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犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究 总被引:5,自引:0,他引:5
用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学,理化学,生物学和分子病毒学等鉴定,结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20~24nm,无囊膜,抗氯仿,耐酸,耐热,能被5-IUDR抑制,可凝集猪、马、猫的红细胞,不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞,HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制,用犬细小病毒(CPV)特异性引物对10株病毒进行PCR扩增,结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp),用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验,结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降,在攻毒后4~14d粪便PCR检查阳性,其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡,其余接种犬没有出现明显的临床症状,但血清抗体均升高(大于5倍),而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化,粪便PCR检测阴性,表明所分离毒株能够感染犬,鉴定结果证明,CPV在我国犬群中仍广泛存在。 相似文献
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根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列,设计合成4对8条引物,用已建立的PCR方法,对犬2型腺病毒沈阳分离株第5代强毒经蚀斑克隆驯化的第60代毒弱毒(SY-V60)和犬1型腺病毒长春犬株(CCC-V6)的纤突基因进行了扩增,PCR产物经纯化后进行基因序列测定,测定结果经拼接后得到一个由1632和1629个核苷酸组成的纤突蛋白全基因序列,分别编码543和542个氨基酸。犬2型腺病毒(SY-V60)与犬1型腺病毒(CCC-V6)的纤突基因的同源性达到80.48%。犬2型腺病毒(SY-V60)与犬1型腺病毒(CCC-V6)纤突基因的同源性达到80.48%;根据犬的腺病毒与人2型腺病毒纤突蛋白的序列同源性比较结果,推测了犬腺病毒纤突蛋白的尾(tail)、轴(shaft),结(knob)三个功能区的氨基酸序列,2个型之间的尾区同源性为76.9%;轴区同源性为78.59%;其结区同源性为83.24%,而同型毒株之间结和尾区同源性较高,轴区同源性较低。 相似文献
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犬传染性肝炎病毒的血凝抑制抗体和中和抗体的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
犬传染性肝炎病毒(Infectious canine hepatitis virus,ICHV)能诱导动物机体产生中和(Serum neutrolization,SN)抗体与血凝抑制(Hemagglutination inhibition,HI)抗体,本研究对8份ICHV免疫的犬血清同时进行了其SN抗体和HI抗体的检测,结果表明SN抗体和HI抗体具有正比线性关系SN≈8×HI,并绘制了标准曲线。由于血凝和HI试验不需应用活的试验宿主系统,而且可在3 h内获得结果,操作经济简便,因此可通过测定HI抗体的效价来推算出SN抗体效价。 相似文献
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应用YCA18株第8代细胞培养物(YCA18-8)经口鼻和静脉接种犬腺(CAV)SN本<1:2的易感犬作安全试验,结果未见任何CAV临床症状与病理解剖学改变;用不同剂量的YCA18-8分组免疫CAV易感犬,经SN抗体测定与用CAV强毒攻击试验,结果SN抗体达1:16以上的犬95%以上可获得免疫保护,最低免疫量为10^4TCID50;应用YCA18-8分别免疫母源抗体达1:4和1:8的两组试验犬,第一次免疫14d后SN抗体均未有升高,追加2-3次免疫后SN抗体才逐渐上升至1:16以上的免疫保护水平;用CAV易感犬和MDCK分别将YCA18连续传8代和20代,结果对犬仍然安全,对犬的免疫原性未见下降,最低免疫量仍为10^4TCID50;与CDV和CPV弱毒作免疫互扰试验,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异;将YCA18-8冰冻保存于一30℃,6个月内TCID50仍不低于10^-4/0.1ml,经加明胶-蔗糖低温真空冻干后,4℃和-30℃保存1年,TCID50均仍维持在10^-4/0.1ml以上,经YCA18-20 3次免疫的试验犬,1年后SN抗体仍在最低抗体保护值1:16以上。 相似文献
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用F81细胞从河南送检的患有肠炎的果子狸粪便样品中分离出一株病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学实验鉴定是一株CPV-2a的突变株。此毒株在F81细胞上生长,能产生CPV感染的特征性细胞病变,细胞肿胀、变圆、破碎、脱落;病毒粒子二十面体立体对称,直径为20~24nm;无囊膜,能抵抗氯仿的处理,耐酸,耐热,但能被5-IUDR抑制。可凝集猪红细胞,不凝集鸡、豚鼠、大鼠、兔、人“O”型红细胞,能被抗CPV抗体所抑制。设计特异性细小病毒引物扩增VP2基因的两个片段,并进行测序,分析结果表明,该毒株是在CPV-2a的基础上其VP2的第297位氨基酸发生A→S突变,第300位氨基酸发生G→S突变,第301位氨基酸发生T→A突变。该毒株暂定名为PV/GZL/H/1/02。该病毒能感染犬。 相似文献
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用猫白介素18(interleukin,IL-18)基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后猫外周血单核细胞(PBMCf)总RNA进行了RT-PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定。结果该基因全长579bp,编码192个氨基酸(GenBank登录号:DQ100372)。在推导的猫IL-18氨基酸序列中,无信号肽序列和潜在的N-联糖基化位点,但存在4个Cys残基。与不同物种IL-18相比,猫IL-18与犬、羊、牛和猪IL-18核苷酸序列有较高的同源性,分别为89.8%、88.6%、88.4%和88.1%,但与小鼠和鸡IL-18有明显的种属差异。将目的基因片段进一步亚克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-18,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导。结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到分子量为27.5kD的重组目的蛋白。经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的13.6%。 相似文献
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犬冠状病毒BEI灭活苗的制备与免疫试验 总被引:4,自引:0,他引:4
烷化剂类灭活剂是一类含烷基分子去一个氢原子 ( Cn H2 n 1)化合物 ,它能与另一种化合物作用 ,将烷基引入形成烷基取代物 ,根据其结构可分为氮芥类、乙烯亚胺类和磺酸脂类。这类化合物的化学性质活泼 ,其灭活机制主要在于烷化 DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤 ,引起单链断裂、双螺旋键交联 ,妨碍RNA的合成 ,从而抑制细胞分裂。另外 ,也可与微生物的酶系统和核酸蛋白起作用 ,干扰核酸的代谢 ,因此 ,这类灭活剂能破坏病毒的核酸 ,使其完全丧失感染力 ,但并不损害其蛋白质衣壳 ,得以保留其保护性抗原 ,故是制备灭活病毒疫苗较好的灭活剂。据报道… 相似文献
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为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在哺乳动物间的传播能力,本研究以豚鼠为模型评价了5株H9N2亚型AIV在豚鼠体内的复制能力和水平传播能力,并分析了5株病毒血凝素(HA)蛋白的分子特征。结果表明,5株病毒均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体特征(Lys226),2株病毒具有禽样受体特征(Gln226),而A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)株在该位点的氨基酸残基为苯丙氨酸(Phe226)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征。个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。感染试验表明,5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制。并且在鼻甲骨处复制稳定,平均病毒滴度为2.01 Log EID50/mL~4.5 Log EID50/mL。传播试验表明,所有病毒株的人工接种豚鼠的鼻洗液中均能够检测到病毒,最长排毒期为接毒后第8 d,而接触组豚鼠鼻洗液中未检测到病毒。本研究表明,5株H9N2亚型AIV均属于CK/Beijing谱系,部分病毒株的HA蛋白已具备人样受体结合特征,并且关键氨基酸位点(226位)处出现新的突变。5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制并通过上呼吸道排毒,但不能在豚鼠间同群传播。 相似文献
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犬瘟热病毒小熊猫株(LP)的动物感染试验 总被引:4,自引:1,他引:3
将从死亡小熊猫肝脏病料中分离到CDV LP株第9代MDCK细胞培养毒,按不同剂量各接种7只2~3月龄的健康幼犬,接种犬全部发病。于接种后7天时各捕杀2只犬进行检测,电镜检查、CDV RT-PCR、CDV的分离及中和试验结果均为阳性,说明接种犬发生了CDV感染。结合接种犬出现的临床症状及病理解剖学变化结果进行的分析表明,CDV LP株是一株强毒,并且具有很强的免疫原性。人工感染犬试验结果表明某动物园 相似文献