABA预处理诱导了胚芽和胚根鲜质量、干质量及胚根长的增加.GABA预处理不同程度地提高了盐胁迫下金花菜幼苗超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性,降低了O2·-、H2O2以及MDA含量.GABA能够激活抗氧化酶活性,降低盐胁迫诱导的氧化伤害和膜损伤,改善了金花菜在种子萌发阶段的抗盐性,且在0.5～2.0μmol/L浓度范围内均有效果.  相似文献   

生育期和混播比例对四川冬闲田燕麦/箭筈豌豆混合青贮品质的影响     

甘丽  李海萍  汪辉  陈有军  陈仕勇  蒋永梅  张珈敏  梁骥  关皓  周青平 《草地学报》2023,(6):1867-1877

为探究四川冬闲田燕麦/箭筈豌豆混合青贮适宜的生育期及混播混贮比例，本试验以‘贝勒’燕麦(Avena sativa)和‘川北’箭筈豌豆(Vicia sativa)为原料，设置1∶0(T1),3∶1(T2),1∶1(T3),1∶3(T4),0∶1(T5)5个混播比例，在燕麦抽穗期/箭筈豌豆开花期、燕麦开花期/箭筈豌豆结荚前期、燕麦乳熟期/箭筈豌豆结荚后期刈割并混合青贮，青贮60 d取样分析。结果表明，在3个生育期中，燕麦抽穗期/箭筈豌豆开花期混合青贮的pH、氨态氮/总氮比值最低(P<0.05),燕麦开花期/箭筈豌豆结荚前期混合青贮的乳酸、乙酸含量最高；在5个混播比例中，T4较T1,T2,T3的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和淀粉含量更低、粗蛋白含量更高；T4组pH、氨态氮/总氮比值低于各比例，乳酸含量高于T1,T2,T5组。因此，在四川冬闲田于燕麦开花期/箭筈豌豆结荚前期刈割，以燕麦/箭筈豌豆1∶3比例混播混贮其青贮品质最优。  相似文献   

鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用     

马瑶  汪宏才  唐晟  姚伦  曾哲  罗青平  曾驰  商雨  温国元 《中国兽医学报》2023,(10):2042-2049

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus, NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)变异而来，可感染雏鸭，引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发，严重影响鸭出栏率，给我国的养殖行业带来巨大的经济损失。为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法，用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测，本研究利用生物信息学预测了NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位，选择了抗原富集区域(aa250～525)进行原核表达，经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr。以VP3-tr为包被抗原，经过棋盘滴定方法优化各个反应条件，建立了NGPV抗体的间接ELISA检测方法。利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测，确定阴阳性临界值为0.219。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明，该方法灵敏度较高，特异性良好，不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应；批内和批间重复试验的变异系数均小于6%,重...  相似文献