应用SYBR Green I的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌   总被引：2，自引：0，他引：2  

阳成波  蒋原  黄克和  祝长青 《动物医学进展》2003,24(1):74-78

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。  相似文献   

法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达   总被引：7，自引：0，他引：7  

张焕玲  钱建飞  侯艳红  李银  郝勤宗  裘教宗  张则斌  陈溥言  杨奎 《中国预防兽医学报》2003,25(1):29-32

法氏囊活性肽（Bursin,BS)作为一种免疫增强剂，临床应用广泛，为了大量制备BS，按大肠杆菌惯用密码子合成BS基因。并用色氨酸将5个BS基因串联，克隆于质粒pU57的SmaI位点，经测序证明序列正确后，以PCR扩增，克隆于表达载体pBV220的EcoRI,HinDⅢ位点，温敏诱导表达，其表达水平占全菌总蛋白的13.4%。  相似文献   

NO对大鼠中脑腹侧被盖区DA神经元的调节     

孙碧英  张文慧 《动物医学进展》2003,24(4):66-68

实验观察了微量注射 NOS抑制剂 L -NAME及微量联合注射 NO的前体 L-精氨酸( L-Arg) L-NAME于大鼠中脑腹侧被盖区( VTA)对该部位多巴胺神经元的调节。发现VTA注射 L -NAME( 1 mg/ 5μL )后 ,伏隔核( Acb)多巴胺 ( DA )代谢产物—双羟苯乙酸( DOPAC)水平升高到注射前的 1 2 2 .5% ( P <0 .0 0 1 ) ,小剂量注射 L-NAME( 0 .2 mg/ 5μL)对伏隔核 DOPAC水平无明显影响 ;同样方法联合注射 L-Arg( 3 0 0 μg/ 5μL) L-NAME( 1 mg/5μL)后 ,伏隔核 DOPAC水平无明显变化。结论 :VTA微量注射 L-NAME兴奋了该部位的DA神经元 ,而 L -Arg L -NAME联合注射 ,却不能影响 DA神经元的活动 ,说明 NO可以通过L-Arg-NOS-NO途径参与 VTA多巴胺神经元的调节  相似文献   

狂犬病病毒SRV9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

袁慧君  扈荣良  张守峰  张茂林  涂长春 《中国预防兽医学报》2003,25(1):5-8

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列，设计并合成了一对引物，从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA，通过RT-PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列，测序结果显示，其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28b( )中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，于30℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达，大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析，在分子量约为56kDa处出现一新的蛋白带。和预期的目的蛋白分子量相符，Western-blotting检测表明，表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应，出现单一反应带，扫描分析显示，表达产物占菌体总蛋白的23%，包涵体分离，纯化后，纯度达89%，上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。  相似文献   

马铃薯替代玉米对鸡营养物质代谢率的影响     

朱世海  丁保安 《青海畜牧兽医杂志》2003,33(3):14-15

将 40只 48周龄的蛋鸡随机分成 4组 ,分别饲喂用 5 %、10 %、2 0 %的马铃薯替代玉米的日粮。结果表明 ,饲喂 10 %马铃薯替代玉米的日粮 ,其代谢能和钙表观利用率与其他组差异不显著 (P >0 0 5 ) ,蛋白质和磷表观利用率都高于其它各组 (P <0 0 1)。  相似文献   

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定禽呼肠孤病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

单松华  刘学忠 《中国动物检疫》1993,(2):13-14

从感染禽呼肠孤病毒的细胞中,以SDS和酚提取病毒核酸,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法将分节段的核酸分开,经银染色显示,呈3-3-1-3分布,此法可用于禽呼肠孤病毒的快速检测、鉴定。同样方法未能使传染性法氏囊病毒核酸显示。  相似文献   

甘蓝型油菜凸耳叶性状的观察   总被引：3，自引：0，他引：3  

王军  张太平 《贵州农业科学》2001,29(3):28-30

从油菜品种资源以及杂交后代中发现了油菜叶变异株－－凸变叶植株，套袋自交纯化后种植观察，发现油工有 凸耳叶性状最先起 始叶位多出现在第4－5片真叶上，在同一片真叶上一般可同时着生1－5个凸耳叶，凸耳叶面积大小一般在0.05-4.2cm^2。  相似文献   

一类耗散非线性波动方程初边值问题整体解的存在与非存在性     

范恩贵  王静海 《河北北方学院学报(自然科学版)》1994,(2)

本文考虑一类耗散非线性波动方程的初边值问题。用半(?)方法和先验估计论证了该问题小初值下在时间大范围的可解性、唯一性;并用凸性方法证明了(?)当条件下该问题的解在有限时间内发生爆破现象。  相似文献   

Evaluation of abomasal outflow diversion as an experimental model of hypochloremic, hypokalemic metabolic alkalosis in lactating cows.          下载免费PDF全文

J L Ward  D F Smith  S L Fubini    D M Deuel-Aromando 《Canadian journal of veterinary research》1994,58(1):13-19

Four adult, lactating dairy cows were subjected to diversion (loss) of gastric contents through a T-shaped cannula placed in the cranial part of the duodenum just distal to the pylorus. Diversion was continued for 10 to 12 hours, at which point the cows were very weak and depressed. The volume of effluent during this period ranged from 37.3 to 46.8 L, with the largest volume being produced during the first four hours. All cows became dehydrated, with mean packed cell volume and total plasma protein concentration increasing 30% and 19.6%, respectively, but with only a slight increase in plasma creatinine concentration. Plasma Cl- concentrations decreased from a mean of 97.3 mEq/L at the beginning of diversion to a mean of 87.2 mEq/L at eight hours. This was followed by a plateau or slight increase in concentrations over the final hours of diversion. Plasma K+ concentration followed a similar pattern, decreasing from a mean of 3.9 mEq/L to a mean of 2.94 mEq/L at six hours, followed by increasing values until termination of diversion. No changes in plasma Na+ concentration were noted, except for a mild decrease in one cow. Plasma calcium concentrations decreased significantly, reaching 6.6 +/- 0.6 mEq/L at the end of diversion. Venous pH, plasma HCO3- concentration, and plasma base excess concentration increased during the first four to eight hours of diversion, followed by a gradual decline. Although a mild hypochloremic metabolic alkalosis resulted from diversion of abomasal outflow in all cows, substantiated by a mild increase in plasma strong ion difference, the changes observed were not as great as expected.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)  相似文献   

低、无毒农药防治花灌木主要刺吸式口器害虫     

张淑萍  胡文华 《中国森林病虫》2001,(Z1)

在查清天津市园林主要花灌木刺吸口器害虫桃粉蚜、绣线菊蚜、棉蚜和山楂红蜘蛛发生消长规律的基础上 ,确定了防治适期和结合点 ,筛选出 10 %吡虫啉、绿灵、蚧螨灵、 1. 8%齐螨素和花保5种低、无毒药剂 ,防效均达到 90 %以上。查出天敌 13种 ,并对优势种作了取食量调查  相似文献