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猪瘟病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
以猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)标准强毒石门株为模板,RT-PCR扩增CSFV E2基因N端的主要抗原区(△E2).PCR产物定向克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-AE2,转化Eacterium coli BL21-Codonplus(DE3),IPTG诱导重组△E2蛋白表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白的正确表达.KCl预染切胶法纯化△E2蛋白,以其为包被抗原,通过反应条件的优化,建立了CSFV抗体ELISA检测方法.用该方法对331份临床血清进行检测,并与IDEXX公司阻断ELISA试剂盒进行了相符性验证,符合率为74%.为研制猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础. 相似文献
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【目的】 试验旨在构建一种基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)嵌合疫苗,并对其免疫效力进行评估。【方法】 利用反向遗传学技术,以含有禽偏禽腮腺炎病毒2型(Avian metaavulavirus-2,AMAV-2) Y2株基因组的重组质粒pT7-Y2为模板,将Y2株的F和HN蛋白的胞外区替换为基因Ⅶ型NDV HB0901株的F和HN蛋白的胞外区,将HB0901株的F蛋白裂解位点突变为LaSota弱毒株的F蛋白裂解位点,构建嵌合重组病毒rY2-FHNR株。对rY2-FHNR株的增殖特性、致病力及遗传稳定性等生物学特性进行检测,并通过接种2周龄SPF鸡评估rY2-FHNR株的免疫原性及其免疫血清与Y2株的交叉反应性,利用NDV NP蛋白的间接ELISA方法对免疫血清进行检测,验证其鉴别诊断效果。【结果】 试验成功获得了嵌合重组病毒rY2-FHNR株,生物学特性检测结果显示,rY2-FHNR株在鸡胚中的增殖滴度和致病性符合弱毒特征,其鸡胚传代的遗传稳定性良好。rY2-FHNR株可诱导机体产生针对NDV的抗体,且免疫血清不与rY2株抗原发生交叉反应。通过NDV NP ELISA抗体检测方法可以实现区分疫苗免疫与野毒感染。【结论】 本试验研发了一种基因Ⅶ型NDV嵌合候选疫苗,为基因Ⅶ型NDV的监测、防控和净化提供了技术支撑。 相似文献
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张腾飞;詹丽超;罗玲;罗青平;艾地云;张蓉蓉;邵华斌 《湖北畜牧兽医》2013,(9):8-10
根据弯曲杆菌属细菌细胞致死性膨胀毒素cdtABC操纵子核酸序列,针对cdtA、cdtB、cdtC设计并合成了3对特异性引物,用于建立空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌和弯曲杆菌属细菌的多重PCR检测方法。试验证明,建立的多重PCR检测方法能鉴定弯曲杆菌属细菌,并区分出空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。该方法具有较好的特异性与敏感性,适合在实验室对弯曲杆菌进行检测与鉴定。 相似文献
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粘膜免疫已成为当前生物医药研究领域的又一热点。作为粘膜免疫主要防御因子的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)备受研究人员的重视。近些年,随着家禽粘膜免疫的深入开展,围绕鸡sIgA的各类研究也逐渐开展起来。家禽粘膜系统由胃肠道、呼吸道及某些外分泌腺(如哈德氏腺、盲肠扁桃体)等粘膜相关淋巴组织构成。家禽粘膜免疫主要通过sIgA来发挥作用。在粘膜表面大量存在的sIgA是第一道免疫防线,sIgA抗体可通过阻碍粘膜与细菌和病毒的接触,从而给粘膜表面提供特异的免疫屏障,同时在穿越上皮时,在上皮细胞内显示其抗病原微生物的能力,清除感染。但鸡… 相似文献
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今年入夏以来,我国华南、华中、华东等大部分省区先后受到洪水灾害,给肉鸡产业带来较大威胁。为尽量减少损失,保证我国肉鸡业健康发展,特从汛前、 相似文献
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湖北省部分地区鸭致病性大肠杆菌的分离与血清型鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
鸭大肠杆菌病是一种急性败血性传染病,因而又名鸭大肠杆菌败血病[1].该病在临床剖检上主要表现为纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎.各种年龄的鸭均可感染,雏鸭最易感,2~6周龄多发,发病率和死亡率较高,在商品肉鸭中死亡率可高达50%左右,而且常常与鸭传染性浆膜炎混合感染,成年鸭和种鸭主要表现为零星死亡.随着养鸭业的日益发展和集约化程度的提高,鸭大肠杆菌病的发生日趋严重,给养鸭业造成了严重的经济损失[2].为弄清湖北省鸭场大肠杆菌病的流行情况及其致病性菌株的优势血清型、致病力等特点,我们对湖北省部分地区鸭场的大肠杆菌进行了分离与鉴定,并对分离株进行血清型鉴定和动物致病力试验,以便筛选出致病性大肠杆菌的优势血清型,从而为今后进一步制备灭活疫苗预防本地的大肠杆菌病提供科学依据. 相似文献
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2005年2月,湖北省某种鸡场40周龄产蛋鸡开始时出现呼吸道症状,3~5 d后产蛋下降10%,解剖发现肠道出血,疑似新城疫感染,用5倍量ND弱毒疫苗饮水免疫,2周后鸡群出现死亡,部分鸡出现神经症状,取病鸡脑组织做病原分离,接种10龄鸡胚,72~96 h后收获鸡胚尿囊液,测定血凝效价(HA)达1∶256以上,经对鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)等生物学特性试验表明,鸡脑组织分离的病毒为一株新城疫弱毒. 相似文献