利用反相高效液相色谱法测定发酵液中的生物素含量          下载免费PDF全文

蒲跃进  周占琴  杨明明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2007,35(5):73-76

为了利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)更准确地测定发酵液中的生物素含量,以安捷伦Zor-bax SB-C18(4.6 cm×250 cm,5μm)为色谱柱,对液相色谱紫外线检测波长和流动相的溶液配比、K2HPO4离子浓度和pH值进行筛选。结果表明,以体积分数91.5%K2HPO4(0.04 mmol/L)与体积分数8.5%CH3CN混合液为流动相,在pH值为2.5和紫外检测波长为215 nm的条件下,获得的生物素吸收峰面积与质量浓度的线性相关系数达0.9999,生物素加标回收率达99.07%~101.26%,相对标准偏差为0.48%~0.82%。由此可见,在上述条件下高效液相色谱法不仅可用于发酵液中生物素含量的测定,而且操作简便,测定结果可靠。  相似文献   

饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展     

杨明明  陈玉林 《家畜生态》2013,(12):1-7

枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展,利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心,论文对枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展与存在问题进行了简要综述。  相似文献   

枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

段春燕  龚月生  范鑫  杨明明  张云雁  周煌凯  王新国 《西北农业学报》2011,20(1):8-13

构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。  相似文献   

麦芽糖诱导耐碱性木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达     

张云雁  杨明明  周煌凯  段春燕  龚月生 《西北农业学报》2011,20(1):14-17

考察麦芽糖诱导木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌WB700中的表达。以麦芽糖为诱导剂,对诱导质量分数、诱导时机、诱导温度和麦芽糖的添加方式等主要因素进行了分析比较。结果表明,当菌体生长至发酵液吸光值OD600达到1.3时加入终质量分数为4.5%麦芽糖,37℃,持续诱导10 h,木聚糖酶活力达到最高,为56.32 U。通过SDS-PAGE检测对比显示:经麦芽糖诱导表达的木聚糖酶比不加麦芽糖诱导的木聚糖酶表达量高,表达效果更明显。  相似文献   

SO_2和Cl_2气体胁迫对茶条槭4种非酶类保护剂的影响     

杨明明  冯颖  郭太君 《吉林农业》2011,(5):88-89

以三年生茶条槭为试验材料,采用静态熏气处理方法,探讨了SO2和Cl2单一气体胁迫对茶条槭叶片MDA和4种非酶保护剂含量的影响。结果表明：随着SO2和Cl2浓度的升高而MDA、FAA和Pro含量增加;可溶性糖和ASA的含量随着SO2和Cl2胁迫浓度的增加而减少,但低浓度的SO2和Cl2（0.3-1.5mg？m-3）胁迫时较对照增加或与差异不明显,当SO2和Cl2浓度达到0.3mg？m-3以上时则极显著下降;SO2和Cl2对茶条槭的伤害程度为SO2  相似文献   

产纤维素酶枯草杆菌B.subtilis DR的鉴定与酶特性研究     

李旺  杨明明  陈玉林 《饲料研究》2012,(1):33-35

采用形态学观察和16SrDNA保守序列分析相结合的方法对一株产耐热纤维素酶的菌株进行鉴定。形态学观察为芽孢杆菌属革兰阳性菌。序列分析发现该细菌的16SrDNA保守序列与部分枯草杆菌的保守序列的同源性达到99%。结合形态学的观察,将该细菌命名为B.subtilis DR。大量培养获得发酵液中纤维素酶粗酶液,对其性质进行研究表明:该菌产生的纤维素酶为热稳定纤维素酶,最佳的酶促反应温度为50℃,最佳酶促反应的酸碱环境为pH6.5的中性偏酸性环境。在温度70℃下保温处理30 min,该酶仍保留超过70%的酶活力。  相似文献   

大豆GmWRI1a基因启动子克隆及其功能分析     

邵宇鹏  杨明明  包格格  孙英楠  杨强  李文滨  王志坤 《中国油料作物学报》2019,41(4):517-523

为了探究大豆种子油脂合成与储存基因GmWRI1a的调节,分析其启动子功能,从大豆品种东农50基因组中扩增获得GmWRI1a基因转录起始位点上游1669bp的启动子序列,转化拟南芥。GUS染色确定了启动子的有效性,继而根据顺式作用元件的分布,分别扩增得到4个启动子5'端缺失片段1138bp,1087bp,690bp和437bp。4个启动子缺失片段分别转化拟南芥后,通过GUS组织染色结果发现,这些启动子片段能够驱动下游GUS基因表达。GUS酶活表明,启动子存在乙烯、茉莉酸、赤霉素3种激素响应元件,其中乙烯、茉莉酸和赤霉素的响应元件分别分布在-1138^-1087bp、-1087^-690bp和-690^-437bp。  相似文献   

小麦HMW-GS毛细管电泳高效分离体系研究     

王卫东  高翔  何庆梦  姚晓露  刘阳  杨明明  李建芳  杨娜 《麦类作物学报》2018,(5):542-550

小麦高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）与小麦品质密切相关。为构建高效HMW-GS分离体系,以中国春为标准样,通过HPCE(毛细管电泳）方式,在亚氨基二乙酸（Iminodiacetic acid,IDA）缓冲液基础上,系统分析了不同组分浓度、pH以及毛细管电泳参数对HMW-GS分离效果的影响。结果表明,以15% 乙腈（Acetonitrile,ACN）+75 mmol·L^-1 IDA+0.05% 羟丙基甲基纤维素（Hydroxypropyl methylcellulose,HPMC）（pH=2.5）为缓冲液,采用内径25 μm、检测长度27 cm毛细管,PDA检测波长200 nm,分离电压20 kV,运行温度30 ℃,样品10.0 kV进样5 s时,亚基分离效果最好,连续多次、多天重复电泳,均可获得稳定图谱。相比传统的Phos-gly体系,图谱分辨率更好,分离重现性更高（亚基出峰时间RSD值小于0.2%）。  相似文献   

产β-半乳糖苷酶枯草芽孢杆菌BGJ222培养条件的初步优化     

祁艳霞  张小辉  杨明明  陈玉林 《中国饲料》2012,(3):25-27

本文以酵母粉蛋白胨培养基为基础培养基,探讨了不同培养时间、接种量、初始pH、碳源、氮源、金属离子对枯草芽孢杆菌BGJ222表达β-半乳糖苷酶能力的影响。结果表明,菌株BGJ222最大产酶量的培养条件为:初始pH 6.6,接种量2%(V/V),培养温度37℃,培养时间24 h;培养基组成为:酵母粉0.5%(m/V),蛋白胨1.0%(m/V),NaCl 0.5%(m/V),三梨醇1.0%(m/V),MgCl20.5%(m/V)。在此条件下,菌株BGJ222表达β-半乳糖苷酶达到11456.4 Miller,比基础培养基的表达量(860 Miller)提高了12倍。  相似文献   

耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及发酵条件优化     

周煌凯  龚月生  杨明明  张云雁  宋秀平 《饲料工业》2010,31(14)

研究耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中异源表达。从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌BYG5-20中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因xynA,将其构建在大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGJ148中得到重组质粒pGJ148-xynA。采用电转化法将重组质粒pGJ148-xynA转入枯草芽孢杆菌1A747中,得到重组菌B.GJ148-xynA,然后进行诱导表达以及培养基的优化。重组菌GJ148-xynA发酵上清液中木聚糖酶酶活可达93.32IU/ml。耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶基因xynA可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。  相似文献