基于磁珠和双抗夹心免疫分析的Bt Cry1Ac毒素单链抗体筛选与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

张留圈  张霄  刘媛  徐重新  张存政  谢雅晶  寇莉萍  刘贤金 《中国农业科学》2014,47(9):1802-1810

【目的】通过设计并优化生物素-亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对Cry1Ac毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选后抗Cry1Ac毒素特异性结合噬菌体抗体的富集效果进行鉴定,通过单克隆ELISA方法从第4轮筛选得到的次级库中获得特异性结合Cry1Ac的阳性克隆,并对其进行PCR鉴定和DNA测序,确定有完整插入的scFv片段后进行后期相关试验。将相对结合活性最好的阳性克隆scFv-A12替换宿主菌HB2151中进行可溶性诱导表达并纯化。利用纯化后的scFv-A12作为“捕获抗体”,Anti-Cry1Ac兔多克隆抗体作为“检测抗体”,建立针对Cry1Ac的双抗夹心ELISA检测方法。【结果】以生物素化的Cry1Ac蛋白为包被原,利用噬菌体抗体库对其进行了4轮液相筛选。结果显示,相对产出率随着筛选轮数的增加而提高,第4轮较第1轮提高了42倍;单克隆噬菌体ELISA鉴定抗Cry1Ac噬菌体抗体,以试验孔OD450/阴性孔 OD450大于2.1为阳性标准,从第4轮筛选后的培养皿中随机挑选了300个菌落,经单克隆ELISA鉴定出6个阳性克隆,分别命名为hsCry1Ac-C5、hsCry1Ac-D8、hsCry1Ac-C12、hsCry1Ac-A12、hsCry1Ac-F9和hsCry1Ac-F4。其中,hsCry1Ac-A12具有相对较高的亲和力。对上述6个阳性克隆进行菌液PCR检测发现,在935 bp处均有明显的目的条带,通过对其进行测序和氨基酸序列比对,最终得到4株不同氨基酸序列的阳性克隆。hsCry1Ac-A12在成功替换宿主菌HB2151后,经1 mmol•L-1 IPTG诱导表达,于30℃条件下培养过夜。其表达产物经His Trap HP镍亲和柱纯化后SDS-PAGE检测,hsCry1Ac-A12蛋白分子量约为30 kD。通过方阵滴定对抗体浓度进行优化后,利用单链抗体为“捕获抗体”,多抗为“检测抗体”,建立了Cry1Ac双抗夹心ELISA检测方法。在1.25-2.43 μg•mL-1线性检测范围内,线性回归方程为Y=0.2522X+1.2832(R2=0.9564),检测限为1.08 ng•mL-1。【结论】利用磁珠液相筛选方法,建立了针对Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,为快速、准确检测转基因食品中Cry1Ac提供了一种新的检测模式。  相似文献   

农药联合复配在农作物病虫害防治上的研究进展     

徐重新  张江兆  胡晓丹  林曼曼  陈蔚  张霄  刘媛  刘贤金 《江苏农业科学》2023,(4):8-15

病虫害严重威胁了农作物生长发育及农产品质量安全。农药是病虫害防治的关键，但长期滥用不仅加速了病虫害的抗药性，也给生态环境造成极大污染，合理用药是农业可持续发展的必然要求。农药联合复配是提升现有农药对靶标病虫害防治效率的最直接方式，同时通过复配可以减少药用量，也能提高农产品质量安全水平、延缓病虫害抗药性以及减少环境污染。农药联合复配是农药合理优化利用研究的热点。本文按化学-化学农药复配、生物-生物农药复配和生物-化学农药复配3种常规形式进行汇总归类，系统梳理近年国内外有关这3种形式的农药联合复配在常见农作物病虫害防治上的研究状况及典型应用实例；并就复配形式及其应用前景进行展望，特别对农药联合复配未来如何迈向更高效、更安全、更绿色的发展道路以及在探索过程中潜在的技术瓶颈等问题进行探讨、提出应对策略，同时也对农药复配在应用过程中所暴露的可能叠加危害生态环境和非靶标生物等问题表达关注；旨在为推进农药创新利用提供最新参考资料和潜在启发思路。  相似文献   

海绵城市建设体系下的校园景观场地设计——以西农北校为例     

吉楠  弓葶  刘媛 《现代园艺》2019,(1)

校园是城市组成部分中的一大因素,海绵城市建设理念对其有很大的影响,在景观设计过程中也应注重借鉴海绵城市理念。然而众多校园因建成时期久远,未考虑到此。通过分析总结海绵校园改建案例,为西北农林科技大学北校区海绵校园的建设提供参考。  相似文献   

江苏省农村产业融合的现状分析、发展思路与政策建议   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘媛 《江苏农业科学》2019,(15)

我国经济发展进入新常态,资源环境等约束加强,传统农业生产方式受到制约,农村产业融合的发展突破了传统农业生产方式,促进了供给侧结构性改革,是应对经济新常态的必由之路。对江苏省产业融合发展现状的问题进行归纳整理,探讨江苏省农村产业融合发展要以农产品加工产业为引领,科技创新为动力,通过培育新型农业经营主体,加快生产要素流动,推动农业、工业、服务业等产业的有机整合,延长产业链,优化农业产业结构。最后从政策层面提出,推进江苏省农村产业融合要加快体制机制改革与创新、加快基础设施和公共服务平台建设、加快创新农村金融服务方式和加快农村实用人才培育的建议。  相似文献   

论浚县泥咕咕的艺术特色     

刘媛 《广东蚕业》2017,51(6)

文章通过对泥咕咕的概述、题材、造型、色彩、装饰纹样等方面研究,分析农耕时代下民间艺人精湛绝伦的表现手法,并希望把现代审美与古老民俗艺术有效结合,能够更好地顺应现代人的审美需求和保护好这门古老民间艺术文化.  相似文献   

江苏平原生态区高效农业发展模式研究与对策建议     

刘媛 《江苏农业科学》2012,40(7):375-378

从平原地区这个新视角对江苏高效农业发展模式进行研究.由平原生态区高效农业发展现状与特点入手,深入分析了当前平原生态区高效农业发展模式并进行评价,同时提出进一步发展的对策建议,这对促进整个江苏发展现代高效农业的快速发展具有重要意义.  相似文献   

绿豆发酵乳饮料的研制     

张志胜  潘栋  刘媛 《中国乳业》2006,(3):40-42

以绿豆和鲜奶为主要原料，绿豆经脱皮、磨浆、均质等工艺制成绿豆浆，与鲜奶混合发酵后，再与砂糖等调配在一起。经均质、杀菌制成绿豆发酵乳饮料。配方为：绿豆浆的添加量为4％。鲜奶的添加量为30％；再加入0．4％的稳定剂BE-3；乳酸菌接种量为4％-5％。在45℃下发酵4h。  相似文献   

基于δ差异显示法小尾寒羊无角基因的筛选     

刘媛  孙志颖  孙少华 《贵州农业科学》2014,(2):139-141,144

  相似文献   

SELEX技术筛选毒死蜱单链DNA适体   总被引：1，自引：0，他引：1  

雷兆静  张存政  刘媛  王丽  胡秋辉  刘贤进 《江苏农业学报》2012,(1):198-203

试验旨在利用SELEX技术体外筛选毒死蜱的特异性适体。体外合成全长为91 nt的ssDNA文库,以链亲和素修饰的凝胶为载体、毒死蜱为靶分子进行SELEX(配体指数增强系统进化技术)筛选。利用荧光标记法测定适体的筛选效率、亲和力和特异性,通过MFOLD分析软件对亲和力较高的适体进行二级结构预测和结合位点分析。结果表明,经过15轮筛选后,DNA文库的筛选效率达到44.00%;最终获得9条ssDNA适体,其中适体N23对毒死蜱具有最高的亲和力,其结合活性显著高于N23与水胺硫磷、丙溴磷、氧化乐果的结合活性;二级结构表明茎环结构可能是毒死蜱与适体相互作用的结构基础。  相似文献   

温氏附红细胞体PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

王健  刘媛  秦建华  张富梅 《畜牧与兽医》2009,41(12)

本研究旨在建立1种快速准确检测温氏附红细胞体感染的分子生物学诊断方法。根据温氏附红细胞体的16S rRNA基因参考序列的保守区,利用软件Primer Premier 5.0设计合成了1对特异性引物,对温氏附红细胞体的基因组DNA进行PCR检测。结果表明,扩增出1段985bp的DNA序列,EcoRⅠ酶切鉴定得到2条500bp左右的条带,与预期结果一致,说明该方法扩增出了温氏附红细胞体的特异性条带。通过敏感性、特异性、重复性和临床样品检测试验证明,该方法具有特异、灵敏、快速的优点。结果提示,所建立的方法具有较高的特异性和灵敏性,可用于牛附红细胞体病诊断和流行情况监测。  相似文献