全文获取类型
收费全文 | 250篇 |
免费 | 13篇 |
国内免费 | 12篇 |
专业分类
农学 | 13篇 |
3篇 | |
综合类 | 74篇 |
水产渔业 | 1篇 |
畜牧兽医 | 184篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 6篇 |
2022年 | 8篇 |
2021年 | 6篇 |
2020年 | 7篇 |
2019年 | 8篇 |
2018年 | 13篇 |
2017年 | 12篇 |
2016年 | 10篇 |
2015年 | 8篇 |
2014年 | 14篇 |
2013年 | 11篇 |
2012年 | 10篇 |
2011年 | 14篇 |
2010年 | 16篇 |
2009年 | 13篇 |
2008年 | 20篇 |
2007年 | 9篇 |
2006年 | 8篇 |
2005年 | 24篇 |
2004年 | 5篇 |
2003年 | 1篇 |
2002年 | 5篇 |
2001年 | 10篇 |
2000年 | 6篇 |
1999年 | 2篇 |
1998年 | 3篇 |
1997年 | 1篇 |
1996年 | 1篇 |
1995年 | 1篇 |
1994年 | 3篇 |
1993年 | 3篇 |
1992年 | 7篇 |
1991年 | 6篇 |
1990年 | 1篇 |
1989年 | 1篇 |
排序方式: 共有275条查询结果,搜索用时 187 毫秒
21.
1 概述绵羊及山羊的甲状腺肿病一般认为系碘缺乏或致甲状腺肿物质所引起。然而,koch和Watson等推测山羊、绵羊所发生的先天性甲状腺肿可能是遗传性的.但都未对发病机理做深入的研究,亦未提出足够的遗传学依据。直至1965年南澳大 相似文献
22.
23.
24.
克隆动物胎盘发育缺陷是造成动物克隆效率低下的一个重要原因。目前认为克隆胎盘发育异常通常是由于一些基因表达的异常所致,与表观遗传修饰有关。microRNA是一种重要的表观遗传修饰方式,对动物胚胎发育和胎盘的形成有着重要的调控作用。为研究miR-127和miR-136在克隆动物胎盘中的表达情况及其与克隆动物发育缺陷的关系,本实验运用荧光定量PCR分析了死亡克隆绵羊胎盘和同期普通绵羊胎盘组织中miR-127和miR-136的相对表达量,并鉴定了miR-127和miR-136的靶基因及靶基因在胎盘中的表达情况。结果显示,miR-127和miR-136在克隆绵羊胎盘中的表达量分别增加了3.1和2.8倍。EGFP荧光敲除实验证实,胎盘发育相关基因Rtl1是miR-127和miR-136的靶基因,同时定量PCR分析发现Rtl1基因在克隆绵羊胎盘中的表达量降低了3/5。结果说明,miR-127和miR-136在克隆胎盘中的异常表达可导致Rtl1基因的低表达,这很可能是导致克隆动物死亡的一个重要原因。 相似文献
25.
为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc-145细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRR... 相似文献
26.
建立沙门菌病原体的一种可目视化环介导等温扩增技术(LAMP),实现对沙门菌的高效快捷检测。针对沙门菌的invA基因的高度保守区域,设计一套特异性引物,优化LAMP扩增反应体系和条件,并对该方法的特异性、灵敏性和人工污染样品以及临床样品分别进行检测。与传统的细菌分离与鉴定、PCR和real-time PCR方法进行敏感性比较。该方法优化后的最佳反应体系为内外引物浓度比例为3∶1,dNTPs为2.5μL,MgSO_4为1.5μL,2.5μL甜菜碱(10mol/L),1μL Bst 2.0DNA聚合酶,在62℃恒温条件下反应50min,可以特异性检出沙门菌,而对其他非沙门菌病原的检测结果为阴性。该方法的最低检测线为1.0×10~2 CFU/mL,灵敏度是常规PCR检测方法的1 000倍,与real-time PCR方法的灵敏度基本接近;针对人工污染沙门菌的鱼粉其检测灵敏度为5.0×10~2 CFU/mL;对临床样品的检出率为65.4%,与传统检测方法的检出率一致。本研究建立的LAMP检测沙门菌的方法特异性强、灵敏度高、操作简便、效能高和可视化,为基层监管部门和畜牧兽医工作者对于沙门菌病原的监控和初步筛选提供了技术保障。 相似文献
27.
28.
29.
为了通过慢病毒感染的方法建立pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型,从而研究miR-29b在动物模型体内过表达对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染和复制的影响,试验根据miRBase数据库中牛miR-29b前体pre-miR-29b序列设计引物,以MDBK细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-29b基因,并克隆至空质粒pLL3.7中;共同转染pLL3.7-pre-miR-29b及慢病毒包装辅助质粒(pRSV-Rev、pCMV-VSVG和pMDLg/pRRE)至HEK-293T细胞中,于48,72小时时收集病毒液,浓缩后接种至HEK-293T细胞中进行慢病毒效价测定。将6只Balb/c小鼠平均分成2组,即空质粒pLL3.7感染组和慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染组,每只小鼠尾静脉注射5.0×10~7 infection units(IU)/mL病毒液,于注射后96小时时处死小鼠,采集肝脏、脾脏、肾脏等器官,提取总miRNA,并反转录成cDNA,使用TaqMan荧光定量RT-PCR法检测miR-29b在小鼠不同器官中的表达情况。结果表明:试验成功扩增得到牛pre-miR-29b并构建出pLL3.7-pre-miR-29b;成功包装pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒,其效价为5.8×10~8 IU/mL;经尾静脉注射慢病毒后,在慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染的小鼠不同器官中均有较高水平的miR-29b表达。说明试验成功建立了慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型。 相似文献
30.
为详细了解口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B的基本结构与功能,试验采用生物信息学方法研究了非结构蛋白3B的一般理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构、潜在的抗原表位,并对该蛋白进行了多重序列比对。结果表明:在NCBI数据库中检索到39个中国上传的口蹄疫病毒非结构蛋白3B序列,其中从新疆地区获得的分离株1株(Akesu/58),属于O型毒株,非结构蛋白3B具有71个氨基酸,分子式为C_(356)H_(596)N_(98)O_(93)S_1,相对分子质量为7 769.31,等电点为10.11,带负电荷氨基酸残基总数为6个,带正电荷氨基酸残基总数为16个,不稳定指数为28.67;亲水性平均系数为-0.731,无跨膜区,无信号肽;无糖基化位点,该蛋白在氨基酸序列第26位和第50位各存在1个酪氨酸磷酸化位点;二级结构延伸链占所有氨基酸比例的23.94%,β-折叠占所有氨基酸比例的4.23%,无规则卷曲占所有氨基酸比例的71.83%;三级结构蛋白覆盖率只有28%,可信度为10%;非结构蛋白3B有3个抗原决定簇,具有6个优势的B细胞抗原表位,4个优势的CD_8~+抗原表位,1个强结合多肽段和14个弱结合多肽段的CD_4~+抗原表位;非结构蛋白3B与NCBI公布的中国O型、A型和Asia 1型血清型核苷酸序列同源性分别为94.24%、91.55%和97.48%,氨基酸序列同源性分别为97.29%、92.96%、98.49%。说明非结构蛋白3B基因编码的蛋白质为亲水性蛋白,结构较为松散,同源性高,且具有保守的抗原决定簇,可作为区分疫苗接种和自然感染抗体诊断方法的候选蛋白靶标。 相似文献