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克隆新疆野生橡胶草顺式异戊烯转移酶基因,对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究该基因的功能和植物体内天然橡胶合成分子机制奠定基础。采用同源克隆法结合RT-PCR技术获得目的基因,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21并诱导表达。结果表明:该基因开放阅读框为927bp,编码308个氨基酸,推测的蛋白分子质量为34.9ku,理论等电点为8.74;具有cis-异戊烯基转移酶的5个高度保守区,属于cis-IPPS superfamily蛋白家族;系统进化树表明,橡胶草顺式异戊烯基转移酶与短角蒲公英的亲缘关系最近;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。可见,利用RT-PCR技术从橡胶草叶片中克隆得到顺式异戊烯转移酶基因,成功构建原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到表达。 相似文献
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为更好地预防和控制蜜蜂大肚病的发生和蔓延,从患“大肚病”的蜜蜂中分离出致病菌,通过细菌镜检和培养,结果表明:此致病菌为G-球杆菌,不溶血,在普通肉汤培养基上呈乳白色圆形菌落,在SS培养基上不生长;该菌接触酶试验为阳性,不产生H2S,不能还原硝酸盐;经血清鉴定该菌为黄杆菌属.进一步药敏纸片试验分析表明,庆大霉素、硫酸阿米卡星对该菌的半数抑菌量(IC50)分别为8.73和36.92IU·mL-1,该菌对菌必治、环丙沙星高度敏感.用20~30IU·mL-1剂量的庆大霉素可有效地预防“大肚病”的发生和蔓延. 相似文献
47.
以大红番茄、大黄番茄及红牛奶番茄为材料,研究了不同种子消毒方法和基因型对番茄种子萌发的影响,以及激素配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,种子消毒的最好方法是采用3%的次氯酸钠灭菌3min。大红番茄的发芽率最高(86.25%),红牛奶番茄的发芽率较低(38.75%),表明各基因型之间发芽率差异较大。大红番茄和红牛奶番茄最佳的子叶愈伤组织诱导培养基为MS+0.50mg/L IAA+1.0mg/L BA,愈伤组织诱导率分别为81.25%、50.00%;大黄番茄子叶愈伤组织诱导最佳培养基为MS+0.20mg/L IAA+1.00mg/L BA,愈伤组织诱导率为68.75%;大红番茄、大黄番茄及红牛奶番茄茎段愈伤组织诱导最佳培养基均为MS+0.50mg/L IAA+1.00mg/L BA,其愈伤组织诱导率分别为75.50%、68.75%、37.50%。 相似文献
48.
49.
伐根嫁接杨树林根系分布特征 总被引:4,自引:3,他引:1
通过对比研究大兴区的伐根嫁接杨树林分和与其地下和地上部分分别相同的植苗造林杨树林分,得出伐根嫁接杨树林根系的特殊分布特征。采用全挖法获取杨树总根量和根型,采用土柱法获取吸收根(细根≤2mm,粗根210mm)。结果表明:伐根嫁接林根系总干重分别是相同地下和地上部分植苗造林的1.83倍和7.38倍;其根系数量多且粗壮,为水平斜生根型,而植苗造林林分为水平根型;伐根嫁接林总细根量和总粗根量分别比两个植苗造林林分提高了86.27%和224.65%,59.06%和65.86%;与植苗造林相比,伐根嫁接林表层的吸收根垂直和水平分布都表现异常,垂直分布中0~10cm土层的细根分布较多,10~20cm土层的分布较少;水平分布中株间0~20cm土层的分布异常多。该结论为伐根嫁接杨树林的生长优势提供了进一步的微观解释。 相似文献
50.
茶树二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是儿茶素合成途径中的关键酶。本研究采用RT-PCR技术,获得了茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因(CsDFR)的开放阅读框,它编码含347个氨基酸的蛋白质,推测分子量为38.69 kD,等电点为6.02。成功地将该基因重组到表达载体SUMO上,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度;纯化出目的蛋白。利用HPLC-MS方法对重组蛋白进行了体外酶活检测,结果表明目的蛋白具有DFR酶活性,可催化DHQ和DHM的还原反应。 相似文献