传染性法氏囊病病毒超强毒GZ株VP2基因的克隆和序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

王笑梅  许信刚  宋秀龙  童光志  李健强 《中国兽医学报》2001,21(5):421-424

根据已发表的传染性法氏囊病病毒（IBDV）52/70株基因组序列，设计并合成了1对特异扩增IBDV VP2基因的引物。以IBDV超强毒（vvIBDV)GZ株基因组为模板，利用PT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物，将VP2基因克隆于pUC119质粒上，得到重组pUC119质粒。对VP2基因全序列进行了测定。序列分析和聚类分析表明，GZ株与欧洲超强毒株UK661非常相似，而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。  相似文献   

核酸疫苗的研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

许信刚  李健强 《畜禽业》2001,(8):16-17

传统疫苗是基于抗原刺激机体产生特异性抗体的原理，它们大多数激发机体的体液免疫，很难启动细胞免疫。而核酸疫苗是将外源基因与真核质粒重组后直接导入细胞内，使外源基因在宿主细胞内表达合成保护性抗原蛋白。这是模拟病毒自然感染提呈过程，这既能产生细胞免疫，又能产生体液免疫。本文就核酸疫苗的构成、特点、影响免疫效果的因素、研究进展及其存在的问题和展望作一综述。  相似文献   

猪瘟病毒p80基因丝氨酸蛋白酶功能区的原核表达及小鼠免疫试验          下载免费PDF全文

鲁絮  许信刚  张彦明  张淼涛  李少方 《西北农业学报》2007,16(6):14-18

根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。  相似文献   

观赏金鱼豚鼠气单胞菌的分离鉴定及防治   总被引：5，自引：0，他引：5       下载免费PDF全文

许信刚  伊岚  王高学 《西北农业学报》2006,15(1):40-42

从陕西省某观赏鱼养殖场发生出血病的金鱼中分离到一株细菌,通过培养特性、菌体形态、菌落特征、染色特性、生化试验等一系列的系统鉴定,确定为豚鼠气单胞菌。动物致病性试验表明,该菌对小白鼠和金鱼有较强的致病性,可引起其死亡。药敏试验证明该菌对四环素、庆大霉素、氯霉素等高度敏感,对氟哌酸、链霉素等中度敏感,对红霉素、青霉素等不敏感。通过药敏试验选用有效抗生素,有效地控制了该病的流行。  相似文献   

猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用     

曹伟伟  郭抗抗  许信刚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2013,41(1):13-18

【目的】建立一种能在临床上快速、准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)的TaqMan实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中已公布的PCV-2陕西分离株的全基因序列,在PCV-2的ORF2核苷酸序列的保守区域,设计合成1条TaqMan探针和1对特异性引物;利用设计的引物扩增ORF2部分基因并鉴定后,回收PCR扩增产物,连接pMD19-T载体,转化DH5α大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定后提取质粒,作为荧光定量PCR的标准品;以标准品为模板建立检测PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量方法对56份临床样品进行检测,并将检测结果与传统PCR方法进行比较。【结果】建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线的斜率为-3.383,R2=0.998,具有良好的线性关系;重复性试验结果表明,该方法循环数阈值Ct的变异系数(CV)为0.86%～1.02%,具有良好的稳定性;敏感性检测结果表明,该方法的最低检测限度为5.06copies/μL;特异性检测结果显示,该方法对猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,对PCV-2标准品的检测结果为阳性,说明该方法具有较好的特异性。临床样品的检测中,所建立的Taq-Man实时荧光定量PCR检测方法的检出阳性率较传统PCR方法高14.3%。【结论】成功建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,该方法可用于临床上对PCV-2的检测。  相似文献   

致羔羊腹泻大肠埃希茵的分离鉴定及防治     

安俊卿  任志宏  刘晓倩  郭建军  张晨瑜  张新  罗小花  张耀相  许信刚 《畜牧兽医杂志》2013,32(1):8-10

从陕西省某羊场发生腹泻羔羊的肝脏和脾脏分离到一株细菌,通过培养特性、茵体形态、菌落特征、染色特性、生化试验等一系列的系统鉴定,确定为致病性大肠埃希菌。动物致病性试验表明,该菌对小白鼠有较强的致病性,引起其死亡。毒素试验表明,分离菌产生致小白鼠死亡的外毒素。血清学鉴定该茵血清型为O114。药敏试验表明,该茵对大观霉素、头孢噻肟等高度敏感,对米诺环素、克林霉素、克拉霉素等不敏感。分离茵制成铝胶佐剂灭活苗免疫羊群,能有效的预防该羊场羔羊腹泻的发生。  相似文献   

山羊支原体山羊肺炎亚种0297基因的序列分析及原核表达     

黄加利  任杰  王理想  尹峥  徐滢  许信刚  张淑霞 《动物医学进展》2019,40(9)

  相似文献   

日本脑炎病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展     

张宽  陈光达  许信刚  童德文 《动物医学进展》2011,32(5):108-112

日本脑炎病毒(JEV)是虫媒传染性病毒,感染动物后会产生严重的脑炎症状,严重威胁着公共卫生安全.病毒粒子主要通过胞吞作用进入宿主细胞,在细胞浆复制,在细胞内部膜结构上成熟.JEV侵入神经细胞引起脑炎症状,其机理可能与JEV诱导细胞凋亡有关.目前,研究人员就有关JEV诱导细胞凋亡信号转导途径方面做了大量研究工作.在被JE...  相似文献   

PRRSV陕西分离株ORF3基因的克隆、序列分析及原核表达载体的构建     

张琦  王菡  黎径  梁靓  许信刚 《西北农业学报》2010,19(10):21-26

根据GenBank公布的PRRSVORF3基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株ORF3基因,将其克隆入pGEM-T载体中,测序并进行序列分析。再将ORF3基因亚克隆入pET-32a中,构建原核表达载体。结果扩增到765 bp的PRRSV全长ORF3基因,序列分析结果表明,分离株与SY0608亲缘关系较近,而与CH-2、HB-2关系较远。重组原核表达质粒经酶切鉴定正确后命名为pET-GP3,为进一步研究GP3蛋白的原核表达、免疫特性、结构与功能奠定了基础。  相似文献   

《兽医微生物学》实验课教学改革与实践   总被引：1，自引：0，他引：1  

许信刚  邢福珊  张耀相 《畜牧兽医杂志》2010,29(5):55-57,60

《兽医微生物学》是实践性和应用性都很强的一门学科,实验课教学是理论与实践相结合的纽带,是提高教学质量、实现素质教育和创新人才培养目标的重要教学环节。针对传统兽医微生物学实验教学中存在的问题,通过重视实验教学、提高教师素质、改变实验教学内容和方法、鼓励学生参加实验准备工作、倡导学生参与科研项目等一系列改革措施,极大地提高了学生的实验技能和学习兴趣,教学质量取得显著的效果。  相似文献