反转录─套式PCR方法检测鸡传染性法氏囊病病毒     

陈红英  胡子信  张曼夫 《中国预防兽医学报》1999,(5)

采用蛋白酶 Ｋ 消化,酚、氯仿抽提的方法提取法氏囊匀浆和细胞培养液中的鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）基因组 Ｒ Ｎ Ａ,用特异的寡核苷酸引物对其 Ｖ Ｐ２ 高变区进行反转录套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增。应用该方法从一个法氏囊匀浆中即可特异地检出 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ,得到的扩增产物可用于分子流行病学的进一步分析,而从感染材料的处理到扩增结果的电泳检测,在两个工作日之内可轻松完成。本实验为法氏囊病病毒的诊断和分子流行病学的分析提供了一种快速、简便、可靠的手段。  相似文献   

国槐花与刺槐花中黄酮的质量差异比较     

付凤萍  高欣悦  余佳  吴建英  余琳  陈红英 《湖北农业科学》2022,61(7):108-112

国槐(Sophora japonica L.)花和刺槐(Robinia pseudoacacia L.)花为近缘品种,均有药食两用价值,并富含黄酮类物质.采用药典中槐花的标准来探讨两者黄酮差异,以利于经销和临床上区分.试验以芦丁为对照,对2种槐花进行薄层色谱定性比较、比色法测定总黄酮含量及高效液相色谱法测定芦丁含量.国...  相似文献   

影响ClO_2油田污水杀菌效果的因素试验研究     

杨滢  樊友君  贺庆  李俊南  陈红英 《长江大学学报》2016,(16):29-31

针对影响海上油田注水现场常用杀菌剂ClO_2杀菌效率的因素开展试验研究,以硫酸盐还原菌数量为衡量指标,开展了污水中Fe~(2+)、S~(2-)、聚丙烯酰胺以及聚合硫酸铁、聚合铝的浓度对ClO_2的杀菌效果影响试验研究。研究结果表明,油田污水中Fe~(2+)、S~(2-)等还原性介质和常用污水有机絮凝剂(如HPAM)对ClO_2的杀菌效果有较大的影响,而无机絮凝剂(如聚合铝、聚合硫酸铁)对ClO_2的杀菌效果影响不是很大。优选水处理絮凝剂和采用复合杀菌技术可以有效增强ClO_2的杀菌效果和节约污水处理成本。  相似文献   

一起育肥猪脑炎型链球菌病的诊断与防制     

陈红英  李新生  邵攀峰  刘金朋 《中国畜牧兽医》2009,36(8):166-167

2008年2月,河南省荥阳市某猪场育肥猪发生一起疑似猪脑炎型链球菌病感染的病例。无菌采集病猪肝脏、脾脏、肾脏和脑组织,分离到链球菌,并进行了生化鉴定。实验室检查结果结合流行病学调查、临床症状和剖检变化,初步诊断为链球菌病,经药敏试验筛选药物治疗结合综合防制,迅速控制了病情。  相似文献   

猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭小参  崔保安  陈红英  王彦彬  方剑玉  吕晓丽  王东方 《中国兽医学报》2009,29(2)

参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序.测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%.与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2.本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础.  相似文献   

罗曼鸡白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测     

陈红英  崔沛  崔保安  胡功政  朱前磊  王子馨 《四川农业大学学报》2009,27(2):218-222

应用RT-PCR技术从罗曼鸡脾淋巴细胞RNA中扩增鸡白细胞介素18(ChIL-18)全基因,并克隆和测序。结果表明,获得了ChIL-18全序列,其大小为597 bp。将其成熟蛋白基因(510 bp)亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达融合蛋白(GST-ChIL-18)。SDS-PAGE可检测到分子质量为约46 kDa的融合蛋白,Western blot证实该融合蛋白可与鼠抗鸡IL-18单克隆抗体发生特异性反应。用MTT法测定表明,重组蛋白能明显促进鸡T细胞转化的活性。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒3型双重PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩昊莹  赵宇  崔建涛  田润博  侯华琳  徐朋丽  郑兰兰  陈红英 《河北农业大学学报》2018,(5)

为建立同时快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重PCR方法。本研究根据GenBank中登录的PEDV和PCV3基因组序列,分别在M基因和Rep基因高度同源保守区设计2对特异性引物,建立了检测PEDV和PCV3双重PCR方法,即可同时扩增225bp(PEDV)和138bp(PCV3)2条特异性片段,而该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪博卡病毒、猪圆环病毒2型、大肠杆菌核酸扩增均为阴性;PEDV和PCV3的最低检出量分别为428和325拷贝/μL,且特异性强、敏感性好,为快速、高效检测PEDV和PCV3提供了技术帮助。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒PCR快速检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

邵攀峰  陈红英  崔保安  王振亚  宋亚鹏  李森  谢佳喜 《安徽农业大学学报》2010,37(1):58-62

根据GenBank发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列(EF552578),设计合成了1对特异性引物,通过优化反应条件,成功地从ILTV疫苗株中扩增出329 bp特异性片段,而传染性支气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。回收的PCR产物经EcoRⅠ酶切和测序鉴定,证实了该扩增片段的特异性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为30 pg。经临床初步应用表明,该方法的建立使传染性喉气管炎病毒的检测更为快速、简便、经济和实用。  相似文献   

猪IL-2成熟蛋白在昆虫细胞中的表达及生物学活性鉴定     

陈红英  郭小参  崔保安  王彦彬  张红英  方剑玉 《中国兽医学报》2010,30(6)

以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增猪IL-2成熟蛋白基因。将猪IL-2成熟蛋白基因定向克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含猪IL-2基因的重组质粒rBacmid-IL2,转染昆虫细胞。间接免疫荧光试验表明重组猪IL-2在Sf9昆虫细胞中获得了表达,SDS-PAGE可检测到相对分子质量为20000的重组蛋白,Western-blot证实该重组蛋白可与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应,重组猪IL-2经纯化后能明显促进猪T淋巴细胞转化。结果表明,重组猪IL-2在昆虫细胞中得到表达,表达的重组蛋白具有一定生物学活性,为进一步开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立     

赵丽  崔保安  陈红英  赵玉丛  郭宏伟 《中国兽医学报》2010,30(9)

根据GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列(EF552427),设计并合成1对引物.通过常规PCR扩增猪伪狂犬病病毒gE基因,将鉴定正确的gE基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒.以该阳性重组质粒为作为模板建立SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性试验、特异性试验和重复性试验.结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.999 9,最低检测的拷贝教为35.4拷贝/25 μL,比常规PCR高10倍,特异性和重复性较好并能对样品进行定量检测等优点.本研究成功的建立了检测猪伪狂犬病病毒的SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础.  相似文献