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以马立克氏病病毒（MDV）CVI988株基因组为模板,利用PCR技术扩增出约2.7和3.0 kb的基因片段,将上述片段同时插入pUC19中,获得约5.5 kb MDV同源重组臂;以该基因片段的US2区的BglⅡ为插入位点,分别插入基因表达盒CMV-gpt-ployA和CMV-gfp-polyA,构建转移载体pUS-gpt-GFP,将该载体瞬时转染CHO细胞,在荧光显微镜下,可以观察到绿色荧光蛋白的表达;将该转移载体转染已用MDV CVI998株感染的次代CEF细胞,利用MX-HAT培养基筛选重组病毒,并用荧光显微镜挑选表达绿色荧光蛋白的蚀斑,结果获得重组病毒rMDVgptGFP。通过PCR检测和病毒生长测定,证明重组病毒获得纯化。 相似文献
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本研究评估了枝原淨～产品(活性成分:延胡索酸泰妙菌素)治疗由胞内劳森菌引起的猪增生性肠炎(porcineproliferative enteropathy,PPE)的临床效果。枝原淨～用药组(拌料或饮水)与感染不用药组比较,投药14 d后,粪便中胞内劳森菌的PCR检出率显著降低;健康状况、饲料转化率和平均日增重得到有效提高;免疫组化检测结果表明枝原淨～用药组未检出阳性猪。组织病理学观察显示,用药组的猪呈现较轻的回肠腺上皮增生(PPE的典型病变)或无腺上皮增生,而对照组的猪回肠腺上皮显著增生,说明枝原淨～能有效抑制回肠出现PPE的典型组织病变。结果表明,枝原淨～均能有效抑制胞内劳森菌感染并控制猪增生性肠炎,进而有效提高饲料报酬。 相似文献
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用RT-PCR方法扩增了H9N2亚型猪流感病毒河南株(Swine/Henar/Y1/09)和H9N2亚型猪流感病毒上海株(Swine/Shanghai/Y1/09)的8个基因片段,进行测序分析.结果表明,这两株猪流感病毒HA基因长度均为1701 bp,编码566个氨基酸,HA切割位点序列均为R-S-S-R-G,属非高致病性毒株;这两个毒株的HA蛋白均有8个潜在的糖基化住点.两个分离株的NA基因长度为1401 bp,编码467个氨基酸,这两个毒株均在茎区63、64、65位发生氨基酸缺失.两株猪流感病毒HA基因的同源性为96.6％,NA基因的同源性为98.6％.两株毒株的8个基因片段系统发生树分析表明它们均为重组体,与2008年上海地区健康鸡群中分离的H9N2亚型毒株(Ck/Shanghai/Y 1/2008)8个基因片段均分别属于同一个基因群. 相似文献
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猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒( Feline infectious peritonitis virus , FIPV )引起的猫科动物的一种慢性、渐进性、致死性传染病,以腹膜炎、大量腹水积聚及致死率较高为主要特征[1]。该病不同年龄的猫均易感,多发于4 岁以下年轻成猫,纯种猫发病率高于一般家猫。本病的潜伏期长短不一,各种应激条件以及感染猫的自身疾病和猫免疫缺陷病等都是促使FIP发病的重要因素。该病呈地方流行性,发病率低,但一旦出现临床症状,致死率几乎为100%。笔者从临床症状、血常规检查、X 光影像学以及分子生物学诊断等方面对一例猫渗出性传染性腹膜炎病例报告如下,以期对该病的诊治提供参考。1 临床病例患猫品种为英国短毛猫,雌性,8月龄,体重2.1 kg 。食欲正常,体温40.6 ℃,大小便正常。腹部膨大、腹部触诊有明显的水样波动;抽取腹水,呈淡黄色黏稠样液体。 相似文献
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本研究对2016年3月~2017年3月采集于上海市猪场的20份病料进行了病原体检测,并对检测到的圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)进行了全基因分析。检测结果显示:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)阳性病料1份,而猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)均为阴性;PCV3阳性病料2份,其中1份为PCV3和PRRSV混合感染。对这2株PCV3进行全基因测序和Blast分析,并绘制PCV3全基因、囊膜蛋白基因的遗传进化树,结果显示:与这2株病毒基因同源性最高的毒株为CN/Hubei-618/2016,同源性为99%;在全基因进化树中,这2株毒株和中国来源的PCV3毒株以及美国毒株PCV3/USA/MO2015(Gen Bank登录号:KX778720.1)在同一群中;在囊膜蛋白基因的进化树中,这2株PCV3属于PCV3a。 相似文献
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食源性沙门氏菌快速检测技术的应用研究 总被引：4，自引：0，他引：4
通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检验方法,了解上海地区沙门氏菌 污染情况.在免疫胶体金技术、单抗直接ELISA、PCR法检测沙门氏菌的基础上,将 PCR法和单抗直接ELISA三种快速检测方法进行比较研究.用免疫胶体金技术、直接E LISA、PCR法对鸡蛋、水样、牛奶、猪肉、牛肉、虾仁等样品401份进行沙门氏菌检测,并与 常规国标方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.3%,免疫胶体金技术敏感 性和特异性达100%和95.3%,PCR法的敏感性和特异性均为100%.通过对样品的检测, 最终确定较优化的沙门氏菌检测程序.PCR法的特异性优于免疫胶体金技术和直接ELISA法.对大量样品检测,可采用免疫胶体金技术或直接ELISA法筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标法. 相似文献
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为建立检测可疑病料中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的方法,针对App的RTX毒素(ApxⅣA毒素)毒力基因长约449 bp的片段设计引物,以App 10个血清型的基因组分别作为模板,对PCR扩增条件进行优化筛选,并进行了特异性及重复性试验。对副猪嗜血杆菌、马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌的扩增结果为阴性,表明该PCR方法特异性强,建立了该菌的种属特异性PCR方法。以筛选出的优化条件,对22份临床可疑病料进行了检测。结果表明,建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感,优于传统的细菌学方法,可作为App可疑病料的检测方法。 相似文献
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为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2～4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明：3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。 相似文献