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鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。 相似文献
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本实验采用单卵囊分离技术分离纯化球虫,并根据其临床病理变化、潜隐期、最短孢子化时间等指标综合判定其为柔嫩艾美耳球虫。用纯化所得球虫卵囊进行致病性试验,结果表明:该柔嫩艾美耳球虫致病力较强,半数致死量为7.52×104个/只。 相似文献
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为了分离舍饲羊群羊痘病毒并对其进行诊断研究,对山西舍饲羊群疑似羊痘发病羊的口唇痘状痴皮组织提取物进行细胞培养以扩增病毒,对病变细胞用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察,然后进行动物回归实验和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).结果表明:扩增的病毒经连续培养3代后出现规律性细胞病变;用常规HE染色可见细胞中出现由于病毒感染产生的包涵体;动物回归实验表明已分离的病毒可导致动物发生痘性病变:用ELISA 检测出现显色反应,表明样品中存在与酶标抗体发生反应的病毒抗原,样品病毒浓度为6.835 IU·L-1.实验成功诊断并分离出山西舍饲羊群羊痘,为后续研究提供了理论基础. 相似文献
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目的:检测柔嫩艾美耳早熟耐药株对4种磺胺类抗菌药的耐药性,为鸡球虫疫苗的临床应用提供依据。方法:采用鸡体实验法,以最适抗球虫活性百分数(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)四项指标综合判定接种5×104个柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠4种磺胺类抗菌药的耐药性情况。结果:磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的POAA均小于界定值50%,为阳性,只有消炎磺的POAA值大于50%,为阴性。四种药物的RLS和ROP值均为阳性。消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶的ACI值为160-179,具有中等抗药能力,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的ACI值低于160,为阳性,具有完全的耐药性。结论:柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶具有中等程度的抗药性,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠具有完全的耐药性。 相似文献
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【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(SjELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得SjELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号:MG515727,构建该序列的重组表达质粒 pET28-SjELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting 分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集虫体不同发育阶段混合和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过实时定量 PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA(siRNA)于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的siRNA,用于长期RNA干扰(RNAi)试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的SjELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒pET28-SjELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现SjELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。RT-qPCR 发现SjELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。RNAi试验中,与NC组相比,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%(P<0.05)、40.59%(P<0.01)和74.58%(P<0.01);电镜观察发现,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间质增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。【结论】成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分SjELAV-like 1基因序列,且发现该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显著降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖腺的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。 相似文献
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为了解圈舍空气真菌菌群结构,为羊舍选择及环境控制提供依据,应用AGI-30液体空气采样器,以超纯水为采样基质,采集地面平养和高床平养2种结构羊舍的气载真菌,经马铃薯葡萄糖肉汤富集培养后提取DNA,进行ERIC-PCR指纹图谱分析。结果显示:2种结构羊舍的气载真菌菌群结构存在差异,但有一些相同的优势菌群;高床平养羊舍的多样性指数高于地面羊舍,但优势度指数偏低;相似性聚类分析显示,相同结构羊舍同一季节气载真菌菌群结构相对稳定,不同季节之间真菌菌群结构变化较大。结果表明,羊舍内气载真菌菌群结构变化较大,且受羊舍结构和季节的影响。 相似文献
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过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对羊舍环境真菌的消毒效果评价 总被引:1,自引:0,他引:1
为了测定过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对环境真菌的消毒效果,为其使用提供依据,以黑曲霉、青霉分离株和白色念珠菌标准株为指示菌,应用5种消毒剂分别进行悬液定性、定量杀灭试验,并应用复方消毒剂进行了羊舍现场消毒效果监测。结果显示:复方消毒剂在推荐中剂量组作用30 min可完全杀灭指示菌,而其他4种消毒剂在推荐中、高剂量组不能完全杀灭3种指示菌;复方消毒剂对真菌消毒合格所需的有效成分浓度均低于其他消毒剂;复方消毒剂以1:256稀释、20 mL/m~3剂量喷雾消毒,对羊舍气载真菌作用6 h后的效果最佳(杀灭率为47.8%~68.1%),对地面、墙壁和笼具等表面载体消毒30 min的杀灭率分别为89.3%、72.3%和88.7%,可维持24 h以上。结果表明,过氧乙酸戊二醛复方消毒剂在实验室消毒和现场消毒试验中1:256稀释作用10 min即可高效杀灭真菌孢子,比市售常见消毒剂所需有效成分浓度更低,用时更短,但在生产应用中应根据实际情况适当加大使用浓度和剂量。 相似文献
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日本血吸虫成熟雌虫所产虫卵是造成宿主病理损害及疾病再传播的根源,因此从控制雌虫生殖发育入手对控制血吸虫病的发生具有重要意义。本研究通过5′-RACE和3′-RACE获得了在发育阻遏雌虫中高表达的SjELAV-like 2基因的全长序列,并对其进行克隆和表达,制备了相应的多克隆抗体,Western blotting分析结果表明该蛋白质具有良好的反应原性;实时定量分析发现该基因在血吸虫童虫时期高表达,成熟后趋于稳定,且在雌虫体内的表达量显著高于同时期合抱雄虫;该基因在雄虫体内的表达量基本恒定;免疫组化研究发现,在血吸虫成虫雌虫该蛋白主要定位于虫体体被。利用RNA干扰技术对该基因的生物学功能进行了初步研究,RT-qPCR结果显示,RNAi可明显抑制SjELAV-like 2基因的表达;对该基因表达的长期干扰导致受干扰虫体产卵能力及卵胚孵化能力的下降,统计分析发现,干扰组宿主每克肝荷卵减少达39.67%(P0.01),虫卵的卵胚孵化减少达75.56%(P0.01)。扫描电镜观察发现,与NC组相比,siRNA干扰组虫体体被上泡状突出物明显增多,这些结果表明SjELAV-like 2基因对日本血吸虫生长发育具有重要影响。 相似文献