通过病毒分离鉴定和基因检测首次发现虎流感   总被引：21，自引：1，他引：20  

夏咸柱  高玉伟  扈荣良  王立刚  刘丹  邹啸环  黄耕  贺文琦  王玮  苏伟林  刘文良 《中国兽医学报》2003,23(2):107-110

应用F81猫肾传代细胞，从高热、拒食和间有神经症状的死亡率病科中分离获得1株病毒，经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定，证明为流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物，对分离病毒及该虎病科进行RT－PCR扩增和序列分析，结果从分离病毒和虎病科中均扩增出与理论值大小相符的464bp基因片段；其序列与A、B、C3型流感病毒相比较，同源性分别为84．9％、35．0％、24．8％。由此说明，所分离病毒为A型流感病毒，命名为/蘧／哈尔滨（中国）／01／2002。用此分离病毒静脉接种于3月龄家猫3号，均出现与病虎相似的临床症状，其中1号耐过，2只死亡。死亡猫剖检变化与死虎相似，主要是呈肺炎病变，并可从病科中回收到所接种病毒。从此分离病毒为HA抗原，进行虎与猫血清的HI抗体检测，结果康复虎血清比其病初血清、康复猫血清比其接种前血清HI抗体均增高4倍以上，表明该病毒具有致病性，是引起该虎与试验猫发病甚至死亡的病原。  相似文献   

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查   总被引：11，自引：0，他引：11  

贺文琦陆慧君  耿百成宋德光  姜宁Hirano N 高丰 《中国兽医科技》2005,35(9):739-741

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）抗体。结果，212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应，阳性率高达44．3％。被采集血清的猪未表现临床症状，说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。  相似文献   

1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定   总被引：1，自引：1，他引：1  

贺文琦  陆慧君  宋德光  陈艳玲  李志萍  周玉  常灵竹  高丰 《中国兽医学报》2007,27(6):781-784

利用细胞培养方法从临床表现神经症状的死亡仔猪脑组织内分离获得1株病毒,同时对该病毒进行电镜负染观察、昆明种小鼠致病性试验、RT-PCR检测和部分基因测序分析。电镜观察可见细胞培养物中有大量的直径约115 nm的冠状病毒样粒子;接种病毒的小鼠均出现典型的神经症状,死亡率100%;血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)特异性引物RT-PCR扩增结果阳性;其S基因序列与GenBank中登录的HEV-67 N相应基因序列的同源性高达99.6%。结果表明,分离的病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒,分离株暂命名为HEV-CC-2007。  相似文献   

应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

王雷  夏咸柱  卫广森  户荣良  邹啸环  黄耕  高玉伟  贺文琦 《畜牧与兽医》2003,35(4):4-6

为消除粪便等病料中的PCR干扰物质 ,提高犬腺病毒与细小病毒 (CAV CPV)联合PCR检出率。根据免疫吸附的原理 ,应用CAV CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌 ,制成致敏SPA菌体免疫吸附剂 ;以此免疫吸附提取粪便等病料中的CAV/CPV ,然后直接或经 3 5mol/LMgCl2 将所吸附病毒洗脱后再做PCR。结果 8份经电镜负染或HA/HI试验验证为阳性的粪便样品 ,如此处理后进行PCR检测 ,结果均为阳性 ;而直接取粪便离心后用上清进行PCR检测 ,结果均为阴性。表明该法可有效去除待检样品中的PCR干扰物质 ,提高PCR的检出率。  相似文献   

羊传染性脓疱病毒趋化因子结合蛋白（CBP）基因的克隆及表达分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

王改丽  赵魁  兰云刚  贺文琦  陆慧君  解胜男  苏高莉  张冰冰  宋德光  高丰 《中国兽医学报》2011,31(8):1114-1117

参照GenBank中ORFV的毒力因子CBP基因的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,采用PCR方法扩增该基因片段,并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切鉴定和测序正确后,转入E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,经IPTG进行诱导表达,并通过生物信息学软件进行分析。SDS-PAGE结果可见大小...  相似文献   

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及山东省猪血清抗体检测分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘立卓  赵家宽  贺文琦 《中国兽医学报》2014,(5):685-689

首先应用血凝抑制试验(HI)对从山东省部分地区采集的178份猪血清样品进行了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体检测。结果显示,这些猪群中HEV的HI抗体总体阳性率高达61.24%(109/178),说明HEV的感染较为普遍。同时,以纯化的病毒作为包被抗原,通过优化反应条件,成功建立了HEV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。应用该ELISA方法对从山东地区猪血清中随机抽取的44份样品进行检测,结果显示,HEV抗体阳性率为72.73%(32/44);而HI抗体阳性率为56.82%(25/44)。两种检测方法的阳性符合率为92.00%。结果表明,建立的ELISA方法较HI方法敏感性高。  相似文献   

猪血凝性脑脊髓炎病毒S1蛋白基因在毕赤酵母中的表达     

陆慧君  贺文琦  高丰  常灵竹  赵魁  盖显英  王龙涛  宋德光 《中国兽医学报》2008,28(1):1-4

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用Ec0R I和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαASI。用BstX I酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。  相似文献   

LncRNA-NONMMUT131476.1对PHEV复制的影响及其靶基因Nlrc5的验证     

姜景夫  兰云刚  李姿  张竞  关继羽  赵魁  高丰  贺文琦  宋德光 《中国兽医学报》2019,(4):739-744

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是长达200个以上核苷酸的转录本,在不同组织和发育阶段的表达具有特异性。为筛选与猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)致小鼠神经系统损失相关的LncRNA,本试验对正常小鼠和PHEV感染小鼠大脑皮质进行高通量测序,获得PHEV感染过程中LncRNA差异表达数据。经过生物学分析,发现与PHEV感染相关的LncRNA-NONMMUT131476.1位于小鼠第8号染色体Herpud1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1)和Nlrc5(NLR family,CARD domain containing 5)两基因间,由5个外显子构成。利用qPCR方法对感染PHEV的小鼠脑组织和N2a细胞中LncRNA-NONMMUT131476.1及Nlrc5基因的表达量进行检测,发现LncRNA-NONMMUT131476.1和Nlrc5基因的表达量均呈上调。研究发现干扰LncRNA-NONMMUT131476.1后Nlrc5表达被抑制,表明Nlrc5可能为其潜在靶基因。同时,沉默LncRNA-NONMMUT131476.1表达能促进病毒复制增殖,表明该LncRNA可能作为调节因子,参与调控PHEV感染过程,但其具体机制有待于进一步研究。本试验为PHEV感染发病机制和PHEV防制研究提供新思路。  相似文献   

几种常见冠状病毒感染疾病的病理学特征     

周倩宇  贺文琦  汤易霏  高丰  李姿 《中国兽医学报》2022,(2):384-390

冠状病毒(coronavirus)属于单股正链RNA病毒,在自然界中广泛存在,根据血清型特点和基因序列可分为α、β、γ和δ4个种属.目前发现,冠状病毒仅感染脊椎动物,且容易引起人畜共患病的发生,对公共卫生安全具有重大隐患.然而,不同种属的冠状病毒对动物的感染性存在差异,导致患病动物出现不同的病理学特征.现综述几种常见冠...  相似文献   

吉林省2006--2010年羊传染性脓疱病的流行病学调查及分析     

郭良兴  赵魁  赵广海  贺文琦  袁洁  陆慧君  王改丽  苏高莉  高丰 《兽医大学学报》2011,(11):1623-1626

为了解近年来羊传染性脓疱病在吉林省的流行情况,本试验采用PCR方法对2006—2010年间采自吉林省9个不同市县85个养羊户疑似羊传染性脓疱病毒（ORFV）感染的628份痂皮样本（背部、乳房、四肢以及尾根等部位皮肤）进行羊传染性脓疱病毒核酸的检测,在各市县不同年龄不同品种羊的皮肤痂皮样本中均检测到一定程度的ORFV,平均阳性率为24．36％（153／628）,其中以1～6月龄羔羊的阳性检出率最高。应用间接ELISA方法对同期采集自上述地区羊群中的2160份血清样本进行ORFV抗体检测,其中有852份呈现0RFV抗体阳性反应,平均阳性率为39．44％（852／2160）。以上结果表明,ORFV在吉林省大部分地区羊群中的感染已经非常普遍。  相似文献