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为研究肝素结合蛋白质PF3D7_1104400的功能以及其作为疟疾疫苗候选抗原的可行性,通过PCR方法扩增目的基因,并将其与p ET-28a和p GEX-4T-1表达载体连接构建重组表达质粒。将构建成功的重组表达质粒转化入大肠杆菌BL21-Condon Plus(DE3)-RIPL中诱导表达,利用亲和层析的方法纯化His-tag和GSTtag重组蛋白质。用His-tag重组蛋白质免疫家兔制备多克隆抗体,以该抗体为一抗,利用Western blot检测该抗体的特异性以及PF3D7_1104400蛋白质在虫体内是否表达。结果表明:成功构建重组表达质粒PF3D7_1104400-p ET和PF3D7_1104400-p GEX,诱导表达并纯化出特异性好、纯度高的重组蛋白。制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,PF3D7_1104400蛋白质在恶性疟原虫体内全长表达。 相似文献
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猪血凝性脑脊髓炎病毒RT-PCR方法的建立及初步应用 总被引:5,自引:0,他引:5
为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本。 相似文献
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为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本 相似文献
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为了解我国不同生长阶段猪群猪瘟(classical swine fever, CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)及猪伪狂犬病(pseudorabies, PR)的免疫情况,从而为制定合理有效的免疫程序提供理论依据,进而更好地防疫此3种疫病,本试验应用ELISA方法对2018年收集的14 580份猪血清样本进行了CSF、PRRS及PR-GE抗体检测。结果显示,2018年,我国猪群CSF、PRRS、PR-GE抗体阳性率分别为78.84%,78.23%和27.47%;不同阶段猪群同种疫病抗体阳性率差异较大,其中,CSF抗体阳性率公猪最高(91.67%)、保育猪最低(57.00%),PRRS抗体阳性率育肥猪最高(91.31%)、保育猪最低(50.02%),PR-GE抗体阳性率公猪最高(33.98%)、后备母猪最低(19.17%);不同阶段猪群同种抗体离散度也存在较大差异。 相似文献
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1只4岁龄雄性贵宾犬,因左后肢肿胀跛行入院就诊。影像学检查,发现左后肢膝关节间隙不对称、远端骨皮质不连续等异常,遂进行生检手术并送病理学检查。病理组织学观察可见大部分正常骨组织结构消失,骨髓腔内有大量异常增殖的肿瘤细胞向骨组织浸润,肿瘤细胞多排列成管腔结构,管腔内有红细胞存在,细胞异型性较高,有多核细胞出现,有丝分裂常见。免疫组织化学染色结果表明,肿瘤区域血管内皮细胞特异性标记物CD31及FactorⅧ染色均呈阳性,证明该肿瘤是血管内皮细胞来源。结合临床病例情况及病理学诊断结果,确诊为血管肉瘤。该研究结果不仅为临床病例治疗方案的制定及预后评估提供参考,而且对骨骼发生血管肉瘤病例的病理诊断提供重要依据。 相似文献
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羊口疮(Orf)和绵羊痘(SPP)是发生于羊群的高度接触性传染病,两者在临床上经常呈现混合感染,给养羊业带来严重的经济损失,因此,开发安全有效、可同时抵抗2种疫病的二联疫苗具有重要临床意义。本研究将羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因及绵羊痘病毒(SPPV)的P32基因以P2A肽序列串联,获得pcDNA3.1-B2L-P2A-P32质粒,作为候选重组DNA疫苗。将质粒转染细胞,检测抗原蛋白的胞内表达及切割;将其免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法检测特异性抗体、中和抗体效价和细胞因子的分泌水平。结果表明:该重组DNA疫苗能在真核细胞中独立表达B2L及P32抗原蛋白,同时能诱导机体产生特异性免疫应答,具有较好的免疫效果。该研究为在羊群中开展更广泛的临床研究提供了试验依据,有望成为候选疫苗。 相似文献