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为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本。 相似文献
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在毕赤酵母中表达猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus, HEV)67N株S蛋白片段,经镍离子亲和层析纯化后,四次免疫家兔,获得兔抗HEV-S蛋白特异性抗体;提取PK细胞膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,转印NC膜,以纯化的S1蛋白代替病毒,利用改进的病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)对PK细胞膜受体进行鉴定,结果发现在大约90kDa处有清晰的蛋白带,推测该蛋白可能是HEV感染PK细胞的结合位点。该结果为深入研究血凝性脑脊髓炎病毒的致病机制奠定理论基础。 相似文献
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冠状病毒科都是RNA病毒,感染多种禽类和哺乳动物。分为冠状病毒属和环曲病毒属,这两个属在形态学、基因组和基因表达上有相似性。冠状病毒属具有感染性单股RNA分子,长度为20~30kb。病毒有囊膜,呈多形性,直径为80~220nm,囊膜上有棒状突起,长约20nm。其已知的三种主要的结构蛋白:S糖蛋白90~180kDa,M蛋白20~35kDa,N蛋白50~60kDa,除此之外,一些冠状病毒还包括第四种主要结构蛋白,即血凝素-酯酶(HE)蛋白120~140kDa。根据冠状病毒抗原性的不同,通过血清学分析及核苷酸序列分析,冠状病毒分为三个主要的抗原组。人的冠状病毒(HCV)229E… 相似文献
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鸡舍卫生的好坏,直接影响蛋鸡的产蛋率,从而影响养鸡效益。如果鸡舍内空气污浊,粪便堆积,蚊蝇多,有害气体刺眼鼻,将导致鸡产蛋率低、抗病力差、药费开支大,造成养鸡效益低下。下面两户就是典型实例。藁城市河西营村养鸡户蒋×,饲养蛋鸡1000只,160日龄产蛋率达到90%,190日龄产蛋率上升到96%。鸡舍内通风好,无异味,鸡只有精神、无病态。蒋×平时注意搞好饲养管理,鸡舍卫生,定期带鸡消毒。坚持每两天清粪一次,鸡舍通风口安装窗纱,以防蚊蝇飞入。在气温达32℃以上时,每天下午2时左右给鸡舍喷洒凉水。由于鸡… 相似文献
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为研究恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)3D7株AP核酸内切酶(AP endonuclease)的功能,通过PCR的方法扩增PF3D7_0305600(292~1 137 bp),构建克隆载体。测序正确后,将该片段插入到pET-28a和p GEX-4T-1,构建重组表达载体p ET-28a-Ae、p GEX-4T-1-Ae。将表达载体转入BL21-Codon Plus表达重组蛋白r-Ae-His和r-Ae-GST,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,r-Ae-His免疫家兔制备多克隆抗体,并用ELISA检测抗血清效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明:表达的r-Ae-His分子量约为39 ku,r-Ae-GST分子量约为60 ku。制备的多克隆抗体能够特异性地识别天然蛋白,可用于恶性疟原虫3D7株AP核酸内切酶的后续研究。 相似文献
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猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定.用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1:2 000稀释,单抗1:4 000稀释,酶标抗体为1:4 000稀释.特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75 mg/L.与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致.上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献