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冠状病毒科都是RNA病毒,感染多种禽类和哺乳动物。分为冠状病毒属和环曲病毒属,这两个属在形态学、基因组和基因表达上有相似性。冠状病毒属具有感染性单股RNA分子,长度为20~30kb。病毒有囊膜,呈多形性,直径为80~220nm,囊膜上有棒状突起,长约20nm。其已知的三种主要的结构蛋白:S糖蛋白90~180kDa,M蛋白20~35kDa,N蛋白50~60kDa,除此之外,一些冠状病毒还包括第四种主要结构蛋白,即血凝素-酯酶(HE)蛋白120~140kDa。根据冠状病毒抗原性的不同,通过血清学分析及核苷酸序列分析,冠状病毒分为三个主要的抗原组。人的冠状病毒(HCV)229E… 相似文献
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为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本。 相似文献
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在毕赤酵母中表达猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus, HEV)67N株S蛋白片段,经镍离子亲和层析纯化后,四次免疫家兔,获得兔抗HEV-S蛋白特异性抗体;提取PK细胞膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,转印NC膜,以纯化的S1蛋白代替病毒,利用改进的病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)对PK细胞膜受体进行鉴定,结果发现在大约90kDa处有清晰的蛋白带,推测该蛋白可能是HEV感染PK细胞的结合位点。该结果为深入研究血凝性脑脊髓炎病毒的致病机制奠定理论基础。 相似文献
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利用光学显微镜观察、间接免疫荧光(IFA)、Real-time PCR和病毒感染滴度(TCID50)等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV-67N)在猪肾上皮传代细胞系(PK-15细胞)上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50(104.37)/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32~48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32~48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。 相似文献
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猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定.用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1:2 000稀释,单抗1:4 000稀释,酶标抗体为1:4 000稀释.特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75 mg/L.与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致.上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献
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鸡舍卫生的好坏,直接影响蛋鸡的产蛋率,从而影响养鸡效益。如果鸡舍内空气污浊,粪便堆积,蚊蝇多,有害气体刺眼鼻,将导致鸡产蛋率低、抗病力差、药费开支大,造成养鸡效益低下。下面两户就是典型实例。藁城市河西营村养鸡户蒋×,饲养蛋鸡1000只,160日龄产蛋率达到90%,190日龄产蛋率上升到96%。鸡舍内通风好,无异味,鸡只有精神、无病态。蒋×平时注意搞好饲养管理,鸡舍卫生,定期带鸡消毒。坚持每两天清粪一次,鸡舍通风口安装窗纱,以防蚊蝇飞入。在气温达32℃以上时,每天下午2时左右给鸡舍喷洒凉水。由于鸡… 相似文献