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为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27基因的重组慢病毒。将慢病毒上清感染293T和LMH细胞,检测细胞中p27基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示:重组质粒pLVX-p27构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×104TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高。研究表明:表达p27基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具。 相似文献
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抗禽流感病毒H5亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制 总被引：18，自引：0，他引：18
以禽流感H5亚型病毒免疫Ballb/c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验检测细胞培养上清，结果获得3株阳性细胞株，分别命名为4B6、4A3、3H1。经2次亚克隆后，100％杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒H5亚型抗体的能力。实验证明，所有这3株单克隆抗体仅与试验的H5病毒株反应，而不能与禽流感H9亚型病毒、鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒和鹅腺病毒等反应。间接免疫荧光试验检测结果表明这3株单克隆细胞的培养上清均能与感染H5亚型病毒的成纤维细胞呈现亮绿色荧光。 相似文献
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《兽医微生物学》研究型教学模式的探讨 总被引：1，自引：0，他引：1
研究型教学是指教师以课程内容和学生的知识为基础,以学生为中心,从学生个体出发,以人为本,调动学生的主观能动性,引导学生创造性的运用知识,自主的发现问题、分析问题和解决问题,在讨论中学习知识、培养能力和锻炼创新思维的新型教学模式[1-4].该教学模式已在全国各高等院校广泛推广.《兽医微生物学》是公认的动物医学专业的核心专业基础课,学好该门课程可以提高学生对动物医学专业的兴趣,同时为其他专业课程的学习奠定牢固基础.传统讲授式的教学模式有利于知识的系统学习,但是忽略了学生对科学现象的探索过程,学生只能被动地接受知识,并不了解理论知识是在何种情况下被发现和研究的.还忽略了对学生提出问题,分析问题,解决问题能力的锻炼,更缺少创新能力的培养[2,3]. 相似文献
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J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白Env被认为与其致病致瘤密切相关,然其分子基础尚不清楚.在Env胞浆区发现免疫及肿瘤疾病发生相关的酪氨酸基序(YxxM、ITIM、类ITAM)基础上,研究对GenBank中不同ALV-J毒株Env进行了统计分析.结果发现,34.7％ ALV-J毒株Env仅存在ITIM,63.9％ALV-J毒株Env同时具有ITIM以及YxxM,1.4％ ALV-J毒株Env具有YxxM以及类ITAM.同时,还构建了JS-NT以及4817毒株Env相应酪氨酸变体表达质粒,并在DF1细胞中获得了良好的表达.这些发现及构建的表达质粒,为进一步研究ALV-J Env在ALV-J致病致瘤中的作用及其分子机理奠定了基础. 相似文献
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为构建鸡高迁移率族蛋白B1(Chicken high mobility group B1 protein,chHMGB1)真核表达载体,并在真核细胞中进行暂态表达和鉴定。研究酶切回收含有鸡高迁移率族蛋白全长基因的PGEM-chHMGB1质粒,将chHMGB1全长与pcDNA3.1(+)载体连接构建pcDNA-chHMGB1全长重组表达质粒。将其质粒采用脂质体转染293T细胞,进行暂态表达,利用Western blotting和间接免疫荧光法对表达的蛋白进行鉴定。结果显示,pcDNA-chHMGB1重组表达质粒克隆片段大小正确,瞬时转染293T细胞,Western blotting在细胞浆和培养上清中同时检测到相对分子量约为30 ku的目的条带;利用chHMGB1特异性抗体进行IFA试验可以检测到目的蛋白的表达。本研究成功构建了鸡高迁移率族蛋白B1的真核表达载体pcDNA-chHMGB1,并且在真核细胞中得以有效表达,从而为进一步研究chHMGB1蛋白的生物学功能提供生物材料。 相似文献
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银杏外种皮多糖抑制J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞中的复制 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究银杏外种皮多糖抑制J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)复制的能力,在不同时间点加入银杏外种皮多糖处理DF-1细胞,利用q RT-PCR、免疫蛋白印迹以及病毒滴度检测等方法,观察银杏外种皮多糖对ALV-J复制的影响,结果表明银杏外种皮多糖就能够显著地抑制病毒基因表达、蛋白合成以及病毒在细胞内的增殖,并且这种抑制作用具有时间和剂量依赖性。同时银杏外种皮多糖处理还明显抑制病毒感染细胞中的IL-1β、TNFα等细胞因子的表达。银杏外种皮多糖在DF-1细胞中具有抑制ALV-J复制的能力,具有作为抗ALV-J药物的潜力。 相似文献
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构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p15基因慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞系(LMH)中的表达情况,以探讨p15基因对病毒复制、免疫信号通路的影响。以真核表达质粒pCAGGS-p15为模板扩增p15全长基因,经双酶切后克隆到慢病毒载体plvx-IRES-ZsGreen1上,构建成plvx-p15-Flag慢病毒表达质粒,将该质粒与辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,将细胞上清中的病毒感染LMH细胞,检测p15蛋白表达情况。慢病毒载体在293T细胞上包装完成后,病毒滴度为2.25×105 TU/mL。慢病毒感染LMH细胞,基因和蛋白水平检测结果表明,p15蛋白表达良好。表达ALV p15基因的慢病毒包装成功,并且能够感染鸡源LMH细胞。该载体的构建为进一步研究p15蛋白的生物学功能提供工具。 相似文献
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