5株猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆与序列分析   总被引：14，自引：0，他引：14       下载免费PDF全文

马静云  曹永长  毕英佐 《华南农业大学学报》2003,24(1):70-73

提取5株猪O型口蹄疫病菌（FMDV）（L1-L5）的RNA，用1对通用引物经RT-PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段，克隆后通过测序获得其核苷酸序列，分析表明，除L2株外，其余4株（L1，L3，L4和L5）VP1基因的核苷酸序列同源性在96.7%-99.8%。氨基酸序列同源性在99.5%-100%；而L2株与L1，L3，L4和L5株VP1基因的核苷酸序列同源性在82.0%-83.4%，氨基酸序列同源性在89.7%-90.1%,L1,L3,L4和L5株病毒VP1基因的核苷酸序列与已经发表的GD/CHA/86，HKN/1/99，HKN/16/96的同源性较高，核苷酸序列同源性在85.0%-99.8%，属于同一基因型；而与L2，F29/CHINA及国外大多数毒株相比，属于不同的基因型，其核苷酸序列同源性仅为41.0%-82.6%，5株毒株中的L1，L3，L4和L5的主要中和抗原位点140-160，200-213位氨基酸序列完全相同，推测其有相近的中和单抗表位和相同的抗原性。  相似文献   

鸭β-防御素-2基因的克隆测序与组织表达分析     

张辉华  罗艳娜  谢青梅  马静云  杨承忠  韩小凤  毕英佐 《中国兽医杂志》2011,47(10)

利用RT-PCR技术,从肝脏组织中扩增到鸭AvBD2基因.经测序表明,扩增到的鸭AvBD2大小为350 bp,含有1个大小为195 bp的开放阅读框,编码64个氨基酸残基.组织表达分析表明,鸭AvBD2基因在鸭脾脏和肾脏中大量表达;心脏和肝脏中有少量表达;肺脏和骨髓有中等水平表达;在胸腺、腔上囊、小肠、胰腺、腺胃、食管、气管、舌头、胸肌、卵巢、皮肤中未见表达.  相似文献   

鸡β-防御素基因的克隆与结构分析   总被引：5，自引：1，他引：5  

张辉华  毕英佐  曹永长  马静云  陈晓春 《农业生物技术学报》2005,13(4):482-488

通过RT-PCR扩增出鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的部分cDNA序列，大小分别为198、195和297bp。利用PCR技术扩增出鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因组DNA部分序列，大小分别为1176、1053和2454bp。经分析发现，2个内含子将鸡-β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的编码区分成3个外显子部分。第1个外显子编码绝大部分信号肽序列；第2个外显子编码信号肽羧基端极小部分序列、原片段序列与大部分成熟肽序列；第3个外显子编码小部分成熟肽序列。扩增到的鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的两个内含子长度，分别为482和496bp，183和675bp，980和1280bp。鸡β-防御素基因编码区结构的这种组成与哺乳动物的β-防御素基因的不同，在哺乳动物中为1个内含子将β-防御素基因编码区分成2个外显子部分。Blast比较发现，鸡β-防御素Ga1-1和Ga1-2基因位于鸡的3号染色体连续克隆群Contig42．182上，并且这2个基因转录方向相反。Ga1-3基因位于鸡的3号染色体连续克隆群Contig42．181和Contig42．182上，转录方向与Ga1-1基因相同。  相似文献   

H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测技术   总被引：2，自引：0，他引：2  

谢青梅  曹永长  张祥斌  李少璃  冀君  马静云  毕英佐 《中国兽医学报》2010,30(1)

根据GenBank中H5N1亚型流感病毒HA基因保守区的序列,设计1组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP反应体系,优化LAMP反应条件,最佳等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物加入核酸染色剂SYBRⅠ和4 mmol/L Mg2+,结果可视。扩增产物可用特异性内切酶KpnⅠ进行酶切鉴定。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品,检测结果与RT-PCR方法一致。RT-LAMP技术整个检测过程只需1~2 h,不需要PCR仪和成像系统,仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验,验证了建立的RT-LAMP技术可以作为一种操作简单,灵敏性、特异性高的检测H5亚型禽流感病毒的方法。  相似文献   

鸡Toll样受体的研究进展     

韩小凤  张辉华  谢青梅  马静云  毕英佐 《中国兽医杂志》2010,46(11)

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一种天然免疫分子,它通过识别病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)在其宿主有机体的天然免疫系统中起着重要的防御作用[1].它的结构包括以下3个部分:胞外区、跨膜区和胞内区.  相似文献   

噬菌体在疾病治疗方面的应用及研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

陈晓春  王继文  曹永长  毕英佐  马静云 《动物医学进展》2005,26(1):32-35

噬菌体治疗是利用噬菌体溶解细胞的作用而用于治疗人和动物的病原细菌的临床感染。早在 2 0世纪初 ,噬菌体治疗就取得过积极的治疗效果。目前针对传统抗生素治疗动物细菌感染时易产生残留及细菌耐药性等缺点 ,噬菌体治疗更表现出许多突出的优越性。基于大量的动物模型试验及人类临床治疗的实践 ,人们开始针对治疗中存在的缺点和不足 ,从治疗性噬菌体的选择、宿主谱、作用效力及其作用的动力学原理等方面 ,采用分子生物学等技术对噬菌体进行探索性的改造 ,以期获得更有效的治疗效果 ,维护人类及动物的健康  相似文献   

血浆蛋白粉在仔猪饲养中的应用及机理研究进展     

高玉云  钟万福  余钗  马静云  谢青梅  毕英佐 《动物营养学报》2011,23(5):720-725

血浆蛋白粉由于营养全面、消化率高、适口性好、富含免疫物质等特点获得了广泛的应用.本文从血浆蛋白粉中起作用的主要成分、血浆蛋白粉对系统和肠道抗氧化和免疫的作用以及其对内分泌和养分吸收的影响等方面进行了论述,最后重点阐述了血浆蛋白粉在肠道的作用机理.  相似文献   

肌肉生长抑素基因工程疫苗免疫动物的效果研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

马现永  马静云  曹永长  毕英佐 《广东畜牧兽医科技》2003,28(6):41-43

为检验肌肉生长抑素基因工程疫苗对动物生长的影响,用由大肠杆菌表达的肌肉生长抑素蛋白与油佐制成疫苗,肌肉注射免疫25天龄小白鼠、并观察生长状况,每周称重,纪录结果,饲养至95天龄后试验结束;肌肉注射免疫21天龄幼鸡,饲养至98天龄后进行屠宰,分离胸肌、腿肌并称重。结果,与对照组相比,注射肌肉生长抑素基因工程疫苗的小白鼠体重最高增加17.17%;鸡体重最高增加14.27%,免疫效果比较理想,达到了预期的目的。  相似文献   

表达禽流感病毒核蛋白重组噬菌体的构建     

王新卫  毕英佐  马静云  曹永长  王宪文  詹爱军 《农业生物技术学报》2007,15(4):552-556

摘要：利用PCR技术，扩增去除部分序列、长度为1320 bp、编码440个氨基酸的禽流感病毒(AIV)NP基因片段，将其克隆至pR质粒的T4噬菌体SOC基因C末端获得重组质粒pR-NP，以此重组载体转化大肠杆菌E2，用溶菌酶缺陷噬菌体T4-Z1感染重组E2菌，重组载体与缺陷噬菌体T4-Z1基因发生同源重组，将NP基因整合到噬菌体基因组中，用PCR方法筛选重组噬菌体并命名为T4-Z1-NP。经Western blot检测证实，T4-Z1-NP表达的NP融合蛋白具有免疫学活性。成功构建了表达禽流感病毒核蛋白的重组噬菌体。  相似文献   

口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及免疫原性检测   总被引：6，自引：1，他引：5  

马静云 陈峰曹永长  周庆丰毕英佐 《中国兽医科技》2004,34(3):17-20

将口蹄疫病毒VP1基因克隆至原核表达载体pBAD／TOPO中，经鉴定后得到了重组质粒pBAD-VP1。将此重组质粒转化到受体茵TOP10中，分别以不同浓度的诱导剂L-阿拉伯醛糖进行诱导，并在不同诱导时间进行采样，经处理后做SDS-PAGE和蛋白质印迹分析。结果，以终浓度为0．02g／L的L-阿拉伯醛糖进行诱导，4h后表达可达到高峰，表达产物大小约为40ku。软件扫描结果显示，VP1融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的26．3％，能与抗FMDV抗体发生特异性反应，融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。抽提融合蛋白的包涵体，经过洗涤后制成油乳荆疫苗，经皮下注射免疫豚鼠，用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数，并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒。结果表明，用此融合蛋白的包涵体免疫豚鼠能诱导产生中和抗体，并对病毒的攻击提供免疫保护。  相似文献